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.1998年10月15日;335(第二部分):217-24。
doi:10.1042/bj3350217。

大鼠肝细胞自噬体的分离纯化与鉴定

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大鼠肝细胞自噬体的分离纯化与鉴定

P E斯特罗姆豪格等。 生物化学J. .

摘要

为了研究自噬体的性质和细胞内来源,已开发出从大鼠肝脏中纯化和分离这些细胞器的程序。分离的肝细胞与长春碱孵育以诱导自噬体积聚;然后将细胞均质并用组织蛋白酶C底物甘氨酰-l-苯丙氨酸2-萘胺处理,以引起溶酶体的渗透破坏。通过差速离心去除细胞核,并在不连续的Nycodenz密度梯度上分馏核后上清液。通过自噬细胞乳酸脱氢酶(LDH)含量识别的自噬体可以在中等密度的部分中恢复,不含细胞质和线粒体,通过在Percoll胶体密度梯度中离心,然后在碘克沙醇中浮选以去除Percoll颗粒,将自噬体与内质网和其他膜元件分离。最终的自噬体制备是自噬细胞LDH相对于完整细胞的24倍纯化,回收率为12%。纯化的自噬体含有具有正常超微结构的隔离细胞质,包括线粒体、过氧化物酶体和内质网,比例与完整细胞相同。然而,免疫印迹显示细胞骨架元件(微管蛋白、肌动蛋白和细胞角蛋白)相对缺乏,这可能会逃避自噬隔离。自噬体在溶酶体典型的蛋白质标记物(酸性磷酸酶、组织蛋白酶B、120kDa溶酶体糖蛋白)、内体(早期内体相关蛋白1、阳离子非依赖性甘露糖6-磷酸受体、脱乙酰糖蛋白受体)中没有富集或内质网(酯酶、78 kDa的葡萄糖调节蛋白、蛋白质二硫键异构酶),表明隔离膜不是直接从这些细胞器中衍生出来的,而是代表独特的细胞器(吞噬体)。

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引用人

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    1. 生物化学杂志。1991年10月5日;266(28):18995-9-公共医学
    1. 组织化学与细胞化学杂志。1990年11月;38(11):1571-81-公共医学
    1. 生物化学学报。1991;50(4-6):389-92-公共医学
    1. 细胞生物学杂志。1993年2月;120(4):897-908-公共医学
    1. 《生物化学杂志》1993年4月1日;291(第1部分):115-21-公共医学

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