山羊抗小鼠IgG H&L（Alexa Fluor®594）预吸附二抗（ab150120）

约6326Hela细胞中BrdU染色。未处理和BrdU处理的细胞（10uM，24小时）。将细胞用100%甲醇固定（5分钟），然后在室温下使用在0.1%PBS吐温中的2M HCL进行酸水解30分钟以使DNA变性。然后用0.1%PBS-Tween渗透5分钟，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS Tween中封闭1小时。然后将细胞在4°C下与约63261μg/ml和约7291，小鼠单克隆[DM1A]对α-微管蛋白-负载控制。然后将细胞与ab150165型，山羊抗大鼠IgG多克隆第二抗体-H&L（Alexa Fluor^®488），以1/1000稀释度（以绿色显示）和ab150120预吸附，山羊抗小鼠IgG-H&L（Alexa Fluor）多克隆次级抗体^®594），以1/1000稀释度预吸附（以伪红色显示）。用DAPI标记细胞核DNA（以蓝色显示）。使用共焦显微镜（Leica-Microsystems TCS SP8）采集图像，显示单个共焦切片。

ICC/IF图像约7291HeLa细胞染色。将细胞100%甲醇固定（5分钟），然后在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸的0.1%PBS吐温中孵育1小时，以使细胞透化并阻断非特异性蛋白质-蛋白质相互作用。然后用抗体培养细胞(约7291，1µg/ml）在+4°C下过夜。二级抗体（橙色）为ab150120 Alexa Fluor®594山羊抗鼠IgG（H+L），以1µg/ml的浓度使用1h。采用DAPI对浓度为1.43µM的细胞核（蓝色）进行染色。

多克隆二级抗体的交叉反应性2017年12月18日采用夹心ELISA方法进行测试。用指示的IgG标准物以1µg/ml（50µl/孔）的速度对微孔进行涂层，并在4°C下培养过夜，然后在室温下进行5%BSA封闭步骤2h。2017年12月18日然后以1µg/ml开始添加，并逐渐稀释1/4（50µl/孔），然后培养2h。用于检测驴抗羊IgG H&L（HRP）(约6885)以1/10000稀释度（50µl/孔）使用，然后在室温下培养1h。

对于受试批次，2017年12月18日对鸡IgY、人IgG、兔IgG和大鼠IgG的交叉反应性分别低于2%、6%、7%和47%。

该数据是使用未结合抗体开发的(2017年12月18日).

山羊抗小鼠IgG H&L的交叉耐受性(2017年12月18日)使用夹心ELISA方法测试从两个不同供应商获得的山羊抗鼠IgG H&L。用1µg/ml（50µl/孔）的指定IgG标准物（兔、人、小鼠和大鼠）包被孔，并在4°C下孵育过夜，然后在室温下进行5%BSA封闭步骤2小时。然后从1µg/ml开始添加二次抗体，并逐渐稀释1/4（50µl/孔），然后孵育2小时。用于检测驴抗羊IgG H&L（HRP）(约6885)以1/10000稀释度（50µl/孔）使用，然后在室温下培养1h。该数据来自代表性稀释。

该数据是使用未结合抗体开发的(2017年8月18日).

图片：由UMDNJ-Robert Wood Johnson医学院李少华博士提供

样品：小鼠胚胎干细胞分化类胚体（EB）

准备工作：

将3%PFA固定在PBS中30分钟，室温下将其培养在7.5%蔗糖-PBS中3小时，室温下培养在15%蔗糖-PBS（温度为4摄氏度）中过夜将EB嵌入组织中-Tek OCT复合物中切割冷冻切片至4-20µm厚

一抗1：兔抗层粘连蛋白，1:400

一级抗体2：小鼠抗失能-2，1:100
二级抗体1：预先吸附的羊抗兔IgG-H&L（Alexa Fluor®488）多克隆二级抗体(约150081), 1:200

二级抗体2：山羊对小鼠IgG-H&L（Alexa Fluor®594）的多克隆二级抗体预吸附（ab150120），1:200
细胞核用DAPI复染

未净化ab134175号KN-93处理的MCF7（人乳腺癌细胞系）细胞周期蛋白D1的染色(公元120980年).
细胞用100%甲醇固定（5min），然后用1%牛血清白蛋白/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween封闭1h。然后将细胞与ab134175号在10µg/ml和约7291以1µg/ml在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔Alexa 488次级培养基进一步培养1小时(约150081)浓度为2µg/ml（以绿色显示），山羊抗鼠Alexa 594次级（ab150120）浓度为2μg/ml（用伪红色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。
阴性对照：1、兔一抗鼠二抗；2、小鼠一级抗体和抗兔二级抗体。对照组1和2表明所用的一级和二级抗体之间没有非特异性反应。