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.1999年8月:112(第16部分):2775-84。
doi:10.1242/jcs.112.16.2775。

钙网蛋白-底物相互作用的体外重建

附属公司

钙网蛋白-底物相互作用的体外重建

J R彼得森等。 细胞科学杂志. 1999年8月.

摘要

钙网蛋白是一种可溶性内质网驻留蛋白,是糖蛋白的分子伴侣。我们在体外重建了重组钙网蛋白与两种糖蛋白底物(水泡性口炎病毒G蛋白和流感血凝素)的结合。发现这种结合是直接的,需要在底物糖蛋白上的单葡萄糖基、天冬酰胺连接的低聚糖,而不需要其他细胞因子。通过将底物与糖基修饰酶葡萄糖苷酶II和UDP-葡萄糖的纯化制剂进行培养,可以在体外调节结合,从而重现体内发生的糖基修饰对钙网蛋白结合的调节。利用纯化的ER酶和重组钙网蛋白,建立了一种体外重建复杂、多成分伴侣结合循环的方法。此外,我们证明钙网蛋白的酸性C末端62残基对于底物结合是不必要的,而进一步的缺失抑制底物结合。

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