跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
生物化学杂志。2012年11月9日；287(46): 39115–39124.
2012年9月20日在线发布。 数字对象标识：10.1074/jbc。M112.409581型
预防性维修识别码：项目经理3493952
PMID：22995914

CXCL12/CXCR4蛋白信号转轴通过胞外调节激酶和Akt激酶介导的核因子κB活化诱导胰腺癌细胞中的Sonic Hedgehog表达

双向肿瘤-肿瘤相互作用的意义*保存图片、插图等的外部文件。对象名称为sbox.jpg
阿杰·辛格,‡§,1 苏米特·阿罗拉,‡,2 阿伦·巴德瓦吉,‡,2 桑杰夫·斯里瓦斯塔瓦,‡ 马达维·P·卡达克亚, Bin Wang（王斌）,‖ 威廉·格里斯,** 劳里·B·欧文,‡和西玛·辛格‡,三
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

背景：CXCL12/CXCR4和hedgehog通路主要以旁分泌方式作用，在胰腺癌病理生物学中发挥重要作用。

结果：CXCL12/CXCR4信号调节刺猬配体（声波刺猬）在胰腺癌细胞中的表达。

结论：我们的发现表明CXCL12/CXCR4和刺猬途径之间存在一种新的分子联系。

意义：我们的数据为胰腺癌中积极的双向肿瘤-基质相互作用提供了分子基础。

关键词：趋化因子、CXCR4、刺猬、MAP激酶（MAPKs）、NF-κB、胰腺癌、蛋白激酶

摘要

最近的证据表明肿瘤-基质相互作用在胰腺癌病理生物学中起着重要作用。由基质细胞大量产生的趋化因子CXCL12（基质细胞衍生因子1（SDF-1））可促进胰腺癌细胞的进展、转移和化疗抵抗。另一方面，胰腺肿瘤细胞衍生的声波刺猬（SHH）主要作用于基质细胞，诱导结缔组织增生，因此对肿瘤发生和治疗结果具有旁分泌作用。在这项研究中，我们检测了这两种在胰腺癌中具有病理意义的蛋白质之间的联系。我们的数据表明，CXCL12导致胰腺癌细胞中SHH的剂量和时间依赖性上调。CXCL12诱导的SHH上调是通过受体CXCR4特异性介导的，并且依赖于下游Akt和ERK信号通路的激活。Akt和ERK通过诱导其抑制蛋白IκB-α的磷酸化和失稳，共同促进NF-κB的核积累。使用显性阴性IκB-α、SHH启动子（缺失突变）报告子和染色质免疫沉淀分析，我们证明CXCL12暴露增强了NF-κB与SHH启动因子的直接结合，并且抑制NF-kb B激活可消除CXCL12诱导的SHH表达。最后，我们的数据表明，CXCR4和SHH在人类胰腺癌组织中的表达具有很强的相关性，而在正常胰腺中未观察到它们的表达。总之，我们的数据揭示了胰腺癌中SHH异常表达的新机制，并确定了促进肿瘤-基质双向相互作用的分子联系。

关键词：趋化因子、CXCR4、Hedgehog、MAP激酶（MAPKs）、NF-κB、胰腺癌、蛋白激酶

介绍

过去十年来，我们对胰腺癌生物学的理解取得了重大进展。然而，它仍然是最致命的恶性肿瘤之一(1–三). 目前，它是美国癌症相关死亡的第四大原因，其发病率每年都在增加(4). 新的数据表明，肿瘤与基质的相互作用在胰腺癌发展的早期和晚期发挥着重要作用(5,6). 事实上，肿瘤细胞在恶性进展过程中重塑了周围的基质，并建立了相互的功能联系，以协同促进其生长。尽管认识到了这一点，但我们仍处于从分子水平理解胰腺肿瘤和基质细胞之间这一重要的“给予和接受”关系的初级阶段。

Hedgehog信号在胰腺癌的病理生物学中起着重要作用(7). 越来越多的证据表明，刺猬通路的配体依赖性激活通常通过肿瘤衍生的刺猬信号（声波刺猬（SHH））发生在基质室中4配体）表型最终导致结缔组织增生(8). 最近研究表明，广泛的结缔组织增生是胰腺癌化疗耐药的潜在原因之一(9). 抑制刺猬通路会耗尽肿瘤相关基质组织，增强肿瘤内血管和药物积聚，从而导致疾病稳定。尽管这些影响是暂时的，但它们清楚地强调了肿瘤基质和旁分泌刺猬信号的重要性。

CXCL12/CXCR4通路对许多正常细胞过程至关重要，包括造血、器官生成和血管形成，也被癌细胞用来促进转移、生长和生存过程(10,11). CXCR4在大多数胰腺癌和浸润前肿瘤病变中表达升高，提示其在胰腺肿瘤的发病机制和进展中的作用(12,13). CXCL12是CXCR4的唯一配体，也由肿瘤相关基质细胞大量产生，并通过激活CXCR4促进胰腺癌的进展和转移(14,15). 胰腺癌干细胞表达CXCR4对其侵袭和转移特性也至关重要(16). 重要的是，在最近的一项研究中，我们证明CXCL12-CXCR4信号通过激活生存途径，使吉西他滨对胰腺癌细胞产生耐药性(17).

上述发现清楚地表明CXCL12/CXCR4和hedgehog通路在胰腺癌病理生物学中的重要作用。在本研究中，我们检测了胰腺癌中这两种病理意义的通路之间的分子关联。我们的发现首次证明CXCL12/CXCR4信号轴调节胰腺癌细胞中SHH的表达。我们的数据显示，CXCL12通过CXCR4特异性地发出信号，激活Akt和ERK，然后磷酸化IκB-α。这种磷酸化将IκB-α导向降解途径，导致NF-κB的释放和核移位，然后直接与SHH公司发起人。我们还提供数据证明CXCR4和SHH在胰腺癌临床标本中的相关表达，而在正常胰腺组织中未检测到它们的表达。因此，我们的研究结果表明，旁分泌作用的趋化因子和刺猬通路之间存在一种新的分子联系，它们表明存在一种活跃的双向肿瘤-基质相互作用。

实验程序

抗体、siRNA和质粒

抗ERK1/2（兔单克隆）、pERK1/2和IκB-α（鼠单克隆）的抗体来自Cell Signaling Technology（马萨诸塞州贝弗利）。针对CXCR4（免疫印迹分析用兔多克隆）、CXCR4和SHH（兔单克隆）的抗体分别来自Abcam（马萨诸塞州剑桥）和Millipore（加利福尼亚州特梅库拉）。抗Akt（兔单克隆）、p-Akt和CXCR7（兔多克隆）的抗体来自Epitomics（加利福尼亚州伯林盖姆）。β-肌动蛋白（小鼠单克隆）抗体购自Sigma-Aldrich（密苏里州圣路易斯）。辣根过氧化物酶结合二级抗体来自圣克鲁斯生物技术公司（加州圣克鲁斯）。所有非靶向（ON-target加非靶向池）和靶特异性（ON-target加SMART池）siRNA和转染试剂（DharmaFECT）均来自Dharmacon（Lafayette，CO）。SHH启动子报告质粒（pGL3-SHH）如前所述(18). IκB-α显性阴性载体集（pCMV-IκB-α和pCMV-IκA-αM）来自Clontech Laboratories（Mountain View，CA），pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]和pRL-TK质粒来自Promega（Madison，WI）。pcDNA3.1来自Invitrogen。Jim Woodgett实验室的HA蛋白激酶B（PKB）T308D S473D pcDNA3和William Hahn实验室的pBabe-Puro-MEK-DD通过Addgene（马萨诸塞州剑桥）获得（质粒编号分别为14751和15268）。

细胞系、培养条件和胰腺组织标本

胰腺癌细胞系（MiaPaCa、HPAF和ASPC1）购自ATCC，Colo357细胞系由Subhash Chauhan博士（南达科他州大学/桑福德健康学院）提供。所有细胞系在补充有10%FBS（Atlanta Biologicals，Lawrenceville，GA）和100μ米将青霉素和链霉素（Invitrogen）分别置于5%CO的湿化空气中237°C时。通过序列串联重复序列（STR）基因分型和明确标记（MUC1、MUC4、Vimentin和DPC4）的存在进行细胞系验证。根据制造商的协议，连续监测细胞的典型形态，并使用MycoSensorPCR检测试剂盒（Stratagene，目录号302109）间歇性检测支原体。根据机构审查委员会批准的方案，通过位于伯明翰的阿拉巴马大学合作人类组织网络获取冷冻胰腺组织样本（正常和恶性）。

治疗和转染

细胞在6孔或12孔培养板中的完全培养基中培养，直至达到50-60%的融合。随后，将细胞在无血清培养基中培养过夜，然后在不同时间间隔的类似条件下使用不同剂量的CXCL12（明尼苏达州明尼阿波利斯研发系统公司）进行处理（如相关图例所示）。为了剖析特定信号通路的作用，用20μ米LY294002（PI3K抑制剂）和25μ米PD98059（ERK抑制剂）（细胞信号技术）单独或联合使用。为了中和CXCL12结合，用CXCR4中和抗体预处理细胞60分钟。为了击倒CXCR4系列和CXCR7系列，细胞在6孔板中培养并瞬时转染50n米根据制造商的方案使用DharmaFECT的非靶或靶特异性siRNA。为了实现Akt和ERK的组成性激活，将Akt与MEK组成性活性突变质粒单独或联合转染细胞。空白质粒用于对照转染。采用FuGENE（Roche）作为质粒转染试剂。

RNA分离和RT-PCR

使用RNeasy纯化试剂盒（Qiagen）分离总RNA，然后按照制造商的指示，使用高容量cDNA逆转录试剂盒（加利福尼亚州卡尔斯巴德Applied Biosystems）合成cDNA。使用SYBR Green MasterMix（Applied Biosystems）在iCycler系统（Bio-Rad）上对96个板进行实时定量PCR。使用了以下PCR引物对：SHH，5′-ACCGAGGGCTGGGACGAGAGA-3′（正向）和5′-ATTTGGCCGCCAGAT-3′（反向）以及GAPDH，5’-gctgtgaaagtccaa-g-3′（向前）和5’-ggtcagctcctggaagata-3′（逆向）。实时PCR检测的热条件如下：循环1，95°C，10分钟；循环2，（×40），95°C持续10 s，58°C持续45 s。阈值循环（CT型)SHH值根据C标准化T型用2-ΔΔCt方法。

ELISA检测

按照制造商的协议，以不同的时间间隔（24–72 h）收集CXCL12处理的胰腺癌细胞的培养上清，离心，并使用人类SHH-特异性ELISA试剂盒（Abcam）进行ELISA。

细胞核和细胞质分馏

细胞质和细胞核提取物的制备使用细胞核提取物试剂盒（Active Motif，Carlsbad，CA）进行。简言之，用1ml冰镇PBS/磷酸酶抑制剂（Roche）处理后清洗细胞，在500μl低渗缓冲液中溶解，然后在14000×克在4°C下持续30秒。收集上清液（细胞质部分）后，将颗粒重新悬浮在50μl完全溶解缓冲液中，并在14000×克在4°C下保持10分钟。上清液（核部分）储存在−80°C。

免疫印迹分析

如前所述进行免疫印迹(19). 简言之，通过在10%SDS-PAGE上进行电泳，将总蛋白裂解物或分馏蛋白裂解物（20–60μg）分离，并转移到PVDF膜上。使用针对各种蛋白质的特异性抗体和SuperSignal West Femto Maximum敏感性底物试剂盒（Thermo Scientific，Logan，UT）对印迹进行标准免疫检测。该信号是使用LAS-3000图像分析仪（日本东京富士照片胶片公司）检测到的。

启动子报告分析

用1μg pGL4.32（luc2P/NF-κB-RE/Hygro）或pGL3-SHH与0.25μg pRL-TK（含有动物海肾胸腺嘧啶激酶（TK）启动子下游的荧光素酶基因）。转染24小时后，如前所述，用CXCL12处理细胞24小时，并在报告者裂解缓冲液中收集（威斯康星州麦迪逊市普罗米加）。萤火虫和雷尼利亚根据制造商的说明，使用双荧光素酶检测试剂盒（Promega）测量荧光素酶活性。荧光素酶活性标准化为萤火虫荧光素酶与雷尼利亚荧光素酶单位。为了进一步证实NF-κB在CXCL12/CXCR4诱导的SHH表达中的作用，我们使用Quikchange XL定点突变试剂盒（安捷伦科技公司，加利福尼亚州圣克拉拉）突变了最小CXCL12-应答报告构建物（−102到−1）中假定的NF-κ的结合区域。所用引物序列如下：正向，5′-ctgggtgggagcggtgtgg-tgacacccgcgcggggcagg-3′，反向，5′-ccttgccccgcgccgg-ctgtcacacacaccgccccag-3′。如上所述，使用野生型或突变报告质粒测量CXCL12治疗后的NF-κB转录活性。

ChIP分析

使用ChIP IT酶试剂盒（Active Motif）对胰腺癌细胞（未经处理或用CXCL12处理）进行ChIP分析。简言之，用多聚甲醛（37%）交联DNA-蛋白，然后进行酶切DNA。将抗-NF-κB/p65抗体添加到剪切的DNA-蛋白质（染色质）复合物中。添加正常兔IgG作为背景对照抗体。免疫沉淀后，交联被逆转，蛋白质被蛋白酶K消化，DNA被分离用于PCR分析。所用引物组合如下：SHH，5′-ACCAAACTCCGATGTTCC-3′（正向）和5′-GTGGCTCTCTTTTGCTTC-3’（反向）。输入DNA（未经免疫沉淀的交联染色质）和阴性对照抗体沉淀DNA分别用作阳性和阴性对照。

结果

CXCL12诱导胰腺癌细胞SHH表达

研究了CXCL12对四种胰腺癌细胞系（HPAF、Colo357、AsPC1和MiaPaCa）SHH表达的影响。我们观察到CXCL12治疗胰腺癌细胞时SHH在转录和蛋白水平上的剂量依赖性上调(图1A类). 最低剂量为25 ng/ml时，检测到SHH诱导率为2.0至3.0倍，而较高剂量的CXCL12则进一步增加（超过10倍）。在时间进程分析中，我们观察到早在治疗后4小时，在mRNA和蛋白质水平上SHH的诱导(图1B类). SHH的表达随着暴露时间的延长而增加，暴露于CXCL12 24小时后SHH的上调达到最大值，之后降低。由于SHH是一种分泌蛋白，我们还测量了其在CXCL12处理的胰腺癌细胞培养液中的水平。我们的数据表明，在1至3天的时间里，分泌的SHH在培养基中大量积累(补充图1). 总之，这些数据表明CXCL12以剂量和时间依赖性的方式上调胰腺癌细胞中SHH的表达。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zbc0471229710001.jpg

CXCL12诱导人胰腺癌细胞SHH的表达。用不同剂量的CXCL12（0–200 ng/ml）处理6孔板中未充分生长的胰腺癌细胞24小时(A类)或在指定的（0–48小时）时间间隔内使用恒定剂量（100 ng/ml）的CXCL12(B类). 提取总RNA和蛋白质，分别通过定量RT-PCR和免疫印迹分析检测SHH的表达。采用GAPDH（定量RT-PCR）和β-肌动蛋白（免疫印迹分析）作为内部对照。CXCL12在转录和蛋白质水平诱导SHH的剂量和时间依赖性表达。误差线表示三等分的平均值±S.D.*，第页< 0.05; **,第页<0.01。

CXCR4而非CXCR7介导CXCL12诱导的SHH表达

CXCL12可以通过与其两个受体CXCR4和CXCR7结合而产生刺激作用(10,11). 因此，我们接下来检查了这两种受体在胰腺癌细胞系中的表达。在所有四种胰腺癌细胞系中均观察到CXCR4和CXCR7的表达（数据未显示）。随后，我们研究了这两种趋化因子受体中哪一种在CXCL12治疗后介导SHH诱导。为此，我们在使用CXCL12治疗之前，通过RNA干扰两种胰腺癌细胞系（MiaPaCa和Colo357）中CXCR4和CXCR7的表达。CXCR4和CXCR7靶向siRNA导致基因表达的特异性和有效沉默(图2). 此外，我们观察到CXCL12诱导的SHH表达仅在转染CXCR4靶向siRNAs的细胞中被消除，而CXCR7沉默对SHH诱导没有任何抑制作用(图2). 有趣的是，我们还观察到CXCL12处理的胰腺细胞中CXCR4的表达增加，表明存在正反馈调节。早些时候在胶质瘤细胞中也有类似的观察(20). 为了进一步确定CXCR4在介导CXCL12诱导的SHH上调中的作用，我们在用CXCL12进行诱导之前用CXCR4中和抗体处理细胞。我们观察到，用CXCR4中和抗体预处理胰腺癌细胞可以消除CXCL12诱导的SHH上调(补充图2). 总之，这些数据表明CXCR4而不是CXCR7介导CXCL12诱导的胰腺癌细胞SHH上调。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710002.jpg

CXCL12诱导的SHH表达是通过胰腺癌细胞中的CXCR4介导的。用非靶向性瞬时转染MiaPaCa和Colo357细胞(NT公司)或CXCR4和CXCR7靶向的siRNA。转染24小时后，用CXCL12（100 ng/ml）处理细胞，再持续24小时。分离总蛋白并进行免疫印迹分析，以评估CXCR4、CXCR7和SHH的表达。β-actin作为内部对照。数据表明靶向特异性siRNAs可特异性沉默CXCR4和CXCR7，并清楚地证明CXCL12诱导的SHH表达是通过胰腺癌细胞中的CXCR4特异性介导的。

抑制CXCL12诱导的Akt和ERK激活可消除SHH上调

接下来，我们开始研究CXCL12诱导SHH表达中涉及的效应器信号通路。CXCL12诱导受体磷酸化，从而导致构象变化，随后激活与受体胞内结构域结合的异源三聚体G蛋白复合物，从而启动下游信号传导(11). 我们和其他人早些时候曾报道过，CXCL12治疗胰腺癌细胞会激活Akt和ERK(17,21,22). CXCL12对Akt和ERK的激活最早发生在1分钟，治疗后30分钟开始减弱(补充图3A类). 因此，为了研究这些信号节点在CXCL12诱导SHH表达中的作用，我们在用CXCL12刺激胰腺癌细胞之前，用Akt（LY294002）和ERK（PD98059）的特异性药物抑制剂治疗胰腺癌细胞。对提取蛋白质的免疫印迹分析表明，CXCL12诱导的Akt和ERK磷酸化受到各自药物抑制剂的有效和特异性抑制(图3,上部面板). 此外，我们观察到，Akt或ERK的抑制会导致CXCL12诱导的SHH表达的消失，而它们的联合抑制会导致更有效的抑制(图3,下部面板). 总之，这些发现表明Akt和ERK途径共同介导CXCL12诱导的SHH上调。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc047122971003.jpg

CXCL12诱导的胰腺癌细胞SHH表达依赖于Akt和ERK的下游激活。用Akt抑制剂预处理胰腺癌细胞（MiaPaCa和Colo357）(LY294002型, 20 μ米)或ERK抑制剂(PD98059型, 25 μ米)1 h，然后用CXCL12（100 ng/ml）治疗15 min或24 h。分离总蛋白，并用免疫印迹分析检测Akt、p-Akt，ERK、p-ERK（CXCL12暴露15 min后）和SHH（暴露24 h后）的表达。β-actin作为负荷对照。数据表明抑制剂的选择性功效，并证明CXCL12暴露后SHH的诱导是通过Akt和ERK途径实现的。

CXCL12诱导的Akt和ERK活化促进核聚积和NF-κB转录活性

为了进一步研究Akt和ERK的下游，我们将重点放在NF-κB上，早先已经证明其被CXCL12激活(17)并参与SHH的转录调控(23). 我们观察到CXCL12治疗后胰腺癌细胞中NF-κB的核聚积随时间而增强，这与细胞质水平的降低相关(补充图3B类). 同样，我们还观察到CXCL12治疗的胰腺癌细胞中NF-κB应答启动子的转录活性增加（数据未显示）。当我们在将胰腺癌细胞（MiaPaCa和Colo357）暴露于CXCL12之前，用Akt和ERK抑制剂单独或联合治疗时，观察到NF-κB的核积聚减少(图4A类). 这些数据通过Akt和/或ERK抑制剂处理的胰腺癌细胞中NF-κB的细胞质水平增加得到证实(图4A类). 为了进一步证实Akt和ERK在NF-κB易位中的作用，我们用Akt的活性突变体和MEK（ERK的上游激酶）转染胰腺癌细胞。我们观察到NF-κB在活化的Akt-和/或MEK表达细胞中的核定位增强，这也与SHH表达增加相关(补充图4). 为了研究激活Akt和/或ERK后NF-κB核累积减少的原因，我们分析了治疗胰腺癌细胞的细胞质提取物，以测定IκB-α水平。IκB是一种核因子-κB的生物抑制剂，将其隔离在细胞质中的非活性复合物中(24). 我们观察到，CXCL12治疗导致IκB-α水平急剧下降，这与其磷酸化的伴随增加有关，因此表明暴露于CXCL12后IκBα的不稳定。在用CXCL12刺激之前用Akt和/或ERK抑制剂预处理的细胞中，这种作用被消除(图4A类). 为了进一步研究这一观察的功能结果，我们检查了Akt和/或ERK的抑制是否也抑制了CXCL12诱导的NF-κB转录活性。为此，我们检测了CXCL12在Akt和ERK抑制的胰腺癌细胞中诱导NF-κB应答启动子的转录激活。我们观察到，抑制Akt和/或ERK覆盖了CXCL12诱导的NF-κB应答启动子转录活性的增加(图4B类). 总之，这些数据证实了Akt和ERK通路在CXCL12诱导的NF-κB活化中的作用。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710004.jpg

CXCL12诱导的Akt和ERK的激活促进胰腺癌细胞核聚积和NF-κB的转录活性。 A类，胰腺癌细胞用Akt抑制剂预处理(LY294002型, 20 μ米)或ERK抑制剂(PD98059型, 25 μ米)1小时，然后用CXCL12（100 ng/ml）治疗。总计，核能(努克)和细胞质(细胞)在CXCL12治疗8小时后制备提取物，以检查对NF-κB/p65、p-IκB-α和IκBα的影响。通过免疫印迹分析检测对各种蛋白质的影响。层粘连蛋白（核组分）和α-微管蛋白（细胞质组分）用作负荷对照。B类，将细胞与NF-κB反应性或对照报告质粒瞬时共转染24 h。随后，用Akt和ERK抑制剂对细胞进行预处理（1 h），并用CXCL12刺激细胞24 h雷尼利亚检测处理细胞中荧光素酶的活性，以分别测量NF-κB转录活性和转染效率。数据以归一化荧光素酶单位（萤火虫/雷尼利亚荧光素酶）。误差线表示三倍±S.D.*的平均值，第页≤ 0.01.

抑制NF-κB抑制CXCL12诱导的SHH上调

观察到CXCL12诱导Akt-/ERK介导的NF-κB活化后，我们接下来评估了NF-κ的B在SHH上调中的作用。为此，我们使用了一种耐降解的IκB-α突变体，该突变体在32和36个位置携带丝氨酸-丙氨酸突变，因此不能对上游激酶刺激进行磷酸化。用WT或突变体转染胰腺癌细胞(MUT公司)检测IκB-α以及CXCL12治疗对NF-κB细胞分布的影响。虽然CXCL12在IκB-α-WT转染细胞中诱导了IkB-α的大量磷酸化和降解，但IκBα-MUT转染的细胞表现出有限的IκB-α磷酸化和退化(图5A类). 因此，在IκB-α-MUT转染的胰腺癌细胞中，NF-κB仍被隔离在细胞质中，而IκB-α-WT转染和CXCL12处理的胰腺癌细胞核中观察到NF-κ的大量定位。当我们检测NF-κB激活阻断剂对CXCL12诱导SHH上调的作用时，我们观察到，在转染IκB-α-MUT的胰腺癌细胞中，它被显著抑制(图5B类). 为了进一步证实NF-κB在CXCL12上调SHH转录中的作用，我们利用SHH启动子（缺失突变）报告质粒携带SHH开放阅读框上游的各种序列(18). 我们观察到SHH启动子的−102到−1之间的区域包含NF-κB结合位点，对CXCL12诱导的反式激活至关重要(图6,A类和B类). 接下来，我们通过定点突变使最小应答启动子中假定的NF-κB结合位点发生突变，并发现这导致CXCL12诱导的转录活性消失(补充图5). 最后，我们发现NF-κB直接与SHH启动子结合，并且在CXCL12处理的细胞中表现出更强的结合(图6C类). 总之，这些发现证实CXCL12通过Akt和ERK介导的NF-κB激活实现SHH上调。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710005.jpg

抑制NF-κB/p65激活可消除CXCL12诱导的胰腺癌细胞SHH表达。将IκB-α野生型或IκBα突变质粒转染在6孔板中生长到亚融合状态的胰腺癌细胞。24小时后，用CXCL12（100 ng/ml）处理细胞8小时（针对NF-κB、IκB-α和p-IκB-α）和24小时（针对SHH）。总计，核能(Nuc（数字）)和细胞质(细胞)制备提取物，并对NF-κB/p65、p-IκB-α（S32/36）和IκBα的影响(A类)和SHH(B类)通过免疫印迹分析进行测定。层粘连蛋白（核组分）、α-管蛋白（细胞质组分）和β-肌动蛋白（总蛋白）用作负荷对照。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710006.jpg

NF-κB与SHH启动子的直接结合对于CXCL12诱导SHH表达至关重要。 A类，胰腺癌细胞与含有SHH启动子缺失突变体下游萤火虫荧光素酶基因的质粒和对照质粒共转染雷尼利亚荧光素酶质粒。转染24小时后，用CXCL12（100 ng/ml）再处理细胞24小时雷尼利亚分析荧光素酶活性，并将数据表示为相对于未处理细胞的标准化倍数差异（平均值±S.D。；n个= 3; *,第页≤ 0.01).B类，SHH启动子区域（-1至−102）包含NF-κB结合位点，描述了ChIP分析中使用的引物的序列和位置。C类用CXCL12（100 ng/ml）处理胰腺癌细胞，并用甲醛交联蛋白质和DNA。交叉连接的染色质被剪切并免疫沉淀(IP（IP）)抗NF-κB/p65或非特异性IgG。使用SHH启动子特异性引物对免疫沉淀的染色质进行PCR扩增，并通过电泳解析扩增产物。

CXCR4和SHH在胰腺癌组织中的相关表达

为了确定临床病例中CXCR4和SHH的相关性，我们检测了它们与CXCR7在一组有限的正常人蛋白裂解物中的表达(n个=7）和癌症(n个=21）胰腺组织。我们的研究表明，在正常胰腺样本中没有CXCR4或SHH的表达，而在七个组织中的两个组织中检测到CXCR7的低表达(图7A类). 另一方面，在所有胰腺癌组织中检测到CXCR4的可变表达（从低到高），而有一例CXCR7均为阴性(第12项)和SHH(抄送8) (图7A类). 接下来，我们进行密度测定以估计CXCR4、CXCR7和SHH的表达水平，并对所得数据进行皮尔逊相关系数分析。我们的分析表明CXCR4和SHH之间有很强的相关性(第页= 0.863,第页≤0.0001），而CXCR7和SHH之间没有显著相关性（0.16，第页= 0.4889) (图7B类). 这些发现提示胰腺癌中CXCL12/CXCR4和hedgehog通路之间存在临床相关性。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710007.jpg

胰腺癌组织中CXCR4和SHH的表达相关。 A类在正常人中检测CXCR4、CXCR7和SHH的表达(N1-N7号)和胰腺癌(C1-C21号机组)蛋白质水平的组织通过Western blot分析。在正常胰腺样本中没有CXCR4或SHH的表达，而在七个正常组织中的两个组织中检测到CXCR7的低表达。在大多数或所有胰腺癌组织中检测到CXCR4、SHH和CXCR7的可变表达（从低到高）。β-actin作为负荷对照。B类用密度法定量免疫反应条带的强度。对CXCR4、CXCR7和SHH表达的归一化密度测定值进行皮尔逊相关系数（R）分析。我们的分析表明CXCR4和SHH之间有很强的相关性(第页= 0.863,第页<0.0001），而CXCR7和SHH之间没有显著相关性(第页= 0.16,第页= 0.4889).

讨论

人们对确定微环境控制在癌症病理生物学中的重要性重新产生了兴趣。现在人们已经认识到，微环境在癌症进展、转移和治疗抵抗中起着重要作用(25,26). 这导致了科学工作的重大转变，以确定和表征促进肿瘤细胞与微环境之间相互作用的分子因素和途径。趋化因子CXCL12通过几种不同的途径作用于趋化性、细胞存活和/或增殖(11,17). 在这项研究中，我们描述了基质细胞衍生的CXCL12诱导胰腺癌细胞SHH表达的分子途径(图8). CXCL12通过CXCR4发出信号，激活Akt和ERK途径，然后诱导IκB-α的磷酸化和不稳定。因此，NF-κB被释放，转位到细胞核，与SHH启动子结合，从而直接上调SHH表达。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为zbc0471229710008.jpg

CXCL12/CXCR4与刺猬途径旁分泌相互作用的拟议分子模型。基质细胞分泌的CXCL12与胰腺癌细胞上的受体CXCR4结合。由此启动的下游信号导致Akt和ERK激活，导致IκB-α磷酸化和失稳。因此，NF-κB在细胞核中释放和积累。核NF-κB直接结合SHH启动子并诱导SHH表达。该模型建立了Akt/ERK-IKK-IkB-NF-κB级联在CXCL12诱导SHH表达中的作用。

刺猬信号在刺猬配体（SHH和其他）与其受体（patched，PTCH）结合时被激活，从而减轻patched对另一种跨膜蛋白平滑（SMO）的抑制作用(27,28). 这引发了一系列下游信号事件，最终导致Gli转录因子的核移位及其靶基因的调控(27,28). 恶性条件下的异常刺猬激活通过多种机制发生，包括受体和效应信号分子的基因突变、配体的异常表达以及Gli转录因子的非规范上调(29–35). SHH在胰腺的侵袭前肿瘤和恶性胰腺导管上皮细胞中表达，但在正常胰腺中不表达(34). 最近的研究结果明确表明SHH在胰腺癌的发生和发展中起着作用。它要么通过自分泌信号作用，导致肿瘤干细胞的选择性激活，要么通过旁分泌机制影响基质细胞(8,36–38). 最近在一项使用KPC的多中心研究中测试了后一种机制的治疗适用性(喀斯特G12D系列/+;Trp53基因172H兰特/+;Pdx-1-Cre公司)老鼠(9). 研究表明，小分子拮抗剂对刺猬信号的抑制通过影响肿瘤基质和血管来改善肿瘤部位的药物传递。在另一项研究中，抑制刺猬信号传导延长了基因工程小鼠的生存期，并消除了系统性转移(37). 因此，本研究观察到CXCL12上调SHH，揭示了CXCL12在胰腺癌中的病理生物学作用的新机制，因此具有重要的翻译价值。

在大多数情况下，有多种趋化因子配体和/或其受体(10). CXCL12/SDF-1与受体CXCR4和CXCR7结合，启动其下游信号传导(39). 另一方面，CXCR4将CXCL12作为其唯一配体，而CXCR7可以与另一种趋化因子CXCL11结合(10). 小鼠敲除研究已确定CXCL12、CXCR4和CXCR7在造血、血管形成和心脏发育中的关键功能(40–42). 尽管对CXCR7下游的CXCL12信号的了解不多，但相信CXCR4和CXCR7都可以赋予不同的功能。事实上，最初认为CXCR7主要作为CXCL12清除剂，从而对CXCL12-CXCR4信号进行负调控(43,44). 研究表明，CXCR7与CXCR4形成异二聚体，并改变CXCR4/G蛋白复合物的构象以抑制其信号传导(45). 我们的数据清楚地表明，CXCL12上调SHH是通过CXCR4特异性介导的，从而进一步强调了胰腺癌细胞中该信号节点的功能意义。

CXCL12与CXCR4的结合诱导不同的信号通路，这些通路独立或相互干扰，促进多种细胞和分子反应(11). 重要的是，我们和其他人已经明确了ERK和Akt通路在通过直接和间接机制促进胰腺癌增殖、生存、侵袭和化疗抵抗中的重要作用(15,17,22,46). 在我们的研究中，CXCL12上调SHH对ERK和Akt的依赖性进一步增加了受这些途径影响的表型反应的多样性。这些反应是由NF-κB介导的，它是各种炎症反应的中介，在胰腺癌中异常激活(47,48). NF-κB的ERK和Akt依赖性激活与IκB-α的磷酸化和降解增强相关，IκB是一种NF-κ的抑制剂，可将其隔离在细胞质中。其他人早些时候已经报道了Akt和ERK激活NF-κB的类似机制，这可能涉及IκB激酶（IKK）的磷酸化，IKK是一种磷酸化IκB抑制剂蛋白的激酶(21,49). NF-κB通过其启动子的直接结合和反式激活在SHH调节中也有报道。因此，我们的数据与这些观察结果一致，并为NF-κB在胰腺癌中的病理生物学意义提供了进一步的支持。

总之，我们已经确定CXCL12-CXCR4信号轴在胰腺癌SHH上调中的新作用。这一点尤其重要，因为其他研究已经将CXCR4和hedgehog通路在胰腺癌中的重要病理生物学作用归因于两者(7,22). 来自人类临床标本和转基因小鼠自发胰腺癌进展模型的数据表明，这些信号节点在胰腺癌早期发展和进展中起着作用(13,34). 有趣的是，在胰腺癌中，CXCL12和SHH主要以旁分泌方式发挥作用。基质细胞产生的大量CXCL12影响胰腺肿瘤细胞的生长和恶性行为，而肿瘤细胞分泌的SHH促进结缔组织增生(8). 广泛结缔组织增生是胰腺癌的一个特征，被认为是化疗结果的一个限制因素(9). 另一方面，我们最近发现CXCL12-CXCR4信号轴通过增强固有的生存机制保护胰腺癌细胞免受药物毒性(17). 本研究的结果进一步强调了该信号转导节点的重要性，并表明其不仅可以直接影响肿瘤细胞，还可以通过SHH诱导的胰腺纤维化间接产生耐药性。总之，我们的数据提供了对肿瘤-基质相互作用机制的新见解，并突出了CXCL12-CXCR4通路作为胰腺癌治疗靶点的潜力。

*本研究得到了国家癌症研究所（NCI）拨款CA137513、CA167137（发给A.P.S.）和NCI P50 SPORE CA101955（发给W.E.G.）的支持，以及南阿拉巴马大学米切尔癌症研究所的内部资金支持。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为sbox.jpg本文包含补充图1–5.

4使用的缩写如下：

SHH公司
声波刺猬
ERK公司
细胞外调节激酶
SDF-1型
基质细胞衍生因子-1
巴基斯坦中央银行
蛋白激酶B
TK公司
胸苷激酶
IKK公司
IκB激酶
STR公司
短串联重复。

参考文献

1Bardeesy N.，DePinho R.A.（2002年）胰腺癌生物学和遗传学.Nat.Rev.癌症。 2, 897–909 [公共医学][谷歌学者]
2丁毅、克雷维罗J.D.、阿德里安K.、格里波P.（2010）胰腺癌建模体内试验。从异种移植和致癌诱导系统到转基因小鼠.胰腺 39, 283–292 [公共医学][谷歌学者]
三。Morris J.P.，第四，Wang S.C.，Hebrok M.（2010）KRAS、Hedgehog、Wnt和胰腺导管腺癌的扭曲发育生物学.Nat.Rev.癌症 10, 683–695[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
4Siegel R.、Naishadham D.、Jemal A.（2012）2012年癌症统计.CA癌症临床杂志。 62, 10–29 [公共医学][谷歌学者]
5Erkan M.、Reiser-Erkan C.、Michalski C.W.、Kleeff J.（2010）肿瘤微环境与胰腺癌的进展.实验肿瘤。 32，128–131[公共医学][谷歌学者]
6Neesse A.、Michl P.、Frese K.K.、Feig C.、Cook N.、Jacobetz M.A.、Lolkema M.P.、Buchholz M.、Olive K.P.、Gress T.M.、Tuveson D.A.（2011）胰腺癌的基质生物学与治疗.肠子 60, 861–868 [公共医学][谷歌学者]
7Kelleher F.C.（2011）刺猬信号转导与胰腺癌的治疗.致癌作用 32, 445–451 [公共医学][谷歌学者]
8Bailey J.M.、Swanson B.J.、Hamada T.、Eggers J.P.、Singh P.K.、Caffery T.、Ouellette M.和Hollingsworth M.A.（2008）Sonic Hedgehog促进胰腺癌结缔组织增生.临床。癌症研究。 14, 5995–6004[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
9Olive K.P.、Jacobetz M.A.、Davidson C.J.、Gopinathan A.、McIntyre D.、Honess D.、Madhu B.、Goldgraben M.A.、Caldwell M.E.、Allard D.、Frese K.K.、Denicola G.、Feig C.、Combs C.、Winter S.P.、Ireland Zecchini H.、Reichelt S.、Howat W.J.、Chang A.、Dhara M.、Wang L.、Rückert F.、Grützmann R.、Pilarsky C.、Izeradjene K.、Hingorani S.R.、。，Huang P.、Davies S.E.、Plunkett W.、Egorin M.、Hruban R.H.、Whitebread N.、McGovern K.、Adams J.、Iacobuzio-Donahue C.、Griffiths J.和Tuveson D.A.（2009）抑制Hedgehog信号增强胰腺癌小鼠模型的化疗效果.科学类 324, 1457–1461[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
10孙曦、程刚、郝明、郑洁、周旭、张杰、泰奇曼·R·S、皮安塔·K·J、王杰（2010）CXCL12/CXCR4/CXCR7趋化因子轴与肿瘤进展.癌症转移评论。 29，709–722[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
11Teicher B.A.、Fricker S.P.（2010年）癌症中的CXCL12（SDF-1）/CXCR4通路.临床。癌症研究。 16, 2927–2931 [公共医学][谷歌学者]
12Maréchal R.、Demetter P.、Nagy N.、Berton A.、Decastecker C.、Polus M.、Closset J.、Devieére J.、Salmon I.、Van Laethem J.L.（2009）CXCR4高表达可能预示胰腺癌切除后生存率低.英国癌症杂志 100, 1444–1451[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
13Thomas R.M.、Kim J.、Revelo Penafiel M.P.、Angel R.、Dawson D.W.、Lowy A.M.（2008）趋化因子受体CXCR4在胰腺上皮内瘤变中表达.肠子 57, 1555–1560[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
14Matsuo Y.、Ochi N.、Sawai H.、Yasuda A.、Takahashi H.、Funahashi H、Takeyama H.、Tong Z.、Guha S.（2009）CXCL8/IL-8和CXCL12/SDF-1α协同促进胰腺癌侵袭性和血管生成.国际癌症杂志 124, 853–861[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
15Marchesi F.、Monti P.、Leone B.E.、Zerbi A.、Vecchi A.、Piemonti L.、Mantovani A.、Allavena P.（2004）表达功能性CXCR4的转移性人胰腺癌细胞的生存、增殖和迁移增加.癌症研究。 64, 8420–8427 [公共医学][谷歌学者]
16Hermann P.C.、Huber S.L.、Herrler T.、Aicher A.、Ellwart J.W.、Guba M.、Bruns C.J.、Heeschen C.（2007）不同的肿瘤干细胞群体决定了人类胰腺癌的肿瘤生长和转移活性.细胞干细胞 1, 313–323 [公共医学][谷歌学者]
17Singh S.、Srivastava S.K.、Bhardwaj A.、Owen L.B.、Singh A.P.（2010）CXCL12-CXCR4信号转轴赋予吉西他滨对胰腺癌细胞的耐药性。一种新的治疗靶点.英国癌症杂志 103，1671年至1679年[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
18Caserta T.M.、Kommagani R.、Yuan Z.、Robbins D.J.、Mercer C.A.、Kadakia M.P.（2006）p63过度表达诱导Sonic Hedgehog的表达.摩尔癌症研究。 4, 759–768 [公共医学][谷歌学者]
19Arora S.、Bhardwaj A.、Srivastava S.K.、Singh S.、McClellan S.、Wang B.、Singh A.P.（2011）厚朴酚抑制细胞周期，诱导细胞凋亡，增强吉西他滨对人胰腺癌细胞的细胞毒作用.公共科学图书馆 6，e21573。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
20do Carmo A.、Patricio I.、Cruz M.T.、Carvalhero H.、Oliveira C.R.、Lopes M.C.（2010）CXCL12/CXCR4促进胶质瘤细胞的运动和增殖.癌症生物学。疗法。 9, 56–65 [公共医学][谷歌学者]
21陆大勇、唐春晖、叶伟力、王国良、林春萍、陈永华、赖春晖，陈永福、梁玉明、傅文明（2009）SDF-1α通过CXCR4、PI3K/Akt、ERK和NF-κB依赖途径上调小胶质细胞中的白细胞介素-6.欧洲药理学杂志。 613, 146–154 [公共医学][谷歌学者]
22Shen X.、Artinyan A.、Jackson D.、Thomas R.M.、Lowy A.M.、Kim J.（2010）趋化因子受体CXCR4通过AKT和ERK依赖性途径促进胰腺癌细胞增殖.胰腺 39, 81–87 [公共医学][谷歌学者]
23Kasperczyk H.、Baumann B.、Debatin K.M.、Fulda S.（2009年）Sonic Hedgehog作为促进NF-κB介导的凋亡抵抗和肿瘤生长的新NF-κ的靶基因的特性体内.美国财务会计准则委员会J。 23, 21–33 [公共医学][谷歌学者]
24Perkins N.D.（2012年）核因子-κB亚基在癌症中的多种复杂作用.Nat.Rev.癌症 12, 121–132 [公共医学][谷歌学者]
25Hanahan D.、Weinberg R.A.（2011年）癌症的标志。下一代.单元格 144, 646–674 [公共医学][谷歌学者]
26Hanahan D.，Coussens L.M.（2012）犯罪从犯。肿瘤微环境中细胞的功能.癌细胞 21, 309–322 [公共医学][谷歌学者]
27Evangelista M.、Tian H.、de Sauvage F.J.（2006）癌症中的刺猬信号通路.临床。癌症研究。 12, 5924–5928 [公共医学][谷歌学者]
28Ng J.M.、Curran T.（2011）刺猬的故事。制定针对癌症的战略.Nat.Rev.癌症 11, 493–501[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
29Dennler S.、AndréJ.、Alexaki I.、Li A.、Magnaldo T.、ten Dijke P.、Wang X.J.、Verrecchia F.、Mauviel A.（2007）转化生长因子β对声波刺猬介导物的诱导作用。Smad3依赖性激活Gli2和Gli1表达在体外和体内.癌症研究。 67, 6981–6986 [公共医学][谷歌学者]
30Hahn H.、Wicking C.、Zaphiropous P.G.、Gailani M.R.、Shanley S.、Chidambaram A.、Vorechovsky I.、Holmberg E.、Unden A.B.、Gillies S.、Negus K.、Smyth I.、Pressman C.、Leffell D.J.、Gerrard B.、Goldstein A.M.、Dean M.、Toftgard R.、Chenevix-Trench G.、Wainwright B.、Bale A.E.（1996）人类同源物的突变果蝇属痣样基底细胞癌综合征中的斑块.单元格 85, 841–851 [公共医学][谷歌学者]
31季政、梅福川、谢杰、程曦（2007）癌基因KRAS激活胰腺癌细胞Hedgehog信号通路.生物学杂志。化学。 282, 14048–14055 [公共医学][谷歌学者]
32Nolan-Stevaux O.、Lau J.、Truitt M.L.、Chu G.C.、Hebrok M.、Fernández-Zapico M.E.、Hanahan D.（2009）GLI1通过肿瘤性胰腺导管中平滑的非依赖机制进行调节，并调节PDAC细胞的存活和转化.基因发育。 23, 24–36[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
33Raffel C.、Jenkins R.B.、Frederick L.、Hebrink D.、Alderete B.、Fults D.W.、James C.D.（1997）偶发性髓母细胞瘤含有PTCH突变.癌症研究。 57, 842–845 [公共医学][谷歌学者]
34Thayer S.P.、di Magliano M.P.、Heiser P.W.、Nielsen C.M.、Roberts D.J.、Lauwers G.Y.、Qi Y.P.、Gysin S.、Fernández del Castillo C.、Yajnik V.、Antoniu B.、McMahon M.、Warshaw A.L.、Hebrok M.（2003）刺猬是胰腺癌肿瘤发生的早期和晚期介质.自然 425, 851–856[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
35谢杰（Xie J.）、穆隆（Murone M.）、罗（Luoh S.M.），瑞安（Ryan A.）、顾（Gu Q.）、张（Zhang C.）、博尼法斯（Bonifas）J.M.、林（Lam C.W.）、海恩斯（Hynes M激活散发性基底细胞癌中的平滑突变.自然 391, 90–92 [公共医学][谷歌学者]
36Feldmann G.、Dhara S.、Fendrich V.、Bedja D.、Beaty R.、Mullendore M.、Karikari C.、Alvarez H.、Iacobuzio-Donahue C.、Jimeno A.、Gabrielson K.L.、Matsui W.、Maitra A.（2007）阻断Hedgehog信号传导可抑制胰腺癌的侵袭和转移。实体癌联合治疗的新范式.癌症研究。 67, 2187–2196[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
37Feldmann G.、Fendrich V.、McGovern K.、Bedja D.、Bisht S.、Alvarez H.、Koorstra J.B.、Habbe N.、Karikari C.、Mullendore M.、Gabrielson K.L.、Sharma R.、Matsui W.、Maitra A.（2008）口服生物可利用小分子Hedgehog信号抑制剂抑制胰腺癌的肿瘤发生和转移.摩尔癌症治疗。 7, 2725–2735[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
38Yauch R.L.、Gould S.E.、Scales S.J.、Tang T.、Tian H.、Ahn C.P.、Marshall D.、Fu L.，Januario T.、Kallop D.、Nannini-Pepe M.、Kotkow K.、Marsters J.C.、Rubin L.和de Sauvage F.J.（2008）癌症中刺猬信号的旁分泌需求.自然 455, 406–410 [公共医学][谷歌学者]
39Duda D.G.、Kozin S.V.、Kirkpatrick N.D.、Xu L.、Fukumura D.、Jain R.K.（2011）CXCL12（SDF1α）-CXCR4/CXCR7通路抑制。一种新兴的抗癌治疗敏化剂？ 临床。癌症研究。 17, 2074–2080[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
40Agarwal U.、Ghalayini W.、Dong F.、Weber K.、Zou Y.R.、Rabbany S.Y.、Rafii S.、Penn M.S.（2010）心肌细胞CXCR4表达在急性心肌梗死后发育和左室重构中的作用.循环。物件。 107，667–676[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
41Sierro F.、Biben C.、Martínez-Muñoz L.、Mellado M.、Ransohoff R.M.、Li M.，Woehl B.、Leung H.、Groom J.、Batten M.和Harvey R.P.、Martinez-A C.、Mackay C.和Mackay F.（2007）缺乏第二CXCL12/SDF-1受体CXCR7的小鼠心脏发育受阻但造血正常.程序。国家。阿卡德。科学。美国。 104, 14759–14764[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
42Tachibana K.、Hirota S.、Iizasa H.、Yoshida H.、Kawabata K.、Kataoka Y.、Kitamura Y.、Matsushima K.、Yoschida N.、Nishikawa S.、Kishimoto T.、Nagasawa T.（1998）趋化因子受体CXCR4对胃肠道血管化至关重要.自然 393, 591–594 [公共医学][谷歌学者]
43Boldajipour B.、Mahabaleshwar H.、Kardash E.、Reichman-Fried M.、Blaser H.，Minina S.、Wilson D.、Xu Q.、Raz E.（2008）配体隔离控制趋化因子诱导的细胞迁移.单元格 132, 463–473 [公共医学][谷歌学者]
44Naumann U.、Cameroni E.、Pruenster M.、Mahabaleshwar H.、Raz E.、Zerwes H.G.、Rot A.、Thelen M.（2010）CXCR7充当CXCL12和CXCL11的清道夫.公共科学图书馆 5，e9175。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
45Levoye A.、Balabanian K.、Baleux F.、Bachelerie F.、Lagane B.（2009）CXCR7与CXCR4异二聚体化并调节CXCL12-介导的G蛋白信号.血液 113, 6085–6093 [公共医学][谷歌学者]
46Wang Z.，Ma Q.，Liu Q.，Yu H.，Zhao L.，Shen S.，Yao J.（2008年）阻断SDF-1/CXCR4信号抑制胰腺癌进展在体外通过失活典型Wnt途径.英国癌症杂志 99, 1695–1703[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
47Bassères D.S.，Baldwin A.S.（2006）核因子κB和κB激酶抑制剂途径在肿瘤发生发展中的作用.癌基因 25, 6817–6830 [公共医学][谷歌学者]
48Ben Neriah Y.，Karin M.（2011年）炎症与癌症相遇，NF-κB是媒人.自然免疫学。 12, 715–723 [公共医学][谷歌学者]
49Bai D.、Ueno L.、Vogt P.K.（2009年）Akt介导的NF-κB调控及NF-κ子B对PI3K和Akt致癌性的重要性.国际癌症杂志 125, 2863–2870[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
文章来自生物化学杂志由以下人员提供美国生物化学和分子生物学学会