重组Anti-PBR抗体[EPR5384]（ab109497）

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在15 kDa时观察到ab109497。红色-装载控制ab8245在37 kDa下观察。

ab109497抗PBR抗体[EPR5384]在野生型HeLa细胞中与PBR特异性反应。敲除细胞系时出现信号丢失ab264942（敲除细胞裂解物ab257066)被利用了。野生型和PBR基因敲除的样品进行SDS-PAGE分析。ab109497与抗α-微管蛋白抗体[EP1332Y]-微管标记物(阿布52866)分别在4°C和1/1000稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye）制备印迹^®800CW）预吸收(ab216773号)山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收(ab216776号)二级抗体在成像前在室温下稀释1小时。

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在15 kDa时观察到ab109497。红色-装载控制，ab8245，在37 kDa下观察到。

ab109497在野生型HAP1细胞中与PBR特异性反应。当使用PBR基因敲除样品时，没有观察到条带。野生型和PBR基因敲除样品进行SDS-PAGE分析ab8245分别以1/10000和1/10000稀释液稀释GAPDH，4C孵育过夜^®800CW）预吸收(ab216773号)山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收(ab216776号)二级抗体在1/10000稀释度下在室温下进行1小时成像。

人膀胱癌组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析纯化ab109497在1/100处标记PBR。用pH9的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原回收。ab97051以HRP结合的羊抗兔IgG（H+L）作为次级抗体（1/500）。阴性对照用PBS代替原抗体。苏木精复染。

免疫组织化学（冰冻切片）分析小鼠肾脏组织切片，用纯化的ab109497在1/250（3.8µg/ml）标记PBR。使用柠檬酸钠缓冲液（10 mm柠檬酸pH 6.0+0.05%吐温-20）回收抗原。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488年，ab150077)作为二级抗体。以PBS代替原代抗体。达皮被用作副手。

1/1000稀释度（1.03μg/ml）ab109497标记小鼠下丘脑组织的免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析。用pH9.0的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原回收(阿布93684). 以山羊抗兔IgG（H+L）（HRP）为二级抗体（浓度：即用）。还进行了二级抗体对照。苏木精复染。

小鼠下丘脑室管膜细胞和内皮细胞呈阳性染色。

ab109497在HeLa中染色PBR。细胞用100%甲醇固定（5min），用0.1%Triton X-100渗透5min，用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h，然后用ab109497在1μg/ml和ab195889号在1/250稀释度下（以假红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG的二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步培养1h(ab150081号)浓度为2μg/ml（以绿色显示）。用蓝色的DNA标记大鹏。

采用显微共聚焦显微镜（TCS）对徕卡进行显微成像。

流式细胞术分析U-87MG细胞在1/150（红色）处用纯化的ab109497标记PBR。细胞用2%多聚甲醛固定。以FITC结合的羊抗兔IgG（1/150）作为次级抗体。黑-同型对照，兔单克隆IgG。蓝色-未标记对照组，未与一级和二级抗体孵育的细胞。

ab109497（纯化）在1/60免疫沉淀PBR在A431全细胞裂解液中。

通道1（输入）：A431全细胞裂解液（10µg）

通道2（+）：ab109497+A431全细胞裂解液（10µg）。

通道3（-）：兔单克隆IgG(ab172730)而不是A431全细胞裂解液中的ab109497。

对于western印迹，VeriBlot用于IP检测试剂（HRP）(ab131366号)，在1/1500稀释度下进行检测。

阻断缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

稀释缓冲液及浓度：5%NFDM/TBST。

免疫组织化学（冰冻切片）分析小鼠肾上腺组织切片，用纯化的ab109497在1/250（3.8µg/ml）标记PBR。使用柠檬酸钠缓冲液（10 mm柠檬酸pH 6.0+0.05%吐温-20）回收抗原。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488年，ab150077)作为二级抗体。阴性对照：用PBS代替原抗体。达皮被用作副手。

无病理改变的全球KO小鼠TSPO（PBR）表达消失

用免疫印迹法（A）和IHC（B）检测WT和KO小鼠不同组织中TSPO的表达。比例尺，100μm。

4%PFA固定组织切片用5%山羊血清封闭，用1/1500稀释度的ab109497在4℃下孵育过夜。DAB染色。

注意：TSPO和PBR是同一目标的替代名称。

（改编自Wang等人的图3）

TSPO（PBR）表达定位于线粒体

（A） 面板显示了MA-10 Leydig（小鼠）的TSPO（红色）、VDAC1（绿色）和核复染（蓝色）的共焦图像。细胞。（B） 阴性对照组。TSPO与线粒体蛋白VDAC1共定位验证了TSPO的特异性定位。比例尺20µm。

细胞用4%的甲醛固定，用0.1%的tritonx-100渗透。然后用5%的正常山羊血清阻断细胞，用1/200稀释的ab109497培养细胞。

注意：TSPO和PBR是同一目标的替代名称。

ab109497野生型HAP1细胞（上图）和PBR基因敲除HAP1细胞（下图）中PBR染色。细胞用100%甲醇固定（5min），用0.1%Triton X-100渗透5min，用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h，然后用ab109497在1μg/ml和ab195889号在1/250稀释度下（以假红色显示）在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG的二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步培养1h(ab150081号)浓度为2μg/ml（以绿色显示）。用蓝色的DNA标记大鹏。

采用显微共聚焦显微镜（TCS）对徕卡进行显微成像。

用纯化ab109497标记PBR的U-87MG细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%曲通X-100渗透。ab150077一辆Alexa Fluor^®以488株羊抗兔IgG（1/500）为二级抗体。DAPI（蓝色）被用作核子染色。ab7291，小鼠抗微管蛋白（1/1000）和ab150120型一辆Alexa Fluor^®594只山羊抗鼠IgG（1/500）也被使用。

对照1：一级抗体（1/100）和二级抗体，ab150120型一辆Alexa Fluor^®594例山羊抗鼠IgG抗体（1/500）。

控制2：ab7291（1/1000）和次级抗体，ab150077一辆Alexa Fluor^®488例羊抗兔IgG（1/500）。

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

封闭稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

ab109497（纯化），在U-87MG全细胞裂解液中1/60免疫沉淀PBR。

通道1（输入）：U-87MG全细胞裂解液（10µg）

通道2（+）：ab109497+U-87MG全细胞裂解液（10µg）。

通道3（-）：兔单克隆IgG(ab172730)在U87-MG全细胞裂解液中代替ab109497。

对于western印迹，VeriBlot用于IP检测试剂（HRP）(ab131366号)，在1/1500稀释度下进行检测。

阻断缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

稀释缓冲液及浓度：5%NFDM/TBST。

免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析人结肠组织用未纯化ab109497标记的PBR，稀释度为1/100。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

重叠直方图显示未纯化ab109497染色的HepG2细胞（红线）。细胞用4%多聚甲醛（10min）固定，然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟，然后在1x-PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育，以阻断非特异性的蛋白-蛋白质相互作用。将抗体与未纯化的AB7细胞孵育30分钟，然后在第二次稀释液中孵育抗体^®488山羊抗兔IgG（H+L）(ab96899号)在1/500稀释度下在22℃下30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）（1µg/1x10）⁶电池）在相同的条件下使用。采集了超过5000个事件。