抗HIF-1α-PART[EP1215Y]（AB51608）

封闭缓冲液：5%奶4小时16小时^°C.

见复审

Ab51608通过ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）在COLC2处理的HeLa细胞系中染色HIF-1α。用4%的多聚甲醛通过0.1% Triton X-100渗透固定细胞。样品与原代抗体（1/500）一起孵育。阿列克萨氟^®488的山羊抗兔IgG（1/200）作为第二抗体。用DAPI（右手图像）对细胞核进行复染。

用AB51608对福尔马林固定石蜡包埋的人CRC肿瘤组织进行HIF-1α染色的免疫组化分析切片Endogenous peroxidase抑制7.5% h_二o_二室温下

在人的中枢肿瘤区，β-catenin通常定位于细胞膜（A），而细胞质GRP78（B）仅观察到弱染色。HIF-1α染色呈阴性（C）。在入侵前线可检测到强的β-连环蛋白，表明EMT（D，G）。在相应的区域中发现有较强的胞浆GRP78表达（E，H）。在某些情况下，核强度很强。HIF-1α染色（F，缺氧），但在其他（I，无缺氧）（放大200×；鳞片棒：100μm）。

叠加直方图显示HeLa未处理（蓝线）和HeLa治疗（红线- Deferoxamine，1mm，24小时）细胞用AB51608染色。用80%甲醇（5分钟）固定细胞，然后用0.1%个PBS TWEN通透20分钟。然后将细胞在1X PBS／10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中孵育，以阻断非特异性蛋白-蛋白相互作用，随后抗体（AB51608，1/11709稀释）在22℃下30分钟。^®488羊抗兔IgG（H＆L）AB1500在22℃下稀释1/2000分钟，持续30分钟。

用20MW氩离子激光器（48 8nm）和525/30带通滤波器采集5000个事件。

用0.5mg HeLa核DFO处理的全细胞提取物对HIF-1α进行免疫沉淀AB180880）5μg的兔多克隆HIF1α和50μL的蛋白G磁珠（+）。对照组（-）未添加抗体。

将抗体与蛋白G珠一起搅拌10min，将HeLa DFO处理的RIPA缓冲液中稀释的全细胞提取物裂解物加入到样品中，在搅拌下再孵育10分钟。

加入40μL的SDS缓冲液洗脱蛋白质，在70℃下孵育10min；在SDS-PAGE凝胶上分离各样品的10μL，转移到硝酸纤维素膜上，用5% BSA封闭，用未纯化的AB51608进行检测。

次级：小鼠单克隆抗体[SB62A]兔IgG轻链（HRP）的次级抗体AB9697）

频带：110 kDa；HIF1α

用1mm去铁胺（DFO）治疗HeLa细胞24h，用多聚甲醛固定，荧光显微镜观察。用1X阻断缓冲液封闭细胞并染色。AB12685）未纯化的AB51608在1:500中使用。DAPI用于标记细胞核。HIF1α染色不存在于未处理的细胞中，并由DFO治疗诱导。HIF1α定位于细胞核。

AB51608免疫组织化学染色（IHC-P-多聚甲醛固定，石蜡包埋切片）染色HIF-1α。将组织固定并石蜡包埋，在TrIS/EDTA缓冲液PH9中通过热中介进行抗原修复。样品与原代抗体（1/100）一起孵育。未稀释的HRP结合抗兔IgG作为第二抗体。组织用苏木精复染。

未纯化的Ab51608在黄芩素处理HepG2细胞中的HIF-1α染色AB120 723），通过ICC/IF。HIF-1α表达的增加与黄芩苷浓度的增加有关，如文献中所描述的。
在不同浓度的培养基中，在37°C孵育6h。AB120 723（黄芩素）在DMSO，室温下用4%甲醛固定10分钟，用含10%山羊血清的PBS、0.3米甘氨酸、1% BSA和0.1%吐温在室温下封闭2h。Ab51608（5μg/ml）处理细胞在4°C过夜，在含有1% BSA和0.1%吐温的PBS中进行染色。DyLAME 488山羊抗兔多克隆抗体AB96899以1/250稀释度作为第二抗体。

石蜡包埋福尔马林固定人胃癌组织HIF-1α染色的免疫组化分析AB15608稀释度为1/600。组织切片用Mayer苏木精复染。柠檬酸缓冲液（pH 6）抗原检索的标准方法学

C.HIF-1α主要定位于肿瘤细胞核（阳性表达×400）。
d.HIF-1α原始放大倍数×100。

A51608在未处理的HeLa细胞系中通过ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）染色HIF-1α。用4%的多聚甲醛通过0.1% Triton X-100渗透固定细胞。样品与原代抗体（1/500）一起孵育。阿列克萨氟^®488的山羊抗兔IgG（1/200）作为第二抗体。用DAPI（右手图像）对细胞核进行复染。

未纯化的AB51608免疫组化分析显示乳腺癌组织呈阳性染色。

未纯化的AB51608免疫组化分析显示结肠腺癌组织呈阳性染色。

在用IHC染色方案开始之前，通过微波方法进行热介导的抗原检索。

未纯化的AB51608免疫组化染色在宫颈鳞癌组织中呈阳性染色。

在用IHC染色方案开始之前，通过微波方法进行热介导的抗原检索。

抗HIF-1α-未纯化抗体（AB51608）在转染的siRNA（LANES1-3和7-9）或HIF-1α-siRNA（LANS 4-6和10-12）瞬时转染后与HEP3B细胞裂解物的反应性降低。用21% O孵育细胞。_二（车道1-6）或1% O_二（泳道7-12）在裂解前4h。在SDS-PAGE后，在25℃下，在未经纯化的AB51608（1/1000稀释5%牛奶）孵育5%小时牛奶，在4℃下孵育16h，然后用抗兔HRP结合的二级抗体孵育，然后用ECL培养。

见复审

ABCAM推荐使用5%的牛奶作为阻断剂，在初级和次级孵育期间减少到2%的牛奶。ABCAM欢迎客户的反馈，并感谢您对本产品和上述数据的任何评论。