基因敲除 （KO）验证：确认抗体特异性

为了确保您拥有高度特异性的抗体，我们通过 CRISPR-Cas9公司基因组编辑使用 击倒对手验证，为您提供研究所需的可靠结果。

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目录

• 基因敲除验证：需求和解决方案
• 基因敲除验证：试验结果​
• 基因敲除验证抗体承诺​
• 基因敲除细胞系和裂解液

需求

抗体是生命科学和临床研究中最常用的工具之一，用于研究各种生物学通路和疾病中的蛋白质及其功能。

好的抗体具有靶标特异性和灵敏度，即使在低表达水平下也能识别目的蛋白。但是，越来越多的研究表明，并非所有抗体都具有靶标特异性，也有许多抗体表现出与脱靶蛋白的交叉反应性。从而导致实验不可重复性这一公认问题。¹这些非特异性抗体会导致资源浪费，并妨碍科学进步。^2,3

​​解决方案：敲除验证

接受度最广且最受信任的抗体特异性验证过程之一是基因敲除 （KO）验证。⁴击倒对手验证是一项非常稳健的技术，可在不表达目的蛋白的 击倒对手细胞系或组织中通过检测目的抗体来确证其特异性。

在 击倒对手细胞系中测试特异性抗体时，特异性抗体不会产生信号，但在野生型 （重量）细胞系测试特异性抗体时，特异性抗体会产生特异性靶蛋白信号。以这种方式，击倒对手验证作为真正的阴性对照，以确认抗体对目标蛋白的特异性。^4,5

阿布卡姆使用广泛的人 击倒对手单倍体细胞系库来进行抗体验证。这些 击倒对手细胞系通过 CRISPR-Cas9公司生成，并通过 桑格测序鉴定。这种类型的 击倒对手细胞系提供了来自单个等位基因 击倒对手的完全丧失功能的表型，并消除了在二倍体细胞模型中观察到的来自第二个等位基因对敲除的任何掩盖。^6-8

基因敲除验证试验结果

当 击倒对手验证我们的抗体时，我们主要使用 西方印迹来评估结果。击倒对手验证可产生一系列 西方印迹结果，以下示例给出了我们处理这些结果的方式。

​特异性抗体

• 结果：击倒对手样本中的预期分子量 （兆瓦）条带消失。
• 下一步：将基于 击倒对手的特定数据添加到数据表中。通过 击倒对手验证保证抗体的特异性。

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部分特异性抗体-额外条带

• 结果：击倒对手样本中预期 兆瓦条带消失，但存在不同 兆瓦的额外条带。
• 下一步：我们将基于 击倒对手样本的特定数据添加到数据表中。将进行更多的研究和检测，以鉴别额外的条带。

非特异性抗体–KO公司样本中的弱信号

• 结果：与 重量样本相比，预期 兆瓦条带仍然存在于 击倒对手样本中，强度较低。一种基准抗体在 重量样本中解析目标条带，而在 击倒对手样本中未解析出条带。
• 下一步：我们将基于 击倒对手样本的特定数据添加到数据表中。将进行更多的研究和测试，以确定 击倒对手样本中信号背后的原因。

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​​非特异性抗体–KO公司样本中的信号

• 结果：击倒对手样本中仍存在预期的 兆瓦带，强度与 重量样本相同。一种基准抗体在 重量样本中解析目标条带，而在 击倒对手样本中未解析出条带。
• 下一步：我们从目录中删除抗体，并推荐使用已确认靶标特异性的替代抗体。

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非特异性抗体-KO公司和重量样本中均无目标条带

• ​​​结果：该抗体未在 重量和 击倒对手样本中识别出目标条带。一种基准抗体在 重量样本中解析目标条带，而在 击倒对手样本中未解析出条带。
• 下一步：我们从目录中删除抗体，并且我们建议使用已确认特异性的替代抗体。

基因敲除验证的抗体：我们的承诺

当看到 击倒对手验证标记时，您可以相信该抗体不仅在推荐的应用和种属中得到了验证，而且其特异性也已经通过我们内部 的击倒对手验证方法得到了确认。

查看我们的击倒对手验证抗体的完整列表。

基因敲除细胞系和裂解液：已编辑好，为您做好了准备

我们应用 CRISPR-Cas9公司技术开发了广泛的 击倒对手细胞系和裂解液，从而为您提供可靠的抗体，节省您的时间和金钱。每个 击倒对手细胞系都是单独克隆并通过 桑格测序验证的，同时内附亲代 重量对照裂解液，用于在一致的细胞背景下评估基因敲除的生物学影响。

查看我们的基因敲除细胞裂解液的完整列表。

​​查看我们的基因敲除细胞系的完整列表​。

参考文献

1. Bradbury A和Pluckthun A。再现性：标准化研究中使用的抗体自然518:27-29 (2015).
2. 贝克M.再生危机：归咎于抗体自然. 521:274-276 (2015).
3. Mullane K、Enna SJ、Piette J、Williams M。同行评审药理学文献中的手稿提交指南生物化学药理学。 97(3):225-35 (2015).
4. Zhong Z、Sassi M、Heaton S、Koch S、De Block G、Conlon D、Lochead J、Dreja H、Munro M、Solache A、Hamilton B。大规模使用敲除验证来确认抗体特异性免疫学杂志200（1增补）120.18（2018）。
5. 波尔多J、威尔士AW、阿加瓦尔S、基里亚姆E、巴奎罗MT、汉纳JA、阿纳格诺斯托VK、里姆DL。抗体验证生物技术. 48(3):197–209 (2010).
6. Bürckstümmer T、Banning C、Hainzl P、Schobesberger R、Kerzendorfer C等。可逆基因陷阱收集赋予人类细胞单倍体遗传能力Nat方法. 10(10):965-71 (2013).
7. Reiling JH、Clish CB、Carette JE、Varadarajan M、Brummelkamp TR、Sabatini DM。单倍体遗传筛查确定了包含2A（MFSD2A）转运体的主要促进域是对衣霉素反应的关键介体美国国家科学院程序. 108(29):11756-65 (2011).
8. Carette JE、Guimaraes CP、Varadarajan M、Park AS、Wuethrich I等。人类细胞中的单倍体基因筛查可识别病原体使用的宿主因子科学类. 326(5957):1231-5 (2009).