抗-PBR[EPR5384]（ab109497）

1-2车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在17 kDa时观察到ab109497。红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制(约8245)在37 kDa时观察到。

western blot显示ab109497与野生型HCT116细胞中的PBR反应。敲除细胞系时观察到信号丢失约266878（敲除细胞裂解物ab257067年)已使用。对野生型HCT116和TSPO敲除的HCT116细胞裂解物进行SDS-PAGE。在室温下，将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。ab109497和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制(约8245)在4°C下过夜，稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。

人膀胱癌组织标记PBR的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析，纯化的ab109497为1/100。使用Tris/EDTA缓冲液pH 9进行热介导抗原检索。ab97051型以HRP结合的山羊抗兔IgG（H+L）作为二级抗体（1/500）。阴性对照使用PBS代替一抗。苏木精复染。

ab109497染色野生型HeLa细胞中的PBR（顶面板）和TSPO敲除HeLa的细胞（底面板）。用4%多聚甲醛固定细胞（10分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab109497以0.1μg/ml和约195884年以2μg/ml（显示为假彩色红色）在+4°C下过夜，然后在室温下与山羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步孵育1小时(约150081)浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

使用共焦显微镜（Leica-Microsystems，TCS SP8）拍摄图像。

小鼠肾组织切片的免疫组织化学（冰冻切片）分析，用纯化的ab109497标记1/250（3.8µg/ml）的PBR。使用柠檬酸钠缓冲液（10mM柠檬酸盐pH 6.0+0.05%吐温-20）进行热介导抗原回收。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488,约150077)作为二级抗体。阴性对照：PBS代替一抗。DAPI用作副染色。

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在15 kDa时观察到ab109497。红色-装载控制，约8245，在37 kDa下观察到。

ab109497在野生型HAP1细胞中与PBR特异性反应。使用PBR敲除样品时未观察到条带。野生型和PBR基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。Ab109497和约8245（GAPDH负载对照）分别以1/10000和1/10000稀释度稀释，并在4C下孵育过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1小时。

1-2车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在15 kDa时观察到ab109497。红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制(约8245)在37 kDa时观察到。

western blot显示ab109497与野生型HeLa细胞中的PBR反应。敲除细胞系时观察到信号丢失约264942（敲除细胞裂解物ab257066号)已使用。对野生型HeLa和TSPO敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。在室温下，将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。ab109497和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制(约8245)在4°C下过夜，稀释率分别为1/1000和1/20000。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。

小鼠下丘脑组织标记PBR的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析，ab109497，稀释度为1/1000（1.03μg/ml）。使用pH 9.0的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原检索(约93684). 用山羊抗兔IgG（H+L）（HRP）作为二级抗体（浓度：即用）。此外，还进行了二级纯抗体对照。苏木精复染。

小鼠下丘脑室管膜细胞和内皮细胞呈阳性染色。

ab109497染色HeLa中的PBR。细胞用100%甲醇固定（5分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab109497以1μg/ml和约195889年以1/250稀释度（以伪红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步孵育1小时(约150081)浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

使用共焦显微镜（Leica-Microsystems，TCS SP8）拍摄图像。

U-87MG细胞的细胞内流式细胞术分析，用纯化的ab109497标记PBR（1/150）（红色）。用2%多聚甲醛固定细胞。以FITC-偶联山羊抗兔IgG（1/150）作为二级抗体。黑色-同位素对照，兔单克隆IgG。蓝色-未标记对照，细胞未与初级和次级抗体孵育。 

在A431全细胞裂解液中以1/60免疫沉淀PBR纯化ab109497。

通道1（输入）：A431全细胞裂解液（10µg）

通道2（+）：ab109497+A431全细胞裂解液（10µg）。

通道3（-）：兔单克隆IgG(约172730)而不是A431全细胞裂解液中的ab109497。

用于蛋白质印迹，用于IP检测试剂（HRP）的VeriBlot(约131366)，用于1/1500稀释度的检测。

封闭缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

小鼠肾上腺组织切片的免疫组织化学（冰冻切片）分析，用纯化的ab109497标记1/250（3.8µg/ml）的PBR。使用柠檬酸钠缓冲液（10mM柠檬酸盐pH 6.0+0.05%吐温-20）进行热介导抗原回收。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488,约150077)作为二级抗体。阴性对照：PBS代替一抗。DAPI用作副染色。

全球KO小鼠中TSPO（PBR）表达被消除，无病理改变

western blotting（A）和IHC（B）检测WT和KO小鼠不同组织中TSPO的表达。比例尺，100μm。

4%PFA固定组织切片用5%山羊血清封闭，并在4°C下用ab109497以1/1500稀释度孵育过夜。DAB染色。

注：TSPO和PBR是同一目标的替代名称。

（改编自Wang等人的图3）

TSPO（PBR）表达局限于线粒体

（A） 面板显示MA-10 Leydig（小鼠）中TSPO（红色）、VDAC1（绿色）和核复染（蓝色）的共焦图像。细胞。（B） 负极控制面板。TSPO对线粒体蛋白VDAC1的克隆化证实了TSPO的特异性定位。比例尺20µm。

细胞用4%甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透。然后用5%的正常山羊血清封闭细胞，并在1/200稀释度下与ab109497孵育。

注：TSPO和PBR是同一目标的替代名称。

ab109497染色野生型HAP1细胞中的PBR（顶部面板）和PBR敲除HAP1的细胞（底部面板）。细胞用100%甲醇固定（5分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。然后用ab109497以1μg/ml和约195889年以1/250稀释度（以伪红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步孵育1小时(约150081)浓度为2μg/ml（以绿色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

使用共焦显微镜（Leica-Microsystems，TCS SP8）拍摄图像。

U-87MG细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析用纯化的ab109497标记1/100的PBR。细胞用4%多聚甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透。约150077，Alexa Fluor^®用488-结合羊抗兔IgG（1/500）作为二级抗体。DAPI（蓝色）用作核染色。约7291，小鼠抗微管蛋白（1/1000）和ab150120型，Alexa Fluor^®还使用了594-共轭山羊抗鼠IgG（1/500）。

对照1：一级抗体（1/100）和二级抗体，ab150120型，Alexa Fluor^®594-共轭山羊抗鼠IgG（1/500）。

控制2：约7291（1/1000）和二级抗体，约150077，Alexa Fluor^®488-共轭山羊抗兔IgG（1/500）。

阻塞和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

阻塞和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

ab109497（纯化）在1/60免疫沉淀PBR的U-87MG全细胞裂解液中。

通道1（输入）：U-87MG全细胞裂解液（10µg）

通道2（+）：ab109497+U-87MG全细胞裂解液（10µg）。

通道3（-）：兔单克隆IgG(约172730)而不是U87-MG全细胞裂解液中的ab109497。

用于蛋白质印迹，用于IP检测试剂（HRP）的VeriBlot(约131366)，用于1/1500稀释度的检测。

封闭缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

人结肠组织标记PBR的免疫组织化学（福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片）分析，使用稀释度为1/100的未纯化ab109497。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

重叠直方图显示未纯化ab109497（红线）染色的HepG2细胞。用4%多聚甲醛固定细胞（10分钟），然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞，以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。然后将细胞与抗体（未纯化的ab109497，1/50稀释）在22°C下孵育30分钟。使用的第二抗体是DyLight^®488山羊抗兔IgG（H+L）(约96899)在22°C下，1/500稀释30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）（1µg/1x10⁶电池）在相同条件下使用。采集了超过5000个事件。