主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[E47]到p53 适用于:Flow Cyt(Intra)、IHC-P、ICC/IF、WB、IP 淘汰验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体 [E47]至p53 -
宿主 兔子 -
特异性 该抗体克隆可识别人类样本中的野生型和突变型p53。 它不是为了识别任何特定的p53突变而设计的。 我们已经通过实验证实了这一点,并且已经能够通过各种应用和治疗在不同的细胞系中检测到p53。 重要提示:不同细胞系之间p53表达水平差异很大。 据报道,p53突变使蛋白质更稳定,因此突变细胞系通常比野生型细胞系表达更高水平的p53蛋白。 对于低表达野生型细胞系,p53的表达可以通过喜树碱或伊立替康等细胞治疗来增加。 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 人类 -
完 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 野生型p53:A549、HEK293、HepG2、MCF7、U-87 MG。 突变型p53:A431(R273H)、DU 145(P223L和V274F)、HAP1(S215G)、Jurkat(R196*)、MDA-MB-435(G266E)、Raji(R213Q和Y234H)、Ramos(I254N)、SK-BR-3(R175H)、T-47D(L194F)。 未经诱导表达最高水平p53的细胞系为HEK293(WT p53)、A431和HAP1(突变型p53)。 阴性细胞株:Saos-2。 IHC-P对照组:膀胱、皮肤癌、胶质瘤、胃腺癌、人乳腺癌和肺癌组织、人结肠腺癌。
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常规说明
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:49%PBS、50%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 纯化蛋白A -
克康宁 单克隆 -
克隆编号 E47型 -
同种型 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
同位素控制 -
阳性对照
应用
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靶标
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功能 在多种肿瘤类型中起抑癌作用; 根据生理环境和细胞类型诱导生长停滞或凋亡。 作为一种反式激活剂参与细胞周期调节,通过控制这一过程所需的一组基因来负向调节细胞分裂。 其中一个激活的基因是周期素依赖性激酶的抑制剂。 凋亡诱导似乎是通过刺激BAX和FAS抗原表达或抑制Bcl-2表达介导的。 包含在Notch信号交叉中。 异构体2增强来自一些但不是所有TP53诱导启动子的亚型1的反式激活活性。 异构体4抑制反式激活活性并损害由异构体1介导的生长抑制。 异构体7抑制异构体1介导的凋亡。 -
组织特异性 无处不在的。 等位基因在广泛的正常组织中表达,但以组织依赖的方式表达。 同工酶2在大多数正常组织中表达,但在大脑、肺、前列腺、肌肉、胎脑、脊髓和胎肝中未检测到。 同工酶3在大多数正常组织中表达,但在肺、脾、睾丸、胎脑、脊髓和胎肝中未检测到。 同工酶7在大多数正常组织中表达,但在前列腺、子宫、骨骼肌和乳腺中未检测到。 仅在结肠、骨髓、睾丸、胎脑和肠中检测到8号异构体。 同工酶9在大多数正常组织中表达,但在大脑、心脏、肺、胎肝、唾液腺、乳腺或肠中未检测到。 -
疾病相关 注=TP53在多种转化细胞中含量增加。 大约60%的癌症中TP53经常发生突变或失活。 在Barrett化生中发现TP53缺陷,即食管下部正常复层鳞状上皮被化生柱状上皮取代。 在大约10%的慢性胃食管反流病患者中,这种情况是一种并发症,容易发展为食管腺癌。 TP53缺陷是食管癌(ESCR)的原因[MIM:133239]。 TP53缺陷是Li-Fraumen综合征(LFS)的原因[MIM:151623]。 LFS是一种常染色体显性家族性癌症综合征,其经典形式是指先证者在45岁之前患有肉瘤,一级亲属在45岁以前患有任何肿瘤,另一级亲属则在45岁前患有任何肿瘤或任何年龄的肉瘤。 已经提出了LFS的其他临床定义(PubMed:8118819和PubMed:8718514),称为Li-Fraumeni-like综合征(LFL)。 在这些受影响的家庭中,亲属在异常的早期发展出一系列不同的恶性肿瘤。 TP53种系突变携带者中80%的肿瘤发生于四种类型的癌症:乳腺癌、软组织和骨肉瘤、脑肿瘤(星形细胞瘤)和肾上腺皮质癌。 较少见的肿瘤包括15岁之前的脉络丛癌或乳头状瘤、5岁之前的横纹肌肉瘤、白血病、Wilms肿瘤、恶性叶状瘤、结直肠癌和胃癌。 TP53缺陷涉及头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)[MIM:275355]; 也称为头颈部鳞状细胞癌。 TP53缺陷是肺癌(LNCR)的原因[MIM:211980]。 TP53的缺陷是脉络丛乳头状瘤(CPLPA)的原因[MIM:260500]。 脉络丛乳头状瘤是一种生长缓慢的脉络丛良性肿瘤,常侵犯软脑膜。 儿童通常位于侧脑室,而成年人则多位于第四脑室。 脑积水是常见的,无论是由于梗阻还是由于肿瘤分泌的脑脊液。 如果发生恶性转化,则称为脉络丛癌。 原发性脉络丛肿瘤很少见,通常发生在儿童早期。 TP53缺陷是肾上腺皮质癌(ADCC)的原因[MIM:202300]。 ADCC是一种罕见的儿童肾上腺皮质肿瘤。 在Beckwith-Weedemann综合征患者中发生频率增加,是Li-Fraumen综合征的组成肿瘤。 -
序列相似性 属于p53家族。 -
结构域 核输出信号起转录抑制域的作用。 TADI和TADII基序(残基17至25和48至56)对应于9aaTAD基序,它们是存在于大量酵母和动物转录因子中的反式激活域。 -
翻译后修饰 乙酰化。 CREBBP对Lys-382的乙酰化增强了转录活性。 SIRT1对Lys-382的去乙酰化损伤其诱导促凋亡程序和调节细胞衰老的能力。 Ser残基上的磷酸化介导转录激活。 通过HIPK1进行磷酸化(根据相似性)。 HIPK4在Ser-9的磷酸化增加了对BIRC5启动子的抑制活性。 VRK1对Thr-18进行磷酸化。 CHEK2对Ser-20进行磷酸化,以应对DNA损伤,从而防止MDM2泛素化。 TAF1对Thr-55进行磷酸化,促进MDM2介导的降解。 紫外线照射下,HIPK2在Ser-46上磷酸化。 CREBBP乙酰化需要Ser-46上的磷酸化。 在紫外线照射下,Ser-392被磷化,而不是γ射线照射。 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 紫外线照射下Ser-15的磷酸化; 通过与BANP的交互增强。 在Thr-55处用PP2A-PPP2R5C全酶脱磷。 SV40小T抗原通过PP2A的AC形式抑制去磷酸化。 可能在C-末端碱性区发生O-糖基化。 在EB-1细胞系中研究。 MDM2和SYVN1泛素化,导致蛋白酶体降解。 RFWD3泛素化,与MDM2协同工作,可能催化p53/TP53上非蛋白酶体靶向的短聚泛素链的形成。 MKRN1在Lys-291和Lys-292处泛素化,导致蛋白酶体降解。 USP10脱去泛素,使其稳定。 TRIM24泛素化,导致蛋白酶体降解。 TOPORS泛滥成灾会导致降解。 USP7脱除泛素,实现稳定。 异构体4以MDM2依赖的方式单泛素化。 通过SETD7在Lys-372单甲基化,导致稳定和增加转录激活。 SMYD2在Lys-370处单甲基化,导致DNA结合活性和随后的转录调控活性降低。 Lys-372的单甲基化防止与SMYD2的相互作用以及随后在Lys-370的单甲基化。 通过EHMT1和EHMT2在Lys-373处二甲基化。 SETD8在Lys-382处单甲基化,促进与L3MBTL1的相互作用并导致抑制转录活性。 KDM1A对二甲基化Lys-370的去甲基化阻止了与TP53BP1的相互作用,并抑制了TP53介导的转录激活。 SUMO1进行酰化。 -
细胞定位 细胞质; 细胞质。 核心。 细胞核>PML体。 内质网。 与BANP的互动促进了核本地化。 与CHEK2一起加入PML机构; 核心。 细胞质。 大多数细胞定位于细胞核和细胞质。 在一些细胞中,细胞核内形成不同于核仁的病灶; 核心。 细胞质。 大多数细胞定位于细胞核,但在一些细胞的细胞质中发现; 核心。 细胞质。 主要定位于细胞核,细胞质中有少量染色; 核心。 细胞质。 以核为主,但用亚型4和细胞核表达时定位于细胞质。 细胞质。 以核为主,但在细胞应激后转移到细胞质。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 抗原NY-CO-13抗体 BCC7抗体 细胞肿瘤抗原p53抗体
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图片
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所有车道: 稀释1/1000的抗p53抗体[E47](ab32509) 车道1: Saos-2细胞裂解物 车道2: A431细胞裂解物 3号车道: 野生型HAP1细胞裂解物 车道4: TP53敲除HAP1细胞裂解物 车道5: MCF7细胞裂解物 车道6: HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 44千帕 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:稀释1/1000的抗p53抗体[E47]染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负载控制染色,以红色显示。在Western blot中,ab32509显示与p53特异性结合。 在野生型HAP1细胞裂解液中在50kDa处观察到一条带,在tp53敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成这张图像,对野生型和tp53敲除的HAP1细胞裂解物进行了分析。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
流式细胞术重叠直方图显示Hek-293阳性细胞(左)和MCF7阴性细胞(右)中野生型p53,ab32509染色(红线)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后使用抗体(ab32509)(1x 10 6 细胞在100μl中以0.2μg/ml(1/11865)的速度在22°C下放置30分钟。 二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附( 约150081 )在22°C下以1/4000的温度孵育30分钟。 同位素对照抗体(黑线)重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照( 约172730 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 在相同条件下,该抗体在80%甲醇固定/0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟的Hek-293中发出阳性信号。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型HAP1细胞(绿线)和TP53敲除HAP1的细胞(红线)中的突变p53,用ab32509染色。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后使用抗体(ab32509)(1x 10 6 细胞在100μl中以0.2μg/ml(1/550)的速度在22°C下放置30分钟。 二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附( 约150081 )在22°C下以1/4000的温度孵育30分钟。 同位素对照抗体重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照( 约172730 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用(野生型HAP1-黑线,TP53敲除HAP1-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 该抗体在用80%甲醇固定的HAP1(5分钟)/在相同条件下用0.1%PBS Triton X-100渗透15分钟的HAP1中给出阳性信号。 -
流式细胞术叠加直方图显示用ab32509染色的A-431细胞中的突变p53(红线)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。细胞在含有10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后用抗体(ab32509)(1x 10 6 细胞在100μl中0.2μg/ml(1/550))在22°C下培养30min。 二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附( 约150081 )在22°C下以1/4000的温度孵育30分钟。 同位素对照抗体(黑线)重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照( 约172730 )在与第一抗体相同的浓度和条件下使用。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 在相同条件下,该抗体在80%甲醇固定/0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟的a-431中发出阳性信号。 -
ab32509染色野生型Hap1细胞中的突变p53(顶面板)和p53敲除Hap1的细胞(底面板)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),用0.1%PBS-Triton X-100渗透5分钟,然后用1%牛血清/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后在4°C下用ab32509以0.2µg/ml和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 小鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 也适用于用100%甲醇固定的电池(5分钟)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
ab32509染色A431细胞突变型p53。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%PBS-Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后在4°C下用ab32509以0.2µg/ml和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 小鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 也适用于用4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
ab32509染色Hek293细胞(高表达细胞系)中的野生型p53。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%PBS-Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后在4°C下用ab32509以0.2µg/ml和 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 小鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 也适用于用4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
ab32509染色MCF7细胞(一种低表达细胞系)中的野生型p53。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%PBS-Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS吐温中封闭1小时。 然后将细胞在4°C下与0.2µg/ml的ab32509孵育过夜 约7291 ,小鼠单克隆[DM1A]到α-管蛋白-负载控制。 然后将细胞与 约150081 、山羊抗兔IgG-H&L(Alexa Fluor)多克隆二级抗体 ® 488),以1/1000稀释度预吸附(以绿色显示)和 ab150120型 小鼠IgG-H&L(Alexa Fluor)山羊多克隆二级抗体 ® 594),以1/1000稀释度预吸附(以伪红色显示)。 用DAPI标记细胞核DNA(以蓝色显示)。 也适用于用4%多聚甲醛固定的细胞(10分钟)。 使用高含量分析仪(Operetta CLS、Perkin Elmer)采集图像,并显示共焦截面的最大强度投影。 -
所有车道: 1/200稀释度的抗p53抗体[E47](ab32509) 车道1: A549(人肺癌上皮细胞),全细胞裂解物 车道2: HepG2(人肝癌上皮细胞),全细胞裂解物 3号车道: MCF-7(人乳腺癌上皮细胞),全细胞裂解物 车道4: T-47D(人乳腺导管上皮肿瘤上皮细胞),全细胞裂解物 车道5: A431(人表皮样癌上皮细胞),全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/20000 预测的带宽大小: 44千帕 阻塞/稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST 曝光时间:180秒 1-3通道:野生型p53细胞系 4-5通道:突变型p53细胞系 观测兆瓦数:50kDa,39kDa -
石蜡包埋人肺癌切片的免疫组织化学分析,在1/2000稀释度(0.49μg/mL)下用ab32509标记突变型p53。 切片用苏木精复染。 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP Polymer)作为二级抗体。 热介导抗原检索使用 约93684 (Tris/EDTA缓冲液,pH 9.0)。 人肺癌细胞核染色。 -
HEK-293(人类胚胎肾上皮细胞)细胞的细胞内流式细胞术分析,用纯化的ab32509在1/100稀释度(10µg/mL)下标记p53(红色)。 细胞用4%的聚甲醛固定,并用90%的甲醇渗透。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488, 约150077 )2000年1月使用二级抗体。 同位素对照-兔单克隆IgG(黑色)。 未标记对照-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞(蓝色)。
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (12)
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