山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor®488）（ab150077）

HeLa细胞中β-管蛋白染色的ICC/IF图像。细胞被100%甲醇固定（5分钟），用0.1%Triton X-100渗透5分钟，然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1小时，以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。然后用一级抗体培养细胞(约6046，5µg/ml）在+4°C下过夜。二级抗体（绿色）为ab150077 Alexa Fluor^®488只山羊抗兔IgG（H+L），以2µg/ml的浓度使用1小时。采用DAPI对浓度为1.43µM的细胞核（蓝色）进行染色。

阴性对照（插入物）是一种二级检测，用于证明二级抗体的低非特异性结合。

细胞被100%甲醇固定（5分钟），然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中培养1小时，以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用。然后用抗体培养细胞(约7291，1µg/ml）和(约16048，1µg/ml）在+4°C下过夜。二级抗体是约150115Alexa Fluor®647（红色）山羊抗鼠IgG（H+L）以2µg/ml的浓度使用1小时，ab150077 Alexa Fluor®488（绿色）山羊抗兔IgG在2µ/ml的浓度下使用1小时。DAPI染色细胞核。

重叠直方图显示HeLa细胞染色约32356（红线）。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞，以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用，然后用抗体(约32356，1/100稀释）在22ºC下持续30分钟。使用的二级抗体是Alexa Fluor®488山羊抗兔IgG（H&L），在22℃下以1/2000稀释30分钟。同型对照抗体（黑线）是在相同条件下使用的兔IgG（单克隆）（1µg/1x10^6细胞）。未标记样本（蓝线）也用作对照。使用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。

多克隆二级抗体的交叉反应性ab182016年采用夹心ELISA方法进行测试。用指示的IgG标准物以1µg/ml（50µl/孔）的速度对微孔进行涂层，并在4°C下培养过夜，然后在室温下进行5%BSA封闭步骤2h。ab182016年然后以1µg/ml开始添加，并逐渐稀释1/4（50µl/孔），然后培养2h。用于检测驴抗羊IgG H&L（HRP）(约6885)以1/10000稀释度（50µl/孔）使用，然后在室温下培养1h。

对于测试的批次，ab182016年对人IgG的交叉反应为5-7%，对小鼠IgG、大鼠IgG和鸡IgY的交叉反应低于2%。

该数据是使用未结合抗体开发的(ab182016年)。

山羊抗兔IgG H&L的交叉耐受性(ab182016年)使用夹心ELISA方法测试从两个不同供应商获得的山羊抗兔IgG H&L。用指示的IgG标准物（兔、人、小鼠和大鼠）以1µg/ml（50µl/孔）的浓度对微孔进行涂层，并在4°C下培养过夜，然后在RT下进行5%BSA阻断步骤2h。然后从1µg/ml开始添加二级抗体，并逐渐稀释1/4（50μl/微孔），然后培养2h。用于检测驴抗羊IgG H&L（HRP）(约6885)以1/10000稀释度（50µl/孔）使用，然后在室温下培养1h。该数据来自代表性稀释。

该数据是使用未结合抗体开发的(ab182016年)。

IHC-秀丽隐杆线虫幼虫的全量标记RNA聚合酶II CTD重复YSPTSPS（磷酸S2）约5095将样品与一级抗体（1/500在PBS+3%BSA+0.1%Triton X-100中）在4°C下孵育12小时。ab150077，一种Alexa Fluor®488偶联的山羊抗兔IgG多克隆（1/1000），用作第二抗体。

参见Abreview