主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 抗HIF-1α的兔单克隆抗体[EP1215Y] 适用于:ICC/IF、ChIC/CUT&RUN seq、Flow Cyt(Intra)、IP、WB、IHC-P 反应对象:人类

相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 中国 [EP1215Y]至HIF-1α -
宿主 兔子 -
特异性 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:DFO处理的HeLa核裂解物( 约180880 ),经Cocl2处理的Ramos细胞裂解物。 IHC-P:人类卵巢癌、乳腺癌、结肠腺癌和宫颈鳞癌组织。 人胃癌与大肠癌组织 ICC/IF:DFO处理的Hela细胞、Cocl2处理的Hela细胞和黄芩素处理的HepG2细胞 流式细胞周期(内部):DFO处理的HeLa细胞 IP:DFO处理的HeLa核裂解物 ChIC/CUT&RUN-Seq:HeLa细胞。
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常规说明 关于小鼠特异性Hif-1-alpha兔单克隆抗体,请参见 ab179483(克隆ID:EPR16897)。 约179483 已确认WB中的老鼠样本。 我们对大鼠的特异性有不同的客户反馈,因此我们无法用大鼠样本确认和保证其性能。 有关更多信息,请联系技术团队。 该产品是一种重组单克隆抗体,具有以下优点: -高批次一致性和再现性 -提高敏感性和特异性 -长期供应安全 -无动物制作
有关详细信息 请看这里 . 我们的RabMAb ® 该技术是一种基于杂交瘤的专利技术,用于制备兔单克隆抗体。 有关我们专利的详细信息,请参阅 拉布MAb ® 专利 .
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存温度为-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
解离常数 (K) 天 ) -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59%PBS、40%甘油、0.05%BSA -
正在加载浓度信息。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 EP1215Y型 -
同种型 免疫球蛋白G -
新冠肺炎疫苗
相关产品
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替代版本 -
检测试剂盒 -
兼容的辅助设备 -
共轭试剂盒 -
同位素控制 -
阳性对照 -
重组蛋白 -
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应用
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靶标
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功能 作为缺氧适应性反应的主转录调节器发挥作用。 在缺氧条件下,激活40多个基因的转录,包括促红细胞生成素、葡萄糖转运蛋白、糖酵解酶、血管内皮生长因子和其他蛋白产物增加氧气输送或促进代谢适应缺氧的基因。 在胚胎血管生成、肿瘤血管生成和缺血性疾病的病理生理学中发挥重要作用。 与靶基因启动子缺氧反应元件(HRE)内的核心DNA序列5'-[AG]CGTG-3'结合。 激活需要招募转录辅激活物,如CREBPB和EP300。 活动通过与NCOA1或NCOA2两者的交互增强。 与氧化还原调节蛋白APEX的相互作用似乎激活了CTAD,并增强了NCOA1和CREBBP的激活。 -
组织特异性 在肾脏和心脏中含量最高的大多数组织中表达。 由于肿瘤内缺氧以及编码癌蛋白和抑癌基因突变,在大多数常见人类癌症及其转移瘤中过度表达。 -
序列相似性 包含1个基本螺旋-环-螺旋(bHLH)域。 包含1个PAC(PAS-associated C-terminal)域。 包含2个PAS(PER-ARNT-SIM)域。 -
结构域 包含两个独立的C末端交易激活域,NTAD和CTAD,它们协同工作。 它们的转录活性受到干预抑制域(ID)的抑制。 -
翻译后修饰 在常氧条件下,通过EGLN1/PHD1和EGLN2/PHD2在氧依赖降解域(ODD)的Pro-402和Pro-564上羟基化。 EGLN3/PHD3也显示为羟基化Pro-564。 羟基脯氨酸促进与VHL的相互作用,启动快速泛素化和随后的蛋白酶体降解。 USP20脱去泛素。 缺氧时,脯氨酸羟基化受损,泛素化减弱,导致稳定。 在常氧条件下,HIF1AN在Asn-803上羟基化,从而消除与CREBBP和EP300的相互作用并阻止转录激活。 这种羟基化被Cu/Zn-亲水体Clioquinol抑制。 Cys-800的S-亚硝基化可能是增加HIF-1复合物转录活性所必需的p300辅活化子的募集的原因。 DNA结合需要磷酸化。 磺酰化; 在低氧条件下通过SUMO1。 Sumoylation通过与RWDD3的相互作用而增强。 SENP1的去甲酰化导致HIF1A稳定性和转录活性增加。 泛素化; 在常压下,在羟基化和与VHL相互作用后。 Lys-532似乎是泛素化的主要位点。 Clioquinol是Cu/Zn的亲合物,通过阻止Asn-803的羟基化来抑制泛素化。 天冬酰胺的铁和2-酮戊二酸依赖性3-羟基化在HIF-CTAD结构域内具有(S)立体特异性。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 常氧状态下的细胞质,缺氧反应中的核移位。 低氧条件下,在细胞核中与SUMO1进行结肠酸化。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 ARNT相互作用蛋白抗体 ARNT相互作用蛋白抗体 碱性螺旋-环-螺旋PAS蛋白MOP1抗体
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图片
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流式细胞术叠加直方图显示左侧HeLa用1mM去甲氧胺处理24小时,右侧HeLa未处理阴性,用ab51608染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后使用抗体(ab51608)(1x 10 6 在22°C下,以0.2μg/ml(1/11000)的浓度在100μl中放置30分钟。 将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同种型对照抗体(黑线)是重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同种型对照,以与第一抗体相同的浓度和条件使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 在相同条件下,该抗体在含4%甲醛的HeLa Fixed(10分钟)/经0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟后发出阳性信号。 -
所有车道: 1/2000稀释度的抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608) 车道1: MCF-7(常氧) 车道2: 用0.5%氧气处理MCF-7 24小时 每车道30000个细胞的裂解物/蛋白质。 次要 所有车道: 1/1000稀释度的多克隆猪抗兔IgG HRP 预测的带宽大小: 93千Da 封闭缓冲液:4小时5%牛奶16小时 ° C、 -
免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)-抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608) Zeindl-Eberhart E等人。上皮-间充质转化诱导人类大肠肿瘤细胞的内质网应激反应。 《公共科学图书馆·综合》9:e87386(2014)。 使用ab51608进行HIF-1α染色,对福尔马林固定石蜡包埋的人CRC肿瘤组织进行免疫组织化学分析。 7.5%H抑制切片内源性过氧化物酶 2 O(运行) 2 室温下 在人CRCs的中央肿瘤区域,β-连环蛋白通常定位于细胞膜(A),而细胞质GRP78(B)和 HIF-1α 染色呈阴性(C)。 在入侵前沿可检测到强核β-连环蛋白,表明EMT(D,G)。 在相应的区域中发现了强烈的细胞质GRP78表达(E,H)。 在某些情况下,强烈的核反应 HIF-1α 观察到染色(F,缺氧),但其他(I,无缺氧)(放大200倍;比例尺:100µm)未观察到染色。 -
用免疫细胞化学/免疫荧光法(ICC/IF)对Cocl2处理的HeLa细胞系中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。 细胞用4%多聚甲醛固定,0.1%Triton X-100渗透。 样品与一级抗体孵育(1/500)。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合羊抗兔IgG(1/200)作为二级抗体。 用DAPI(右手图像)对细胞核进行复染。 -
重叠直方图显示用ab51608染色的HeLa未处理(蓝线)和HeLa处理(红线-去甲氧胺,1mM,24小时)细胞。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Tween渗透20分钟。然后在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中培养细胞,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后在22°C下用抗体(ab51608,1/11709稀释)培养30分钟。 使用的二级抗体是Alexa Fluor ® 488山羊抗兔IgG(H&L)( 约150081 )在22°C下以1/2000稀释30分钟。 使用20mW氩离子激光器(488nm)和525/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
使用0.5mg HeLa核DFO处理的全细胞提取物对HIF-1α进行免疫沉淀( 约180880 )、5µg兔多克隆到HIF1α和50µl蛋白g磁珠(+)。 对照组(-)未添加抗体。 将抗体与蛋白G珠搅拌培养10分钟,将HeLa DFO处理的全细胞提取物裂解液稀释在RIPA缓冲液中添加到每个样品中,并在搅拌下再培养10分钟。 通过添加40µl SDS负载缓冲液洗脱蛋白质,并在70°C下培养10分钟; 在SDS-PAGE凝胶上分离10µl每个样品,转移到硝化纤维素膜上,用5%BSA封闭,并用未纯化的ab51608进行探测。 次要:鼠单克隆[SB62a]兔IgG轻链二级抗体( ab99697型 ). 频带:110kDa; HIF1α -
HeLa细胞未经处理或用1mM去甲氧胺(DFO)处理24h,用多聚甲醛固定,荧光显微镜成像。 细胞被封闭并用1X封闭缓冲液染色( 约126587 ). 以1:500的比例使用未净化的ab51608。 用DAPI标记细胞核。 未经处理的细胞中没有HIF1α染色,并且是由DFO处理诱导的。 HIF1α定位于细胞核。 -
抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608)(1/100稀释)+经10µg Cocl2处理的Ramos细胞 次要 山羊抗狂犬病IgG,(H+L),HRP-结合1/1000稀释 预测的带宽大小: 93千Da -
用免疫组织化学方法(IHC-P-副甲醛固定石蜡包埋切片)对人卵巢癌组织切片中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。 将组织固定并包埋石蜡,在Tris/EDTA缓冲液pH9中通过热介导回收抗原。 样品与一级抗体孵育(1/100)。 未稀释的HRP结合抗兔IgG用作二级抗体。 组织用苏木精复染。 -
黄芩素处理的HepG2细胞中未经纯化的ab51608染色HIF-1-alpha( 约120723 )国际商会/国际单项体育联合会。 如文献所述,HIF-1α表达增加与黄芩素浓度增加相关。 细胞在37°C的培养基中培养6小时,培养基中含有不同浓度的 约120723 (黄芩素)置于二甲基亚砜中,室温下用4%甲醛固定10分钟,室温下使用含10%山羊血清、0.3M甘氨酸、1%牛血清白蛋白和0.1%吐温的PBS封闭2小时。 用ab51608(5µg/ml)在4°C下在含有1%BSA和0.1%吐温的PBS中对处理过的细胞进行过夜染色。 DyLight 488山羊抗兔多克隆抗体( 约96899 )以1/250稀释度使用作为第二抗体。 -
免疫组织化学(福尔马林/PFA-固定石蜡包埋切片)-抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608) Chen L等人。胃癌患者胃切除术后HIF-1α过度表达与总体生存率低和无病生存率相关。 《公共科学图书馆·综合》9:e90678(2014)。 石蜡包埋福尔马林固定人胃癌组织HIF-1α免疫组化分析 约15608 稀释1/600。 用迈尔苏木精对组织切片进行复染。 使用标准方法检索柠檬酸缓冲液(pH 6.0)抗原 C。 HIF-1α主要位于肿瘤细胞核内(阳性表达×400)。
D。 HIF-1α原始放大倍数×100。 -
用ICC/IF(免疫细胞化学/免疫荧光)对未经处理的HeLa细胞系中的HIF-1-alpha进行ab51608染色。 细胞用4%多聚甲醛固定,0.1%Triton X-100渗透。 样品与一级抗体孵育(1/500)。 Alexa Fluor公司 ® 488-结合羊抗兔IgG(1/200)作为二级抗体。 用DAPI(右侧图像)对细胞核进行复染。 -
使用未纯化的ab51608进行免疫组织化学分析,乳腺癌组织中显示阳性染色。 -
使用未纯化ab51608的免疫组织化学分析显示结肠腺癌组织中的阳性染色。 在开始IHC染色方案之前,通过微波方法进行热介导抗原检索。 -
用未纯化的ab51608进行免疫组织化学分析,结果显示宫颈鳞状细胞癌组织呈阳性染色。 在开始IHC染色方案之前,通过微波方法进行热介导抗原检索。 -
所有车道: 抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608),1/2000稀释(未净化) 车道1: HeLa核提取物裂解物( 约150036 ) 车道2: Hela DFO处理的(0.5mM,24小时)核裂解物( 约180880 ) 每车道40µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/10000 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 93千Da 观察到的频带大小: 110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 8分钟 Abcam建议使用5%的牛奶作为阻断剂,在初级和次级孵化期间减少至2%的牛奶。 Abcam欢迎客户反馈,欢迎对本产品和上述数据提出任何意见。 -
干扰siRNA(通道1-3和7-9)或HIF-1-alpha siRNA(区域4-6和10-12)瞬时转染后,抗-HIF-1-alpha未纯化抗体(ab51608)与减少的Hep3B细胞裂解物的反应性。 细胞在21%O下培养 2 (1-6车道)或1%O 2 (7-12车道)进行4小时后再进行分析。 SDS-PAGE后,在25℃下将膜在5%牛奶中封闭1h,然后在4℃下与未净化的ab51608(1/1000稀释5%牛奶)孵育16h。 然后用抗兔HRP结合二级抗体培养印迹,然后用ECL培养。 -
所有车道: 抗-HIF-1α抗体[EP1215Y](ab51608),1/2000稀释(未净化) 车道1: HeLa全细胞裂解液(未经处理,阴性对照) 车道2: HeLa DFO处理的(0.5mM,24h)全细胞裂解液 3号车道: HeLa核细胞裂解物(未经处理,阴性对照) 车道4: HeLa核DFO处理的(0.5mM,24h)细胞裂解液 每车道40µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释度为1/10000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 93千Da 观察到的频带大小: 110千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 2分钟 Abcam建议使用5%的牛奶作为阻断剂,在初级和次级孵化期间减少至2%的牛奶。 Abcam欢迎客户反馈,欢迎对本产品和上述数据提出任何意见。
实验方案
数据表及文件
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数据表下载
文献 (304)
李YK 等。 卵巢癌相关ESM1的验证及其生物学功能和预后意义。 国际生物科学杂志 19:258-280 (2023). 公共医学:36594088 萨卡尔·P 等。 进行性多发性硬化患者线粒体富马酸水合酶表达减少导致体外间充质基质细胞介导的神经保护受损。 Mult Scler公司 28:1179-1188 (2022). 公共医学:34841955 唐HY 等。 PDGFRβ通过PI3K/AKT/mTOR/c-Myc途径调节骨肉瘤HOS细胞的有氧糖酵解。 生物化学细胞生物学 100:75-84(2022)。 公共医学:34678088 基兰西北 等。 MicroRNA-210调节人类原代星形胶质细胞的代谢和炎症状态。 神经炎症杂志 19:10 (2022). 公共医学:34991629 陈Z 等。 LncRNA FAM83A-AS1在肺腺癌中通过HIF-1α/糖酵解轴促进肿瘤增殖和迁移。 国际生物科学杂志 18:522-535 (2022). 公共医学:35002507