重组抗-HIF-1α[希腊语]希腊语[EP1215Y]（ab51608）

流式细胞术叠加直方图显示左侧HeLa用1mM去甲氧胺处理24小时，右侧HeLa未处理阴性，用ab51608染色（红线）。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中，以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用，随后使用抗体（ab51608）（1x 10⁶在22°C下，以0.2μg/ml（1/11000）的浓度在100μl中放置30分钟。

将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟

同种型对照抗体（黑线）是重组兔IgG，单克隆[EPR25A]-同种型对照，以与第一抗体相同的浓度和条件使用。未标记样本（蓝线）也用作对照。

使用50 mW蓝光激光器（488nm）和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。

在相同条件下，该抗体在含4%甲醛的HeLa Fixed（10分钟）/经0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟后发出阳性信号。

使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNAse，经Cocl2（500μM 20h+4h）、MG-132（10μM 4h）和5µg ab51608[EP1215Y]处理的2.5 x 10^5 HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞进行ChIC/CUT&RUN。所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，测序深度为1000万读。阴性IgG对照约172730图中还显示了。

可以下载映射读取的其他屏幕截图在这里.

日内瓦大学拥有与ChIC（染色质免疫清洗）方法相关的专利。

封闭缓冲液：4小时5%牛奶16小时^°C、

参见Abreview

使用ab51608进行HIF-1α染色，对福尔马林固定石蜡包埋的人CRC肿瘤组织进行免疫组织化学分析。7.5%H抑制切片内源性过氧化物酶₂O（运行）₂室温下

在人CRCs的中央肿瘤区域，β-连环蛋白通常定位于细胞膜（A），而细胞质GRP78（B）和HIF-1α染色呈阴性（C）。在入侵前沿可检测到强核β-连环蛋白，表明EMT（D，G）。在相应的区域中发现了强烈的细胞质GRP78表达（E，H）。在某些情况下，强烈的核反应HIF-1α观察到染色（F，缺氧），但其他（I，无缺氧）（放大200倍；比例尺：100µm）未观察到染色。

用免疫细胞化学/免疫荧光法（ICC/IF）对Cocl2处理的HeLa细胞系中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100渗透。样品与一级抗体孵育（1/500）。Alexa Fluor公司^®488-结合羊抗兔IgG（1/200）作为二级抗体。用DAPI（右手图像）对细胞核进行复染。

重叠直方图显示用ab51608染色的HeLa未处理（蓝线）和HeLa处理（红线-去甲氧胺，1mM，24小时）细胞。用80%甲醇固定细胞（5分钟），然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞，以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用，然后在22°C下用抗体（ab51608，1/11709稀释）培养30分钟。使用的二级抗体是Alexa Fluor^®488山羊抗兔IgG（H&L）(约150081)在22°C下以1/2000稀释30分钟。 

使用20mW氩离子激光器（488nm）和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 

使用0.5mg HeLa核DFO处理的全细胞提取物对HIF-1α进行免疫沉淀(约180880)、5µg兔多克隆到HIF1α和50µl蛋白g磁珠（+）。对照组（-）未添加抗体。

将抗体与蛋白G珠搅拌培养10分钟，将HeLa DFO处理的全细胞提取物裂解液稀释在RIPA缓冲液中添加到每个样品中，并在搅拌下再培养10分钟。

通过添加40µl SDS负载缓冲液洗脱蛋白质，并在70°C下培养10分钟；在SDS-PAGE凝胶上分离10µl每个样品，转移到硝化纤维素膜上，用5%BSA封闭，并用未纯化的ab51608进行探测。

次要：鼠单克隆[SB62a]兔IgG轻链二级抗体(ab99697型).

频带：110kDa；HIF1α

HeLa细胞未经处理或用1mM去甲氧胺（DFO）处理24h，用多聚甲醛固定，荧光显微镜成像。细胞被封闭并用1X封闭缓冲液染色(约126587). 以1:500的比例使用未净化的ab51608。用DAPI标记细胞核。未经处理的细胞中没有HIF1α染色，并且是由DFO处理诱导的。HIF1α定位于细胞核。

用免疫组织化学方法（IHC-P-副甲醛固定石蜡包埋切片）对人卵巢癌组织切片中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。将组织固定并包埋石蜡，在Tris/EDTA缓冲液pH9中通过热介导回收抗原。样品与一级抗体孵育（1/100）。未稀释的HRP结合抗兔IgG用作二级抗体。组织用苏木精复染。

黄芩素处理的HepG2细胞中未经纯化的ab51608染色HIF-1-alpha(约120723)国际商会/国际单项体育联合会。如文献所述，HIF-1α表达增加与黄芩素浓度增加相关。
细胞在37°C的培养基中培养6小时，培养基中含有不同浓度的约120723（黄芩素）置于二甲基亚砜中，室温下用4%甲醛固定10分钟，室温下使用含10%山羊血清、0.3M甘氨酸、1%牛血清白蛋白和0.1%吐温的PBS封闭2小时。用ab51608（5µg/ml）在4°C下在含有1%BSA和0.1%吐温的PBS中对处理过的细胞进行过夜染色。DyLight 488山羊抗兔多克隆抗体(约96899)以1/250稀释度使用作为第二抗体。

石蜡包埋福尔马林固定人胃癌组织HIF-1α免疫组化分析约15608稀释1/600。用迈尔苏木精对组织切片进行复染。使用标准方法检索柠檬酸缓冲液（pH 6.0）抗原

C。HIF-1α主要位于肿瘤细胞核内（阳性表达×400）。
D。HIF-1α原始放大倍数×100。

用ICC/IF（免疫细胞化学/免疫荧光）对未经处理的HeLa细胞系中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100渗透。样品与一级抗体孵育（1/500）。Alexa Fluor公司^®488-结合羊抗兔IgG（1/200）作为二级抗体。用DAPI（右侧图像）对细胞核进行复染。

使用未纯化的ab51608进行免疫组织化学分析，乳腺癌组织中显示阳性染色。

使用未纯化ab51608的免疫组织化学分析显示结肠腺癌组织中的阳性染色。在开始IHC染色方案之前，通过微波方法进行热介导抗原检索。

用未纯化的ab51608进行免疫组织化学分析，结果显示宫颈鳞状细胞癌组织呈阳性染色。在开始IHC染色方案之前，通过微波方法进行热介导抗原检索。

干扰siRNA（通道1-3和7-9）或HIF-1-alpha siRNA（区域4-6和10-12）瞬时转染后，抗-HIF-1-alpha未纯化抗体（ab51608）与减少的Hep3B细胞裂解物的反应性。细胞在21%O下培养₂（1-6车道）或1%O₂（7-12车道）进行4小时后再进行分析。SDS-PAGE后，在25℃下将膜在5%牛奶中封闭1h，然后在4℃下与未净化的ab51608（1/1000稀释5%牛奶）孵育16h。然后用抗兔HRP结合二级抗体培养印迹，然后用ECL培养。

参见Abreview

Abcam建议使用5%的牛奶作为阻断剂，在初级和次级孵化期间减少至2%的牛奶。Abcam欢迎客户反馈，欢迎对本产品和上述数据提出任何意见。