重组抗HIF-1α抗体[EP1215Y]（ab51608）

阻断缓冲液：5%牛奶，4小时^°C、 在

见Abreview

用ab51608作HIF-1α染色法对福尔马林固定石蜡包埋的人大肠癌组织进行免疫组化分析，切片内源性过氧化物酶被7.5%H抑制₂O₂室温下

在肿瘤中心区，β-catenin主要定位于细胞膜（A），而胞浆GRP78（B）和HIF-1α染色结果为阴性（C）。在侵袭前沿可检测到强核β-连环蛋白，提示EMT（D，G）。在相应区域，GRP78在胞浆中有强表达（E，H）。在某些情况下是一种强烈的核武器HIF-1α观察到染色（F，缺氧），但其他人（I，无缺氧）（放大200倍；比例尺：100µm）。

用ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光法）对Cocl2处理的HeLa细胞系进行ab51608染色。细胞用4%多聚甲醛和0.1%曲通X-100渗透固定。样品用原代抗体（1/500）孵育。Alexa Fluor公司^®以488株羊抗兔IgG（1/200）为二级抗体。细胞核用DAPI（右手图像）复染。

重叠直方图显示未经处理的HeLa（蓝线）和HeLa处理的（红线-去铁胺，1mM，24小时）细胞被ab51608染色。细胞用80%甲醇固定（5分钟），然后用0.1%PBS吐温渗透20分钟。然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中，以阻断非特异性蛋白质相互作用，然后用抗体（ab51608，1/11709稀释度）在22°C下30分钟。使用的次级抗体是Alexa Fluor^®488山羊抗兔IgG（H&L）(ab150081号)在1/2000稀释度下，在22°C下稀释30分钟

用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了大于5000个事件

用0.5mg HeLa核DFO处理的全细胞提取物免疫沉淀HIF-1-alpha(ab180880型)，5µg兔多克隆至HIF1α和50µl蛋白质g磁珠（+）。对照组（-）中未添加抗体。

抗体用蛋白G微球搅拌培养10min，将HeLa-DFO处理过的全细胞提取液稀释于RIPA缓冲液中，搅拌10min。

通过添加40µl SDS负载缓冲液洗脱蛋白质，并在70°C下孵育10分钟；在SDS-PAGE凝胶上分离每种样品10µl，转移到硝酸纤维素膜上，用5%BSA封闭，并用未纯化的ab51608进行探测。

次级：抗兔IgG轻链（HRP）的小鼠单克隆抗体[SB62a](ab99697号).

波段：110kDa；HIF1α

HeLa细胞未经处理或用1mM去铁胺（DFO）处理24h后，用多聚甲醛固定，荧光显微镜下成像。细胞被阻断，用1X阻断缓冲液染色(ab126587号)公元608:51500未经净化。用DAPI标记细胞核。HIF1α染色在未处理的细胞中缺失，并由DFO处理诱导。HIF1α定位于细胞核。

ab51608免疫组化法（IHC-P-多聚甲醛固定石蜡包埋切片）对人卵巢癌组织切片HIF-1-alpha的染色。组织固定，石蜡包埋，在Tris/EDTA缓冲液pH9中热介导抗原回收。样品用原代抗体（1/100）孵育。以未稀释的HRP结合的抗兔IgG作为次级抗体。组织用苏木精复染。

黄芩素处理HepG2细胞的未纯化ab51608染色(ab120723号)国际商会/国际单项体育联合会。如文献所述，HIF-1-α表达增加与黄芩素浓度增加相关。
细胞在37℃下在含有不同浓度ab120723号（黄芩素）在二甲基亚砜中，室温下用4%甲醛固定10分钟，室温下用含10%山羊血清、0.3 M甘氨酸、1%牛血清白蛋白和0.1%吐温的PBS封闭2小时。在含有1%BSA和0.1%吐温的PBS中，在4℃下用ab51608（5µg/ml）对处理过的细胞进行染色。DyLight 488山羊抗兔多克隆抗体(ab96899号)以1/250稀释度作为次级抗体。

石蜡包埋福尔马林固定人胃癌组织HIF-1α免疫组化分析ab15608稀释1/600。组织切片用迈耶苏木精复染。柠檬酸缓冲液（pH6.0）抗原回收的标准方法

C。HIF-1α主要定位于肿瘤细胞核（阳性表达×400）。
D。HIF-1α原始放大倍率×100。

ab51608免疫细胞化学/免疫荧光法（ICC/IF）对未处理HeLa细胞系HIF-1-α的染色。细胞用4%多聚甲醛和0.1%曲通X-100渗透固定。样品用原代抗体（1/500）孵育。Alexa Fluor公司^®以488株羊抗兔IgG（1/200）为二级抗体。细胞核用DAPI（右手图像）复染。

未纯化ab51608免疫组化分析显示乳腺癌组织呈阳性染色。

用未纯化的ab51608进行免疫组化分析，在结肠腺癌组织中显示阳性染色。在开始IHC染色之前，通过微波方法进行热介导抗原回收。

未纯化ab51608免疫组化分析显示宫颈鳞状细胞癌组织呈阳性。在开始IHC染色前，通过微波方法进行热介导抗原回收。

瞬时转染干扰siRNA（lanes1-3和7-9）或HIF-1-αsiRNA（4-6和10-12道）后，抗HIF-1-α未纯化抗体（ab51608）与Hep3B细胞裂解物的反应性降低。细胞在含有21%O的培养基中培养₂（1-6车道）或1%O₂（7-12道）裂解前4h。SDS-PAGE后，在25℃下将膜在5%牛奶中封闭1h，然后在4℃下与未纯化的ab51608（1/1000稀释5%牛奶）孵育16h。然后用抗兔HRP结合的二级抗体培养印迹，然后用ECL显影。

见Abreview

Abcam建议使用5%的牛奶作为阻断剂，在一次和二次孵化期间降低到2%。Abcam欢迎客户的反馈，并将感谢您对本产品和上述数据的任何意见。