《维罗尔杂志》。2006年11月；80(21): 10293–10306.
作为疫苗载体的非分段阴性传播病毒
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亚历山大·巴克利耶夫
马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所
马里奥·斯基亚多普洛斯
马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所
布莱恩·墨菲
马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所
彼得·柯林斯
马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所
马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所
*通讯作者。通讯地址：马里兰州贝塞斯达MSC 8007 South Dr.50号NIAID 6505室50号楼，邮编：20892-8007。电话：（301）594-1854。传真：（301）496-8312。电子邮件：vog.hin@v671BA. 活病毒载体时代始于1983年，当时Smith、Mackett和Moss构建了一种表达乙型肝炎表面抗原的重组痘苗病毒，并证明用重组病毒免疫兔子后可诱导产生乙型肝炎特异性抗体(113). 随后，用其他DNA病毒（如腺病毒和疱疹病毒）和阳性RNA病毒（如甲病毒和黄病毒）开发了活病毒载体。大量非片段负链RNA病毒（NNSV）的疫苗载体潜力在很大程度上仍未被探索，因为它们的基因组RNA在细胞培养中缺乏传染性，也没有重组插入外源基因的机制。NNSV（订单单核糖核酸)由四个家族组成：鼠疫病毒科以水疱性口炎病毒（VSV）和狂犬病病毒（RV）为代表；副粘病毒科包括仙台病毒（SeV）、人副流感病毒1型、2型、3型和4型（HPIV1-4）、麻疹和腮腺炎病毒、新城疫病毒（NDV）以及人呼吸道合胞病毒和偏肺病毒（HRSV和HMPV）；丝状病毒科含有埃博拉病毒和马尔堡病毒；和博尔纳病毒科含有博尔纳病病毒。1994年，Schnell、Mebatsion和Conzelmann开发了RV的反向遗传系统，该系统可以完全从克隆的cDNA中回收传染性病毒(102). 随后，许多其他NNSV的反向遗传系统迅速发展(17,22,33,50,55,69,73,76,83,133). 本次审查将重点关注NNSV的使用，尤其是鼠疫病毒科和副粘病毒科，作为活疫苗载体。
为什么使用载体疫苗，为什么选择NNSV？
一般来说，病毒病原体的减毒活疫苗是首选疫苗，因为它表达病毒抗原的全部补体，诱导广泛的局部和全身免疫，并提供持久的保护。然而，载体疫苗在某些情况下可能具有优势，包括那些涉及（i）减毒活疫苗可能不可行的病毒，例如人类免疫缺陷病毒（HIV），因为其能够建立持续感染，或埃博拉病毒，因为其高致病性，（ii）体外生长不良的病毒，如人乳头瘤病毒和丙型肝炎病毒，（iii）在疫苗开发过程中存在安全挑战的高致病性病毒，如严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）和埃博拉病毒，（iv）由于身体不稳定而失去传染性的病毒，例如HRSV，（v）能与循环病毒交换基因的病毒，如冠状病毒、流感病毒和肠道病毒。适当的载体疫苗可以克服这些具体挑战。此外，某些候选病毒载体的生物学特性可能会提高疗效，例如委内瑞拉马脑炎病毒以树突状细胞为靶点(59). 最后，载体疫苗的一个主要优点是，它可以被快速工程化，以产生针对新出现的高致病性病毒的疫苗。在这种情况下，新病原体的序列分析将确定可能的保护性抗原，其cDNA克隆将插入具有广泛临床系谱的预测试载体中，从而加快疫苗开发。
NNSV具有许多特征，这些特征使其成为病毒载体的候选者，也说明了载体的理想特性（图。). 首先，有许多特征鲜明的动物、鸟类和人类NNSV可作为载体。一些动物或鸟类的NNSV，如VSV和NDV，在抗原上与常见的人类病原体不同，因此基本上整个种群都应该容易感染并成功免疫。一些人类NNSV，如HPIV1、-2和-3，也有可能在易感人群中用作疫苗载体。例如，婴儿和幼儿对HPIV1、-2和-3的免疫学表现为幼稚；因此，HPIV1至-3的减毒版本可以开发成儿童疫苗载体。其次，人们对衰减NNSV的了解很多。在某些情况下，由于自然宿主范围的限制，动物或禽类病毒在灵长类中会减弱。在其他情况下，已经确定了减弱这些病毒的突变，并且可以通过反向遗传学进行操作。因此，有可能对每个表达外来病毒保护性抗原的NNSV载体进行减毒，以使其在减毒和目标人群免疫原性之间达到可接受的平衡。第三，NNSV作为载体在细胞基质中高效复制而被积极探索，例如符合人类使用条件的Vero细胞，这是疫苗制造的要求。第四，大多数NNSV可以通过鼻内途径有效感染，并有效诱导局部免疫球蛋白A和全身免疫球蛋白G抗体以及细胞介导的保护性免疫反应。无需注射的鼻内疫苗可以方便、安全地接种，有助于在疫情或流行病的情况下进行免疫接种。鼻内疫苗对可通过呼吸道感染和传播的病毒特别有用，如SARS-CoV和流感病毒。第五，NNSV作为载体在细胞质中复制，不整合到宿主基因组中，从而消除了对细胞转化的担忧。第六，涉及NNSV的基因交换是极其罕见的事件(114)并且在自然界中没有观察到，这表明在开放人群中使用NNSV疫苗病毒不会对疫苗病毒和流通病毒之间的重组造成威胁。缺乏重组也有助于插入的外源基因的稳定性。第七，NNSV编码5到11种不同的蛋白质，而大DNA病毒，如痘病毒，编码多达200种蛋白质。这些复杂病毒表达的几种蛋白质调节或拮抗宿主免疫反应，这可能会降低疫苗的效力。的确，大多数NNSV编码一个或两个干扰宿主干扰素系统的蛋白质（参考文献综述18和32)，但这些通常可以变异或删除(1,23,125). 麻疹病毒是一种显著免疫抑制的NNSV（由干扰素拮抗以外的机制介导），使其成为一种不太有吸引力的候选载体。此外，使用表达大量蛋白质的复杂载体可能不太理想，因为这些载体抗原可能会稀释针对外来抗原的所需抗体和细胞介导的反应，并导致整体记忆T细胞库的减少(58). 第八，NNSV的基因组由大多数不重叠的基因组成，并以单独的mRNA表达，因此构成了一个模块化组织，可以很容易地操作以插入和稳定维持外源插入物。
NNSV疫苗的构建
反向遗传学。
通过将编码功能性核衣壳病毒成分的质粒转染培养细胞，即（i）全长基因组或抗原（即复制中间产物）RNA和（ii）参与复制和转录的主要蛋白质，即核蛋白（N或NP），NNSV可以从克隆的cDNA中完全恢复，磷酸蛋白（P）和大聚合酶蛋白（L）（图。). HRSV的恢复和丝状病毒科此外，马尔堡病毒或埃博拉病毒成员分别需要转录延伸因子M2-1或转录激活因子VP30(17,26,129). 质粒通过转染到支持特定病毒复制的细胞系来传递。质粒表达由噬菌体T7 RNA聚合酶引导，可通过以下三种方式中的任何一种进行传递：（i）与表达T7聚合酶的重组痘苗病毒联合感染(135); （ii）组成性表达T7聚合酶的细胞的使用，目前可用作幼仓鼠肾系(6); 或（iii）编码T7聚合酶的质粒的共转染(134). 第三种方法（如图。)更可取，因为它允许在批准用于疫苗生产的细胞系（如Vero）中回收病毒，而不添加可能使监管批准复杂化的成分（如痘苗病毒）。这些RNA和蛋白质组分的细胞内表达导致病毒核衣壳的组装（尽管效率低下），该核衣壳能够进行基因表达和基因组复制，从而引发生产性感染，产生传染性病毒（图。).
从cDNA中恢复完整的传染性NNSV。顶部显示了一个编码副流感病毒完整抗原RNA的质粒。显示了外源性3′先导区和5′末端区，以及六个病毒基因：N，核蛋白；P、 磷蛋白、M、基质蛋白、F、融合蛋白、HN、血凝素-神经氨酸酶和L、大聚合酶亚单位。GS和GE转录信号分别在每个基因的开始和结束处显示为黑盒。抗原cDNA的左侧是T7 RNA聚合酶的启动子（T7 pr.），右侧是自裂核酶和T7终止子（T7tr.）。另外三个T7表达质粒编码重建生物活性核衣壳所需的N、P和L支持蛋白。T7 RNA聚合酶由携带巨细胞病毒启动子（CMV pr.）的共转染真核表达质粒提供。质粒被转染或电穿孔到细胞单层中，其中质粒表达的病毒RNA和蛋白质组分组装成功能性核衣壳并引发生产性感染。回收的病毒通过传代被放大，可以被斑块净化。
战略1。表达外源基因的野生型NNSV的衰减版本。
最简单的载体策略是表达一个或多个外源抗原，这些外源抗原来自已添加到完整的、具有复制能力的NNSV中的基因（图。). NNSV载体必须被充分减毒，才能安全地用于人类。在NNSV的情况下，如NDV，由于自然宿主限制，在灵长类动物中减弱(9)，野生型病毒可以直接用作载体。
NNSV矢量设计的三种策略。在图A中，通过插入编码外来抗原（麻疹病毒[MeV]HA糖蛋白）的转录盒来修饰完整的病毒（在本例中为HPIV3）。在B组中，NNSV（BPIV3）通过删除其表面糖蛋白基因（F和HN）并将其替换为目标病原体（HPIV3）中的基因（F与HN）来进行修饰，从而产生抗原嵌合病毒（B/HPIV3。在C组中，通过插入编码外源糖蛋白（HRSV F）的转录盒对抗原嵌合病毒（B/HPIV3）进行修饰。在每种情况下（A到C），外源糖蛋白的编码序列必须受与载体主干兼容的GS和GE信号的控制。
其他NNSV在用作人类潜在载体之前，需要通过反向遗传学进行衰减。例如，VSV不是一种常见的人类病原体，但VSV感染与人类疾病相关，尽管通常是轻微的（参考文献综述91). 因此，在将VSV用作疫苗载体之前，需要进行衰减和仔细的临床评估。另一个例子是HPIV3，如前所述，HPIV3可导致人类呼吸道疾病，因此必须制备类似的弱毒株并验证其安全性。
采用多种策略可以实现NNSV的衰减。病毒的基因顺序可以重新排列，这导致基因表达处于次优水平，从而降低复制效率(29). 衰减的核苷酸或更常见的氨基酸点突变可以通过反向遗传学识别并引入所需的组合(106,111). 以序列比对为指导，通过反向遗传学，点突变也常常可以在相关病毒之间“转移”(2,62,72). 删除或沉默非必要的辅助基因，包括那些编码干扰素拮抗蛋白的基因，通常会产生减弱的衍生物(三,23,126). 对于杆状病毒，通过部分截短G糖蛋白胞质尾部可以有效地减少复制，而不会显著降低免疫原性(65,79,88,98). 插入外源基因进行表达通常会自身产生衰减效应（见下文）。通过在相关的人类和动物或禽病毒之间交换内部蛋白基因，引入宿主范围限制，也可以实现病毒的衰减(78,105).
战略2。抗原嵌合病毒。
从添加的基因表达外来抗原的另一种方法是用感兴趣的致病性病毒的表面抗原替换载体的主要保护性表面抗原（图。). 这种结构被称为抗原嵌合病毒。只有当外源表面蛋白（i）有效地结合到病毒粒子中，并且（ii）在载体背景中起作用时，抗原嵌合病毒才是可行的（例如，能够有效地进行多周期复制）。
一些著名的例子是以VSV为基础的，其中VSV G糖蛋白被流感病毒的血凝素（HA）糖蛋白取代(88)或埃博拉、马尔堡或拉萨病毒的糖蛋白(31). 与VSV亲本相比，产生的嵌合体在体外被减弱，表明载体蛋白和外源糖蛋白之间存在一定程度的不相容性。然而，VSV复制的效率通常很高，因此可以容忍大量减少，此外，可能会增加疫苗的安全性。尽管嵌合体被减弱，但能够在体内复制，并且在小鼠或非人灵长类动物中具有免疫原性和保护性(31,35,46,88). 然而，并非所有基于VSV的嵌合体都具有复制能力。例如，用HRSV的G或F蛋白替换VSV G蛋白的嵌合体是不可行的，即使每个HRSV蛋白都被并入VSV颗粒中，即使F本身足以在体外赋予HRSV有效的感染性和生长性(47,124).
另一个例子是，将HPIV1的HN和F糖蛋白替换为HPIV3骨架导致嵌合体（图。)在体外和体内以野生型效率复制(111,121). 在这种情况下，与嵌合体相关的衰减缺失可能反映了这两种病毒之间的密切关系（它们都属于该属呼吸道病毒). 与这一想法一致的是，更密切相关的HPIV2（属卢布病毒)进入HPIV3并没有产生活的嵌合病毒。然而，当HPIV2的HN和F蛋白被修饰以用HPIV3的相应胞质域替换其胞质域时，可以恢复在体外有效复制的活性抗原嵌合体（图。)，尽管它们在体内被减弱(122). 因此，异源糖蛋白在抗原嵌合体中有效发挥作用的能力可能取决于其细胞质结构域与载体背景的匹配，这也许并不令人惊讶。
将外源糖蛋白并入涉及抗原嵌合病毒（B和C）和从添加基因（D和E）表达的外源糖蛋白的NNSV载体颗粒的示例。HPIV3的F和HN糖蛋白（A，黑色）被删除，并替换为HPIV1的F和H糖蛋白（红色），产生一种带有HPIV1（B）表面抗原的抗原嵌合病毒。只有当HPIV2 F和HN蛋白被修饰为分别含有HPIV3 F和HN蛋白的细胞质尾部时，含有HPIV2表面抗原（紫色）的HPIV3类似衍生物才是可行的（C）。埃博拉病毒GP（绿色）从HPIV3中添加基因的表达导致GP并入HPIV3载体颗粒（D），而禽流感HA蛋白（FLU，橙色）从NDV中添加基因表达的并入（蓝色）依赖于用NDV F蛋白（E）的胞质和跨膜结构域替换其胞质和膜结构域。外胚层、外胚层；tm，跨膜结构域；细胞、细胞质域。
另一个值得注意的抗原嵌合病毒涉及用来自其密切相关的人类对应物HPIV3的F和HN基因替换牛PIV3（BPIV3）的F和H表面糖蛋白基因，牛PIV4（BPIV2）在人类中因自然宿主范围限制而减弱（图。). 这产生了将BPIV3的宿主范围限制与HPIV3的主要抗原决定簇相结合的效果，产生了一种减毒病毒牛-人PIV3（B/HPIV3），该病毒在体外复制效率未降低，保留了非人类灵长类动物的宿主范围衰减表型，国家过敏和传染病研究所正在对其作为HPIV3疫苗进行临床评估(37,77,95).
战略3。表达额外外源基因的抗原嵌合病毒。
除了直接用作活疫苗外，抗原嵌合病毒还可用于表达来自添加基因的额外抗原（图。). 例如，刚才提到的B/HPIV3嵌合体也被用于表达来自附加基因的HRSV或HMPV的保护性抗原(96,97,119). 这些应用将产生针对HPIV3和HRSV或HPIV3与HMPV的双价疫苗，每种疫苗基于一种病毒。表达HRSV F糖蛋白的B/HPIV3目前正由MedImmune公司进行临床试验。
将外源基因插入NNSV基因组。
典型NNSV基因组的模块化组织如图所示。和转录起始于3′端（左端），基因由病毒聚合酶在基因起始（GS）和基因结束（GE）信号引导下顺序复制，形成每个基因的上游和下游限制。这些信号分别指导每个基因的转录起始和终止/聚腺苷酸化，产生单个mRNA。病毒启动子位于基因组（和抗原组）的3′端，大小从～44到～96个核苷酸不等，具体取决于病毒，GS和GE信号通常各有8到12个核苷酸长。因此顺式-动作信号短且有界限，这些特点进一步促进了工程。
通过构建外源开放阅读框的cDNA，构建表达外源抗原的转录盒，使其两侧带有载体特异性GS和GE信号。然后（通过cDNA中间产物）将该盒插入基因间区域两侧的NNSV载体的基因序列中。在回收的重组NNSV中，外源插入物被表达为编码外源蛋白的额外、单独的mRNA(8,68,100). NNSV能够耐受并高效表达插入第一个基因上游、基本上任何基因间区域或最后一个基因下游的外源基因(110,127,137).
NNSV的一个分类群有一个不寻常的要求，即基因组的核苷酸长度必须是6的偶数倍才能有效复制，这被认为反映了一个严格的核衣壳组织，其中每个N单体正好与6个核苷酸结合(15,52). “六条规则”仅适用于副粘病毒亚科亚科副粘病毒科包括SeV、HPIV和NDV。此外，对于“六条规则”病毒，每个GS信号在基因组六聚体定相方面的位置可能在转录效率中发挥作用。因此，对于这些病毒，插入长度和组织必须符合这些限制。
插入物在基因序列中的位置。
NNSV的转录具有极性梯度，因此启动子近端基因的表达效率高于启动子远端基因。因此，当外源基因位于上游位置时，其表达效率更高。对于VSV，每个基因连接处的转录减少约30%(43,132). 与此一致，当从插入重组VSV载体位置2或5的基因中表达棉尾兔乳头瘤病毒L1蛋白时，上游位置的表达水平提高了4.3倍。这与诱导16倍高滴度的L1特异性血清抗体和更好的抗乳头瘤病毒攻击保护有关，而两种结构在诱导针对VSV载体的血清抗体方面没有差异(90). SeV和HRSV等病毒的基因表达梯度不太规则(40,53). 尽管如此，对于SeV来说，外源基因的位置与其表达水平之间存在一致的关系(127).
由于转录的极性，插入一个或多个外源基因也会减少下游载体基因的表达，从而减少载体在体内外的复制(24,107,110,127,131,137). 将外源基因插入启动子近端位置比插入启动子远端位置更具衰减性(110,127)可能是因为启动子近端插入影响更多下游载体基因。对于NDV和VSV，N和P基因之间的插入在基因连接中具有最大的衰减作用(131,137). 这种不成比例的效应似乎是因为N蛋白和P蛋白（核衣壳的两种紧密相互作用的蛋白）之间的摩尔比的改变对病毒转录和RNA复制特别有害。
矢量容量：插入大小与数量。
将外源基因插入NNSV会增加其基因组长度和基因数量，并且通常会对病毒在体内和体外的复制产生减弱作用，在体内的效果通常更大。正如已经指出的那样，这可能是由于对转录水平的影响。RNA复制和包装也可能受到影响，尽管尚未对此进行详细研究。
为了研究基因组长度增加对NNSV载体在体外和体内复制的影响，将一系列长度从258 nt到3894 nt的外源序列分别插入HPIV3中HN基因的下游非编码区，从而在不增加基因数量的情况下增加基因组的长度(107). 高达1404 nt的插入物对病毒在体内或体外的复制没有影响，而3126或3894 nt插入物在体外耐受性良好，但在体内复制减少了约10倍。在本研究的第二阶段，将外源序列作为附加基因插入HN和L之间，从而增加基因组长度和基因数量（通过单个基因）。在这种情况下，1428、1908或3918 nt的插入转录盒在体外耐受性良好，体内复制分别减少了5倍、2倍或25倍，而168和678 nt的插入没有影响(107). 因此，作为非编码序列或作为附加基因添加的小插入物对体内外复制几乎没有影响。随着两种插入物的大小增加到～1.4 kb或更大，衰减变得明显，并且随着尺寸的增加而增加，这证实了尺寸对衰减的重要性。外源序列是作为非编码序列还是作为附加基因添加的，差异不大，这表明基因数量增加一个本身几乎没有影响。在一项研究中，SARS-CoV的一个、两个或三个抗原从减毒的B/HPIV3主干表达，也观察到与增加的基因数相关的减毒缺失：在这种情况下，将一个或两个小SARS-CoV基因添加到已经携带大SARS-CoV-S蛋白基因的载体中，对体内外复制几乎没有进一步的减弱作用(5).
在另一项研究中，HPIV3中插入了多达三个外源基因，基因组总长度从15.5 kb增加到23 kb（增加了49%）(110). 插入一个约2 kb的单个外源基因对体外或体内复制几乎没有影响，但插入两个这样的基因会使体外复制减少10倍，体内复制减少100倍。插入三个基因（总插入长度高达7.5 kb）对体外复制有适度的进一步减弱作用，但体内复制减少了10000倍以上，导致病毒在仓鼠体内过度减弱，免疫原性较差。因此，PIV载体的实际携带量似乎是一到三个基因，总长度约为4-5kb。高效复制的NNSV，如VSV，可能具有更高的容量，尽管尚未评估其极限。
有毒插入物。
在少数情况下，表达的外源糖蛋白似乎有毒，并强烈减弱NNSV载体的复制。在体外生长过程中，这些外源基因迅速积累突变，导致蛋白质改变、表达水平降低或表达完全消融。插入物和载体的毒性组合示例包括HPIV3从添加的基因表达的HPIV1 HN蛋白，该蛋白可能具有抑制性，因为它被包装在载体颗粒中，并且可能由于其相似性而干扰了HPIV3 HN蛋白(110)，以及麻疹病毒对腮腺炎病毒F蛋白的表达(130)和麻疹病毒F蛋白(81)，可能因其融合性或与载体糖蛋白的干扰而受到抑制。
插入稳定性。
为了便于人类免疫，NNSV载体中的外源基因必须在生产和使用的所有阶段保持稳定。这对添加的基因（而不是抗原嵌合病毒中的交换基因）来说更具挑战性，因为它们不会促进载体的生长；因此，没有选择性的压力来保持诚信。RNA病毒的误配率为10−3到10−5每轮复制中每个核苷酸的替换(115; 参考文献中审查21)在体外传代过程中，基于阳性RNA病毒的载体通常会全部或部分快速删除外来插入物(34). 令人惊讶的是，NNSV中的插入物积累点突变的速度似乎比预期慢，并且很少维持缺失。例如，当携带细菌氯霉素乙酰转移酶基因的重组VSV经过15次传代后，产生的四种斑纯化病毒在外源插入物中没有突变，而另外两种病毒各自有一个单核苷酸替换(100). 在另一个例子中，表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组NDV在鸡胚中传代12次；逆转录-PCR扩增插入物的测序表明一致序列没有改变(41). 尽管外源基因通常是稳定的，但有必要监测所有疫苗制剂，以确保插入物的完整性。
外源糖蛋白进入载体颗粒及其对载体生物学的影响
NNSV在出芽过程中从宿主细胞质膜获得其包膜，并有可能将表面表达的外源糖蛋白结合到载体颗粒中。我们已经讨论了抗原嵌合病毒，它确实依赖于结合到载体颗粒中的外源糖蛋白，并能代替删除的载体糖蛋白发挥功能（例如，图。以及4B和C）。从添加的基因表达的外源糖蛋白也可以并入载体颗粒（图。).
在VSV病例中，根据包括流感病毒神经氨酸酶和HA蛋白、麻疹病毒H和F蛋白以及HRSV F蛋白在内的示例，由添加的基因表达的外源糖蛋白通常会有效地并入病毒粒子(48,54,99). 这些外源糖蛋白的包装水平高达载体G糖蛋白相对摩尔量的30%（或根据细胞内表达的相对水平校正后高达50%）。HIV 1型（HIV-1）包膜蛋白是一个例外，仅以微量形式并入，但通过用VSV G的细胞质尾部替换其细胞质尾部，该量显著增加（尽管仍相对较低）(44). 然而，交换细胞质尾部的权宜之计并没有增加HRSV F或CD4表面糖蛋白的结合，这表明VSV G尾部的存在通常是不必要的。HRSV F和HIV-1包膜蛋白在VSV包膜中具有功能，能够独立于载体的G蛋白启动感染。因此，对于外来表面蛋白的掺入，VSV病毒粒子似乎是杂乱的，在大多数情况下，这似乎与结构或分类学相关性或VSV细胞质尾部的存在无关。
对于PIV，还研究了从添加的外源基因表达的外源糖蛋白的掺入，结果与VSV相比差异更大。用重组SeV（小鼠PIV）表达HRSV G蛋白，或用B/HPIV3表达SARS-CoV尖峰S蛋白，均未导致这些蛋白显著并入病毒颗粒(10,117). 然而，如前所述，HPIV1 HN蛋白被并入HPIV3载体颗粒，确实干扰了载体的复制(110). 这可能是HPIV1和HPIV3比其他病毒相关性更强的结果。然而，由于HPIV1表达的HMPV F蛋白被有效地整合到载体颗粒中，因此紧密的分类/序列关系对于合并并不重要（M.H.Skiadopoulos、P.L.Collins和B.R.Murphy，未发表的观察结果），HPIV3表达的埃博拉病毒GP糖蛋白也被掺入颗粒中(13)（图。).
将外源糖蛋白纳入载体颗粒的一个潜在后果是，它可能改变载体的向性或在宿主内传播的能力。这可能导致高致病性毒剂的毒力增加，但现有证据（尽管不完整）令人放心。重组VSV表达来自添加基因的HIV-1包膜糖蛋白（在载体颗粒中包装并起作用）以及表达埃博拉、马尔堡或拉萨病毒GP的VSV抗原嵌合物已在非人灵长类动物中进行了评估，除了具有免疫原性和保护性外，这些嵌合物似乎还具有减毒性和安全性(35,46,92). 这表明，外源糖蛋白并没有在总体水平上显著增加载体的毒力，尽管这些研究并不是为了研究载体生物学中可能发生的细微变化。也许最好的对照研究涉及HPIV3，其中埃博拉病毒GP从添加的基因中表达，并并入载体颗粒(13). 在这种情况下，HPIV3载体对HPIV3特异性抗血清在体外中和产生了抵抗力，这表明埃博拉GP可以在载体颗粒中作为另一种附着和穿透蛋白发挥作用。这一发现得到了证实，该载体也对埃博拉病毒特异性抗血清中和具有敏感性。该重组体通过与HPIV3亲本同时接种于豚鼠的IN进行评估，豚鼠对HPIV3和埃博拉病毒都具有耐受性，即使微量接种埃博拉毒株也具有高度致死性。接受HPIV3亲本的组与表达埃博拉病毒GP的衍生物的组之间的动物健康状况没有差异，这表明即使在这个非常敏感的系统中，毒力也没有增加(13).
NNSV疫苗的免疫原性
有几个因素影响载体疫苗的免疫原性。首先，任何活病毒疫苗的免疫原性水平和保护效力取决于其复制水平。因此，衰减导致的复制减少可能会导致免疫原性降低。要达到使疫苗安全，同时保持足够的复制水平以达到令人满意的免疫原性的减毒水平，可能是一项挑战，最终取决于临床评估。
影响疫苗效力的第二个因素是所表达的病原体抗原。载体疫苗通常只表达目标病原体的一个或两个蛋白质，通常是表面糖蛋白，而病原体的减毒版本则表达病原体抗原的全部储备。尽管中和抗原的表达可以有效诱导病毒中和抗体，但病原体抗原的储备减少可能导致细胞介导的反应减少，而完全病原体的反应相对减弱。例如，从添加的基因中表达HMPV F融合蛋白的HPIV1载体诱导了高水平的HMPV中性血清抗体，其数量与感染野生型或弱毒株HMPV诱导的抗体数量相似(103,104). 然而，对随后的HMPV挑战的保护效果存在显著差异。使用HPIV1载体疫苗进行一次或两次免疫（间隔一个月）可将挑战性HMPV复制降低1.8 log10或2.8对数10分别是。相比之下，野生型或减毒HMPV的单一免疫将挑战性HMPV复制降低5.0 log10尽管HPIV1载体的复制效率远高于高度衰减的HMPV菌株(4,78,103,104). 上述抗原嵌合病毒说明了内部蛋白对保护性免疫有重大贡献的观点，其中HPIV3的F和HN表面抗原被HPIV1的F和H表面抗原取代（图。). 这种抗原嵌合病毒只诱导了针对HPIV1的中和抗体，但同时诱导了对HPIV1和HPIV3的保护，后者可能是由于内部蛋白诱导的细胞介导免疫(123).
抗原储备减少的影响可能因情况不同而不同。在针对HIV-1的VSV载体需要强烈的细胞介导反应的情况下，HIV-1 Gag蛋白通常与HIV-1包膜糖蛋白一起包含，以为细胞介导的反应提供更多的抗原库。在其他应用中，如SARS-CoV疫苗，血清抗体在控制感染方面非常有效，抗原库不完整不太可能影响疫苗效力(116). 相反，由于婴儿的免疫不成熟，以及母体血清抗体对体液反应的免疫抑制作用，很难对儿童呼吸道病原体HRSV进行保护(20)和粘膜复制部位。因此，对于HRSV，最好尽可能广泛地刺激免疫。
载体化外源糖蛋白的免疫原性也受其是否并入载体颗粒的影响。这反映了颗粒的免疫原性比可溶性蛋白更强，尤其是可以介导抗原呈递细胞结合和感染（在某些情况下）的颗粒，以及感染细胞释放的病毒结合蛋白比坏死和凋亡释放的蛋白更快。例如，用载体F蛋白替换重组NDV表达的禽H7流感病毒HA糖蛋白的细胞质尾部和跨膜结构域，导致该蛋白与病毒粒子的结合增强（图。)，与表达未修饰HA蛋白的构建体相比，增强的免疫反应和对流感病毒的保护效力增加(75). 另一个例子是，当HIV包膜蛋白与重组VSV G的胞质结构域交换后，其并入重组VSV的量增加，其免疫原性增加(44,79).
NNSV载体的免疫原性可以通过免疫刺激分子如γ-干扰素、白细胞介素-2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或细胞色素的共表达而增强c（c）在某些情况下，免疫刺激分子的共表达减弱了NNSV载体，但使其保持免疫原性(7,12,84). 在其他情况下，免疫反应的幅度因共表达分子而增加，例如与表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的抗原嵌合B/HPIV3载体(11)和表达白细胞介素-2的RV载体(64). 促凋亡蛋白细胞色素的表达c（c）通过重组RV，病毒被减弱，但免疫原性增强，这是由于抗原提呈细胞对凋亡细胞的捕捉增加(80).
NNSV载体也为改进强化免疫提供了策略。与减毒活疫苗一样，载体疫苗的再次免疫可能会降低效力，因为初始免疫的免疫反应会限制后续剂量的复制和免疫原性。然而，如果使用不同的载体进行再弹药，可以提高再弹药的效力。例如，与用一种病毒进行两次免疫相比，分别在第一次和第二次免疫中使用表达HIV-1包膜蛋白的基于RV和VSV的载体可显著增强细胞和体液免疫反应(118). 四种血清型HPIV（HPIV1-4）的可用性为儿科人群的序贯免疫提供了潜力。
或者，可以修改载体以携带不同的表面抗原。例如，已经制备了三种版本的重组VSV，每种版本都含有来自不同VSV血清型的G糖蛋白。用这三种载体进行序贯免疫，每种载体都表达HIV-1包膜蛋白或包膜蛋白和Gag蛋白的组合，结果表明可以提高免疫效果(92,93). 如前所述，HPIV3的HN和F表面蛋白也已与HPIV1和-2的HN、F表面蛋白交换(121,122). 然而，使用携带恒定内部蛋白质组的糖蛋白交换载体，提高针对内部蛋白质的细胞介导免疫也可以产生抗再感染性，尽管这种保护可能在几周到几个月内减弱，因此，是序贯免疫必须考虑的另一个因素(123).
NNSV载体疫苗也可用于增强活病毒疫苗诱导的免疫反应。例如，用HRSV减毒株免疫，然后用表达HRSV F蛋白的HPIV1载体增强免疫，比两种剂量的减毒株具有更强的免疫原性（Skiadopoulos等人，未发表）。如果序贯免疫采用不同的给药途径，例如使用肌内注射VSV载体（IM），然后再注射NDV载体，则强化免疫也可能更有效。
特异性疫苗载体
水泡性口炎病毒。
VSV（系列鼠疫病毒科，属水泡病毒)是牛、马和猪的一种自然病原体，可引起以严重水疱形成和/或舌头、口腔组织、脚和乳头溃疡为特征的疾病（参考文献综述56). 小鼠和棉鼠通过IN途径感染VSV会导致病毒在大脑中的显著复制、脑炎和高死亡率(30,85,94). VSV通常不是人类病原体。大多数人类感染（与受感染动物接触）被认为是无症状的，但有时会导致以寒战、肌痛和恶心为特征的疾病(28,39,45); 此外，一名3岁儿童出现与VSV感染相关的脑炎病例(82).
VSV作为疫苗载体具有许多非常有利的特性。它是最简单的NNSV，具有非常高的基因表达水平以及快速高效的体外复制。世界大多数地区的普通人群缺乏对VSV的免疫力，因此可能容易受到免疫接种。携带三种不同血清型G糖蛋白的重组VSV可用于顺序免疫(92,93). 在实验动物中，当通过In、IM、皮内或口服途径给药时，VSV载体非常有效(25,86,93). 病毒颗粒具有规则的结构且稳定，便于纯化、制造和使用。
VSV的主要缺点是，目前，对人类施用VSV的经验很少或根本没有，因此，尚不清楚哪些组织被感染，感染的传播程度如何，达到了什么滴度，以及一些人是否会出现严重并发症。在啮齿动物和人类病例中观察到的中枢神经系统受累值得谨慎。尽管实验动物的结果很有希望，但目前尚不清楚VSV载体在人类中的免疫原性和保护性如何，无论是作为抗原嵌合病毒还是作为表达新增外源基因的载体。重组VSV似乎天生就被减弱，可能是由于偶然突变，正如已经指出的那样，有许多策略可以进一步减弱病毒。很明显，基于VSV的疫苗将在不久的将来进行临床评估，因此，关于其在人类中的复制、发病机制和免疫原性的详细信息将很快公布。
鉴于VSV目前在人类给药方面有点未知，我们认为其最可行的首次使用将是作为控制高致病性病原体爆发的媒介。这是因为在这些情况下，（i）疫苗接种者大多是健康成年人，（ii）疫苗接种人数相对较少，（iii）病原体的高风险将超过媒介残余毒力的一些潜在风险。如前所述，已经构建了基于表达出血热因子埃博拉、马尔堡或拉沙病毒GP糖蛋白的VSV的抗原嵌合体。使用该构建物对食蟹猴进行单次IM免疫耐受性良好，并诱导针对外源GP的抗体和细胞免疫反应，从而保护动物免受随后高剂量每种病毒的攻击(35,46). VSV还被用于表达来自添加基因的SARS-CoV S棘突糖蛋白，对小鼠进行单一IN免疫可基本上完全保护小鼠免受SARS-CoV的IN攻击(49). 随着在人类中获得VSV的经验并确立安全性和免疫原性，疫情控制的另一个用途是在该病毒流行的地区免疫高致病性禽流感病毒。携带人类甲型流感病毒HA糖蛋白的VSV具有高度的免疫原性，并对小鼠的致命攻击具有保护作用(89). 在本申请中，与NNSV相关的重组缺失通过避免与循环流感病毒株交换基因提供了一个主要的安全优势，从而使前瞻性免疫可行。
VSV还被评估为一种疫苗载体，可抵抗一些流行的人类病毒，包括乳头瘤病毒(86,90)、丙型肝炎病毒(14)和HIV(25,36,92,93). 特别是，对三种VSV糖蛋白交换载体进行了改造，以从添加的基因中表达猴免疫缺陷病毒（SIV）Gag蛋白和HIV-1包膜蛋白（携带VSV G蛋白的细胞质尾部，以提高其并入载体颗粒的效率）。通过IM和口服联合途径对恒河猴进行三次连续免疫，诱导了强烈的HIV-特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应，并对随后的猴-人免疫缺陷病毒（SHIV）攻击提供了保护(92). 这是一项特别重要的实验，因为有效的艾滋病毒免疫接种对疫苗学提出了最严峻的挑战。
VSV也被开发成抵抗常见儿科病原体（如HRSV）的载体(47)和麻疹病毒(94,99). 对于VSV载体来说，这种用法似乎不太可能，因为最好避免给婴儿大规模接种病毒，否则他们很少会感染这种病毒，而且不需要进行免疫预防。如果VSV在人类中被发现是一种高效且非常良性的载体，并且如果这种基于VSV的疫苗在人类中比减毒活疫苗对这些儿科病原体更有效，这种观点可能会改变。然而，在大规模疫苗接种中使用VSV可能会干扰随后对其他病原体的使用。
人类副流感病毒。
HPIV属于家族副粘病毒科，子家族副粘病毒亚科，属呼吸道病毒（HPIV1和-3）和属卢布病毒（HPIV2和-4）。HPIV几乎感染全世界所有人，并导致婴儿和儿童的呼吸道疾病，从普通感冒到肺炎。反向遗传学正在积极开发HPIV1、-2和-3的减毒活衍生物，用作儿童鼻内疫苗，而HPIV4是一种不太严重的病原体(2,74,106; 参考文献中审查16). 因此，与VSV相比，在自然发生的疾病、野生型病毒的实验性给药以及候选疫苗的临床给药中，HPIV感染人类方面有着广泛的经验。HPIV的基因组比VSV大一些（15kb比11kb），编码两个或更多的额外蛋白质。它们在细胞培养中的复制效率至少低10到100倍，体积更大且多形。HPIV感染呼吸道并导致疾病，不会显著传播到其他组织。这限制了基于HPIV的载体用于IN给药，但也提供了固有的安全特性。IN免疫可诱导较强的系统免疫和局部免疫。
HPIV似乎非常适合作为儿科病原体的载体，尤其是那些将呼吸道作为入口的病原体，如麻疹病毒、HRSV和HMPV。由于需要HPIV疫苗，通过添加基因表达另一种儿科病毒的保护性抗原，可以从单一病毒中产生二价疫苗，从而简化疫苗的开发和管理。例如，用表达麻疹病毒HA糖蛋白的减毒型HPIV3对恒河猴呼吸道进行局部免疫，可有效诱导针对麻疹病毒和HPIV3的系统中和抗体反应(24,108). 这种特殊的使用提供了两个具体的好处。首先，现有的麻疹疫苗是一种经IM注射的减毒活病毒，对母体抗体中和非常敏感。这就需要推迟给药至12至15个月大，结果是一些人在接种疫苗之前变得易感。HPIV3载体疫苗不会被麻疹病毒特异性抗体中和，可以有效地感染和免疫早期婴儿。第二个好处是，使用麻疹病毒载体疫苗消除了对麻疹减毒活疫苗病毒持续存在或部分逆转的担忧，促进了全球根除麻疹病毒的努力。然而，像目前的麻疹减毒活疫苗这样的既有、成功的疫苗并不容易被取代。
另一个例子是，表达HRSV的保护性F或G蛋白或HMPV的F蛋白的减毒嵌合B/HPIV3在啮齿动物和非人类灵长类动物中对载体和载体抗原具有高度免疫原性(96,97,119,120). 在这种情况下，使用HPIV载体疫苗可提供更高水平的抗原表达，并避免HRSV和HMPV的生长不良和不稳定性。如前所述，表达HRSV F的减毒B/HPIV3病毒目前正在临床试验中，作为抗HPIV3和HRSV的活鼻内疫苗。根据婴儿期HPIV1、-2和-3感染的时间，基于HPIV3的载体最适合在出生后六个月内进行免疫接种，而基于HPIV1和-2的载体最适合于6个月至1年的免疫。
HPIV还被评估为可通过呼吸道感染的高致病性病毒的载体。用一种减毒B/HPIV3病毒对非洲绿猴进行IN和IT免疫，该病毒从添加的基因表达呼吸道病原体SARS-CoV的尖峰（S）蛋白，从而诱导对SARS-CoV的系统中和抗体反应，并对SARS-CoV的IN和IT攻击提供保护(10). HPIV3还用于从添加的基因中表达埃博拉病毒的GP糖蛋白，以评估IN对引起严重全身感染的病毒的免疫效果。用这种重组物对豚鼠进行IN免疫，可诱导系统性埃博拉病毒特异性抗体反应，并对经腹腔注射致死剂量的豚鼠适应型埃博拉疫苗提供完全保护(13); 该结构目前正在非人灵长类动物中进行评估。这些候选疫苗可以被开发用于对抗严重急性呼吸系统综合征冠状病毒和埃博拉病毒的儿科疫苗。然而，由于自然感染获得的对HPIV3的免疫流行，它们在成人中的疗效可能会大大降低，这将限制载体的复制并降低免疫原性。现有免疫问题的一个解决方案是使用基于VSV的载体，如上文所述，或非人类副粘病毒，如NDV，如下文所述。
新城疫病毒。
NDV（家族副粘病毒科，子家族副粘病毒亚科，属腮腺炎病毒属)是一种禽类病原体，其自然产生的菌株表现出广泛的疾病严重性。它们被分为三种病理类型：快速菌株，导致高死亡率的系统性感染；中基因菌株，导致中度全身感染；和致透镜菌株，它们引起轻微感染，主要局限于呼吸道，并被用作家禽NDV的减毒活疫苗（参考文献综述38). 毒力的主要决定因素之一是F蛋白前体的裂解激活表型，在高毒力菌株中，F蛋白前体制备被普遍存在的胞内蛋白酶裂解，提供泛向复制的潜力，而在非毒力菌株上，F蛋白前驱体被分泌蛋白酶裂解，限制复制到粘膜表面。NDV通常不会感染人类，但鸟类饲养者也会被感染，偶尔会发生结膜炎(57,71). 对非洲绿猴和恒河猴的呼吸道进行IN和IT接种，接种中源性或长源性新冠病毒株，导致呼吸道低水平、无症状感染，很少或没有病毒脱落(9)证据表明，由于自然宿主范围限制，灵长类动物的两种病理类型都减弱了。
NDV与人类副粘病毒的氨基酸序列同源性很低，并且具有独特的抗原性，这表明人类容易接种基于NDV的载体。对小鼠的研究表明，表达A型流感病毒、HRSV或SIV保护性抗原的NDV具有免疫原性，在前两种情况下，可诱导对攻击的保护(60,69,70). 然而，啮齿动物并不是评估宿主范围受限的媒介对人类病原体的耐受性的良好模型，因为啮齿动物对媒介和病原体的容许性可能由于系统发育距离而不能准确反映人类的容许性。最近，通过对非洲绿猴和恒河猴呼吸道的IN和IT免疫，评估了从添加的基因中表达HPIV3 HN蛋白的NDV重组肠源和中源菌株，这可能提供了更多的人类预测模型(9). 一次给药后，检测到高效的HPIV3特异性血清抗体反应；第二次给药后，其浓度等于或大于HPIV3感染引起的浓度(9). 因此，NDV作为人类使用的潜在媒介值得进一步评估。NDV也正在积极开发作为兽医用疫苗载体，其中载体本身可作为所需的家禽疫苗(41,75,128)，但这超出了本次审查的范围。NDV被归类为1型禽副粘病毒属腮腺炎病毒属; 已确定其他八种血清型，它们在不同种类的鸟类中引起不同严重程度的疾病（参考文献87中综述）。这些也可以作为人类使用的可能载体进行评估。
狂犬病病毒。
RV（系列鼠疫病毒科，属溶血病毒)在许多动物和人类中引起致命的神经疾病。已在实验动物中培育出几种缺乏神经毒力的高度减毒病毒株(19,65,67,136). 对小鼠的研究表明，表达HIV包膜或Gag蛋白或SARS-CoV S蛋白的RV载体具有免疫原性(27,63,66,101,118). 用表达SIV-Gag蛋白和HIV-1包膜蛋白的高度减毒狂犬病疫苗载体对恒河猴进行免疫，然后用类似的疫苗构建物进行增强，其中RV G蛋白被VSV的蛋白取代，从而产生强烈的HIV-特异性CTL和抗体反应，并对SHIV具有保护作用（P.McKenna，M。Koser，K.R.Carlson等人，文章摘要。第13届国际负链病毒大会，弃权。297, 2006). 由于人类感染RV的情况很少见，因此大多数人群都容易接受基于RV的载体的免疫接种。然而，鉴于源病毒的高神经毒力，减毒衍生物是否可以用于人类尚不清楚。
仙台病毒。
SeV（家族副粘病毒科，子家族副粘病毒亚科，属呼吸道病毒)是一种副流感病毒，对小鼠具有毒力，与HPIV1具有中等水平的序列和抗原相关性。由于这种抗原相关性，SeV被开发成一种针对HPIV1的儿童疫苗，前提是由于宿主范围限制，SeV将在人类中减弱(42,109,112). 此外，SeV已被评估为从添加的基因表达HRSV G糖蛋白的载体。用这种重组诱导的HRSV-中和抗体接种棉鼠，并对随后的HRSV攻击提供高水平的保护(117). 这将提供一种针对HPIV1和HRSV的双价疫苗。然而，SeV在非洲绿猴和黑猩猩中的复制效率几乎与野生型HPIV1相同，这让人怀疑它是否会以未经修饰的形式被减毒以用于血清阴性的人类(109).
几项研究评估了表达SIV Gag基因的重组SeV的免疫原性和对SIV攻击的保护作用。一组以表达SIV-Gag的质粒DNA为引物的猕猴被SeV-Gag构建物增强，并通过静脉途径被SIV攻击；8只接种疫苗的动物中有5只控制了病毒载量，并且在接种疫苗5周后出现了未检测到的血浆病毒血症(61). 使用表达SIV-Gag的重组SeV免疫慢性感染SIV的猕猴，可诱导有效的Gag特异性CTL反应(51). 然而，SeV作为成人人群的疫苗载体可能会因其与HPIV1的抗原相关性而受到影响。事实上，健康成年志愿者的SeV IN免疫仅导致九分之三的人的病毒特异性抗体增加，这表明由于之前接触过HPIV1，复制受到限制(112). 因此，需要进一步研究以评估基于SeV的疫苗在HPIV1血清阴性和血清阳性人群中的衰减水平和免疫原性。
总结和未来方向
基于NNSV的载体可用于开发几种特殊情况的疫苗。一个用途是对儿童人群进行大规模免疫接种，以对抗主要呼吸道病毒病原体。特别有希望的例子是从添加的基因中表达其他儿童呼吸道病毒保护性抗原（如HRSV和HMPV）的减毒型HPIV1、-2和-3。这将单个病毒转化为双价或多价疫苗。目前，表达HRSV F蛋白的重组B/HPIV3正在临床试验中进行评估。该策略的有效性将取决于PIV载体疫苗对婴幼儿的免疫原性和保护性是否与HRSV的完全减毒版本相同。第二个用途是免疫接种和疫情控制，以应对新出现的呼吸道和全身病毒感染，如SARS、H5N1禽流感、，埃博拉病毒、马尔堡病毒、马丘波病毒、拉萨病毒、Sin Nombre病毒、尼帕病毒和亨德拉病毒。这些疫苗将基于非人类NNSV，如NDV和VSV，它们与常见人类病原体在抗原上无关，因此基本上整个人群都容易受到免疫接种。该策略的有效性将取决于这些载体疫苗在人体中的安全性和免疫原性水平。第三种用途是使用基于非人类NNSV的载体，如VSV，对抗流行的病毒感染，如HIV或丙型肝炎。这些疫苗将用于预防免疫，也可能用于增强感染者的免疫反应。基于NNSV的载体也正在开发中，以对抗兽医病原体，如分别使用BPIV3和NDV的减毒疫苗株作为载体来对抗牛和家禽的其他疾病。
参考文献
1Arimilli，S.、M.A.Alexander-Miller和G.D.Parks。在人类树突细胞中，猴病毒5（SV5）P/V突变体比野生型SV5的细胞病变小，并且是树突细胞成熟和功能的更有效的激活剂。J.维罗尔。 80:3416-3427.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 2Bartlett，E.J.、E.Amaro-Carambot、S.R.Surman、J.T.Newman、P.L.Collins、B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2005年。通过反向遗传学设计的人类副流感病毒I型（HPIV1）候选疫苗在非洲绿猴中被减弱并有效。疫苗 23:4631-4646. [公共医学][谷歌学者] 三。A.伯明翰和P.L.柯林斯。人类呼吸道合胞病毒M2-2蛋白是一种调节因子，参与RNA复制和转录之间的平衡。程序。国家。阿卡德。科学。美国 96:11259-11264.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 4Buchholz，U.J.、S.Biacchesi、Q.N.Pham、K.C.Tran、L.Yang、C.L.Luongo、M.H.Skiadopoulos、B.R.Murphy和P.L.Collins。人偏肺病毒M2基因开放阅读框1和2的缺失：对RNA合成、衰减和免疫原性的影响。J.维罗尔。 79:6588-6597.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 5Buchholz，U.J.、A.Bukreyev、L.Yang、E.W.Lamirande、B.R.Murphy、K.Subbarao和P.L.Collins。严重急性呼吸综合征冠状病毒结构蛋白对保护性免疫的贡献。程序。国家。阿卡德。科学。美国 101:9804-9809.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 6Buchholz，U.J.、S.Finke和K.K.Conzelmann。1999.从cDNA中生成牛呼吸道合胞病毒（BRSV）：BRSV NS2对组织培养中的病毒复制不是必需的，人类RSV先导区充当BRSV基因组的功能启动子。J.维罗尔。 73:251-259之间。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 7Bukreyev，A.、I.M.Belyakov、J.A.Berzofsky、B.R.Murphy和P.L.Collins。2001.重组呼吸道合胞病毒表达的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子可减弱病毒复制并增加肺抗原呈递细胞水平。J.维罗尔。 75:12128-12140.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 8Bukreyev，A.、E.Camargo和P.L.Collins。1996.表达额外外源基因的传染性呼吸道合胞病毒的恢复。J.维罗尔。 70:6634-6641.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 9Bukreyev，A.、Z.Huang、L.Yang、S.Elankumaran、M.St.Claire、B.R.Murphy、S.K.Samal和P.L.Collins。表达外来病毒抗原的重组新城疫病毒在灵长类动物中被减弱并具有高度免疫原性。J.维罗尔。 79:13275-13284.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Bukreyev，A.、E.W.Lamirande、U.J.Buchholz、L.N.Vogel、W.R.Elkins、M.St.Claire、B.R.Murphy、K.Subbarao和P.L.Collins。2004年非洲绿猴粘膜免疫(欧硫磷Cercopithecus aethiops)表达SARS冠状病毒尖峰蛋白的减毒副流感病毒用于预防SARS。柳叶刀 363:2122-2127.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 11Bukreyev，A.、M.H.Skiadopoulos、J.McAuliffe、B.R.Murphy、P.L.Collins和A.C.Schmidt。2002.抗原少抗体多：减毒活病毒疫苗的免疫原性可以提高吗？程序。国家。阿卡德。科学。美国 99:16987-16991.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 12Bukreyev，A.、S.S.Whitehead、N.Bukreyerva、B.R.Murphy和P.L.Collins。1999.重组呼吸道合胞病毒表达的γ干扰素可在不影响免疫原性的情况下减弱小鼠体内的病毒复制。程序。国家。阿卡德。科学。美国 96:2367-2372.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 13Bukreyev，A.、L.Yang、S.R.Zaki、W.J.Shieh、P.E.Rollin、B.R.Murphy、P.L.Collins和A.Sanchez。2006.一次鼻腔接种副粘病毒载体疫苗可以保护豚鼠免受致命剂量的埃博拉病毒攻击。J.维罗尔。 80:2267-2279页。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 14Buonocore，L.、K.J.Blight、C.M.Rice和J.K.Rose。表达并结合高水平丙型肝炎病毒糖蛋白的水泡性口炎病毒重组体的特征。J.维罗尔。 76:6865-6872.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 15Calain、P.和L.Roux。1993年，六法则是仙台病毒缺陷干扰RNA高效复制的基本特征。J.维罗尔。 67:4822-4830.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 16Chanock，R.M.、B.R.Murphy和P.L.Collins。2001.副流感病毒，第1341-1379页。在D.M.Knipe、P.M.Howley、D.E.Griffin、R.A.Lamb、M.A.Martin、B.Roizman和S.E.Straus（编辑），菲尔德病毒学，第4版。，第一卷利平科特-雷文出版社，宾夕法尼亚州费城。[谷歌学者] 17Collins，P.L.、M.G.Hill、E.Camargo、H.Grosfeld、R.M.Chanock和B.R.Murphy。1995年。从克隆的cDNA生产传染性人呼吸道合胞病毒证实了来自M2 mRNA 5′近端开放阅读框的转录延伸因子在基因表达中的重要作用，并为疫苗开发提供了能力。程序。国家。阿卡德。科学。美国 92:11563-11567中。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 18康泽尔曼，K.K。α/β干扰素基因的转录激活：非片段负链RNA病毒的干扰。J.维罗尔。 79:5241-5248.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 19Coulon，P.、J.P.Ternaux、A.Flamand和C.Tuffereau。1998年。狂犬病病毒的一种无毒突变体不能在体内和体外感染运动神经元。J.维罗尔。 72:273-278.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 20Crowe，J.E.，Jr.，C.Y.Firestone和B.R.Murphy。2001.被动获得的抗体抑制用减毒呼吸道合胞病毒活疫苗免疫的小鼠的体液免疫，但不抑制细胞免疫。免疫学杂志。 167:3910-3918. [公共医学][谷歌学者] 21E.多明戈和J.J.霍兰德。1997年RNA病毒突变与生存适宜性。每年。微生物评论。 51:151-178. [公共医学][谷歌学者] 22Durbin，A.P.、S.L.Hall、J.W.Siew、S.S.Whitehead、P.L.Collins和B.R.Murphy。1997年。从cDNA中恢复感染性人副流感病毒3型。病毒学 235:323-332. [公共医学][谷歌学者] 23Durbin，A.P.、J.M.McAuliffe、P.L.Collins和B.R.Murphy。1999.人类副流感病毒3型的C、D和V开放阅读框中的突变减弱了啮齿动物和灵长类动物的复制。病毒学 261:319-330. [公共医学][谷歌学者] 24Durbin，A.P.、M.H.Skiadopoulos、J.M.McAuliffe、J.M Riggs、S.R.Surman、P.L.Collins和B.R.Murphy。表达麻疹病毒血凝素蛋白的人副流感病毒3型（PIV3）为婴儿早期接种麻疹病毒和PIV3提供了一种潜在的方法。J.维罗尔。 74:6821-6831中描述。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 25Egan，M.A.，S.Y.Chong，N.F.Rose，S.Megati，K.J.Lopez，E.B.Schadeck，J.E.Johnson，A.Masood，P.Piacente，R.E.Druilhet，P.W.Barras，D.L.Hasselschwert，P.Reilly，E.M.Mishkin，D.C.Montefiori，M.G.Lewis，D.K.Clarke，R.M.Hendry，P.A.Marx，J.H.Eldridge，S.A.Udem，Z.R.Israel和J.K.Rose。2004.表达HIV 1型Env和SIV Gag蛋白的减毒水疱性口炎病毒载体的免疫原性：鼻内和肌肉内接种途径的比较。艾滋病研究逆转录病毒。 20:989-1004. [公共医学][谷歌学者] 26Enterlein，S.、V.Volchkov、M.Weik、L.Kolesnikova、V.Volchkova，H.D.Klenk和E.Muhlberger。从cDNA中拯救重组马尔堡病毒依赖于核衣壳蛋白VP30。J.维罗尔。 80:1038-1043.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 27Faber，M.、E.W.Lamirande、A.Roberts、A.B.Rice、H.Koprowski、B.Dietzschold和M.J.Schnell。2005年。用表达严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）S蛋白的杆状病毒载体进行单一免疫，可产生高水平的SARS-CoV-中和抗体。《病毒遗传学杂志》。 86:1435-1440.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 28Fellows、O.N.、G.T.Dimopoullos和J.J.Callis。从受感染的实验室工作人员中分离出水泡性口炎病毒。美国兽医协会。物件。 16:623-626. [公共医学][谷歌学者] 29弗拉纳根、E.B.、J.M.赞帕罗、L.A.鲍尔、L.L.罗德里格斯和G.W.维尔茨。水疱性口炎病毒基因的重新排列消除了自然宿主的临床疾病：疫苗开发的新战略。J.维罗尔。 75:第6107-6114页。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 30Forger、J.M.、III、R.T.Bronson、A.S.Huang和C.S.Reiss。1991.水疱性口炎病毒引起的小鼠感染：H-2的初步特征天系统。J.维罗尔。 65:4950-4958.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 31Garbutt，M.、R.Liebscher、V.Wahl-Jensen、S.Jones、P.Moller、R.Wagner、V.Volchkov、H.D.Klenk、H.Feldmann和U.Stroher。2004.表达丝状病毒和竞技场病毒糖蛋白的具有复制能力的水疱性口腔炎病毒载体的特性。J.维罗尔。 78:5458-5465.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 32A.加西亚-萨斯特。负链RNA病毒中I型干扰素病毒拮抗剂的鉴定和特征。货币。顶部。微生物。免疫学。 283:249-280. [公共医学][谷歌学者] 33Garcin，D.、T.Pelet、P.Calain、L.Roux、J.Curran和D.Kolakofsky。1995年：从cDNA中回收感染性仙台副粘病毒的高度重组系统：产生一种新的复制支持非缺陷性干扰病毒。EMBO J。 14:6087-6094.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 34Gehrke，R.、F.X.Heinz、N.L.Davis和C.W.Mandl。通过来自蜱传脑炎病毒的感染性载体和复制子载体进行异源基因表达，并将该黄病毒系统与α病毒复制子进行直接比较。《病毒遗传学杂志》。 86:1045-1053. [公共医学][谷歌学者] 35Geisbert，T.W.，S.Jones，E.A.Fritz，A.C.Shurtleff，J.B.Geissbert，R.Liebscher，A.Grolla，U.Stroher，L.Fernando，K.M.Daddario，M.C.Guttieri，B.R.Mothe，T.Larsen，L.E.Hensley，P.B.Jahrling和H.Feldmann。2005年，开发预防拉沙热的新疫苗。公共科学图书馆-医学。 2:e183。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 36Haglund，K.、I.Leiner、K.Kerksiek、L.Buonocore、E.Pamer和J.K.Rose。2002.高级初级CD8+接种重组水疱性口炎病毒产生的T细胞对人类免疫缺陷病毒1型Gag和Env的反应。J.维罗尔。 76:2730-2738页。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 37Haller，A.A.、T.Miller、M.Mitiku和K.Coelingh。牛副流感病毒3型（一种新型减毒病毒疫苗载体）表达人副流感3型表面糖蛋白。J.维罗尔。 74:11626-11635.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 38汉森，R.P。1978年，《纽卡斯尔病》，第7版，爱荷华州艾姆斯爱荷华州立大学出版社。
39Hanson，R.P.、A.F.Rasmussen，Jr.、C.A.Brandly和J.W.Brown。人类水疱性口炎病毒感染。临床实验室杂志。医学。 36:754-758. [公共医学][谷歌学者] 40Homann，H.E.、P.H.Hofschneider和W.J.Neubert。仙台病毒在溶血性和持续感染细胞中的基因表达。病毒学 177:131-140. [公共医学][谷歌学者] 41Huang，Z.、S.Elankumaran、A.S.Yunus和S.K.Samal。2004年，一种表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组新城疫病毒（NDV）可抵抗NDV和IBDV。J.维罗尔。 78:10054-10063.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 42Hurwitz、J.L.、K.F.Soike、M.Y.Sangster、A.Portner、R.E.Sealy、D.H.Dawson和C.Coleclough。1997年。鼻内注射仙台病毒疫苗可保护非洲绿猴免受人类副流感病毒1型的感染。疫苗 15:533-540. [公共医学][谷歌学者] 43艾弗森、L.E.和J.K.罗斯。水疱性口炎病毒转录过程中的局部衰减和不连续合成。单元格 23:477-484. [公共医学][谷歌学者] 44Johnson，J.E.、M.J.Schnell、L.Buonocore和J.K.Rose。1997.针对CD4的特异性靶向+编码人类免疫缺陷病毒包膜蛋白的重组水疱性口炎病毒细胞。J.维罗尔。 71:5060-5068.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 45Johnson，K.M.、J.E.Vogel和P.H.Peralta。印第安纳型水疱性口炎病毒（VSV）实验室感染的临床和血清学反应。美国J.特罗普。医学Hyg。 15:244-246. [公共医学][谷歌学者] 46Jones，S.M.、H.Feldmann、U.Stroher、J.B.Geisbert、L.Fernando、A.Grolla、H.D.Klenk、N.J.Sullivan、V.E.Volchkov、E.A.Fritz、K.M.Daddario、L.E.Hensley、P.B.Jahrling和T.W.Geisbert。2005.减毒重组活疫苗保护非人灵长类动物免受埃博拉病毒和马尔堡病毒感染。国家医学院。 11:786-790. [公共医学][谷歌学者] 47Kahn、J.S.、A.Roberts、C.Weibel、L.Buonocore和J.K.Rose。2001.表达呼吸道合胞病毒（RSV）抗原的复制竞争性或减毒的非传播性水疱性口炎病毒可保护小鼠免受RSV攻击。J.维罗尔。 75:11079-11087.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 48Kahn、J.S.、M.J.Schnell、L.Buonocore和J.K.Rose。表达呼吸道合胞病毒（RSV）糖蛋白的重组水疱性口炎病毒：RSV融合蛋白可以介导感染和细胞融合。病毒学 254:81-91. [公共医学][谷歌学者] 49Kapadia，S.U.、J.K.Rose、E.Lamirande、L.Vogel、K.Subbarao和A.Roberts。2005年。以减毒VSV为基础的疫苗单次免疫提供的对SARS冠状病毒感染的长期保护。病毒学 340:174-182.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 50Kato，A.、Y.Sakai、T.Shioda、T.Kondo、M.Nakanishi和Y.Nagai。1996年，利用转染的cDNA或RNA启动仙台病毒增殖。基因细胞 1:569-579. [公共医学][谷歌学者] 51加藤、M.、H.Igarashi、A.Takeda、Y.Sasaki、H.Nakamura、M.Kano、T.Sata、A.Iida、M.长谷川、S.Horie、E.Higashihara、Y.Nagai和T.Matano。2005.用Gag表达的仙台病毒载体对长期感染猿人免疫缺陷病毒的猕猴进行治疗性免疫，诱导Gag特异性T细胞反应。疫苗 23:3166-3173. [公共医学][谷歌学者] 52Kolakofsky，D.、T.Pelet、D.Garcin、S.Hausmann、J.Curran和L.Roux。副粘病毒RNA合成和六聚体基因组长度要求：重温六聚体规则。J.维罗尔。 72:891-899.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 53Krempl，C.、B.R.Murphy和P.L.Collins。带有G和F基因的重组呼吸道合胞病毒转移到启动子近端位置。J.维罗尔。 76:11931-11942.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 54Kretzschmar、E.、L.Buonocore、M.J.Schnell和J.K.Rose。1997年。将功能性流感病毒糖蛋白高效纳入重组水疱性口炎病毒。J.维罗尔。 71:5982年至989年。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 55N.D.劳森、E.A.斯蒂尔曼、M.A.惠特和J.K.罗斯。1995年。来自DNA的重组水疱性口炎病毒。程序。国家。阿卡德。科学。美国 92:4477-4481.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 56Letchworth、G.J.、L.L.Rodriguez和J.Del Cbarera。1999年。水泡性口腔炎。兽医。J。 157:239-260. [公共医学][谷歌学者] 57O.李普曼。鸡新城疫病毒引起的人类结膜炎。美国眼科杂志。 35:1021-1028. [公共医学][谷歌学者] 58Liu，H.、S.Andreansky、G.Diaz、S.J.Turner、D.Wodarz和P.C.Doherty。2003.长期病毒特异性CD8的定量分析+-用无关病原体攻击小鼠的T细胞记忆。J.维罗尔。 77:7756-7763.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 59麦克唐纳、G.H.和R.E.约翰斯顿。树突状细胞靶向在委内瑞拉马脑炎病毒发病机制中的作用。J.维罗尔。 74:914-922.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 60Martinez-Sobrido，L.、N.Gitiban、A.Fernandez-Sesma、J.Cros、S.E.Mertz、N.A.Jewell、S.Hammond、E.Flano、R.K.Durbin、A.Garcia-Sastre和J.E.Durbin。2006.重组新城疫病毒载体对呼吸道合胞病毒的保护。J.维罗尔。 80:1130-1139.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 61Matano，T.、M.Kobayashi、H.Igarashi、A.Takeda、H.Nakamura、M.Kano、C.Sugimoto、K.Mori、A.Iida、T.Hirata、M.Hasegawa、T.Yuasa、M.Miyazawa、Y.Takahashi、M.Yasunai、A.Kimura、D.H.O'Connor、D.I.Watkins和Y.Nagai。2004.一项临床前艾滋病疫苗试验中基于细胞毒性T淋巴细胞的猿猴免疫缺陷病毒复制控制。实验医学学报 199:1709-1718年。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 62McAuliffe、J.M.、S.R.Surman、J.T.Newman、J.M.Riggs、P.L.Collins、B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2004年。人类1型副流感病毒L聚合酶蛋白中两个位置的密码子替换突变产生了体内衰减谱和体外表型稳定性增强的病毒。J.维罗尔。 78:2029-2036.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 63McGettigan、J.P.、H.D.Foley、I.M.Belyakov、J.A.Berzofsky、R.J.Pomerantz和M.J.Schnell。表达人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）包膜蛋白的狂犬病病毒载体对不同HIV-1分离株的包膜蛋白诱导强烈的交叉反应性细胞毒性T淋巴细胞反应。J.维罗尔。 75:4430-4434.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 64McGettigan、J.P.、M.L.Koser、P.M.McKenna、M.E.Smith、J.M.Marvin、L.C.Eisenlohr、B.Dietzschold和M.J.Schnell。2006.联合表达HIV-1蛋白和IL-2的重组杆状病毒疫苗载体产生的增强的体液HIV-1特异性免疫应答。病毒学 344:363-377. [公共医学][谷歌学者] 65McGettigan、J.P.、R.J.Pomerantz、C.A.Siler、P.M.McKenna、H.D.Foley、B.Dietzschold和M.J.Schnell。2003.表达人类免疫缺陷病毒1型Gag的第二代狂犬病病毒疫苗载体大大降低了致病性，但具有高度免疫原性。J.维罗尔。 77:237-244.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 66McGettigan、J.P.、S.Sarma、J.M.Orenstein、R.J.Pomerantz和M.J.Schnell。2001.以复制活性杆状病毒为基础的疫苗载体表达的人类免疫缺陷病毒1型Gag的表达和免疫原性。J.维罗尔。 75:8724-8732.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 67Mebatsion，T。2001.通过同时修改P蛋白中的动力蛋白轻链结合位点和替换G蛋白中的Arg333，广泛减弱狂犬病病毒。J.维罗尔。 75:11496-11502.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 68Mebatsion，T.、M.J.Schnell、J.H.Cox、S.Finke和K.K.Conzelmann。狂犬病病毒载体中外源基因的高度稳定表达。程序。国家。阿卡德。科学。美国 93:7310-7314。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 69Nakaya，T.、J.Cros、M.S.Park、Y.Nakayan、H.Zheng、A.Sagrera、E.Villar、A.Garcia-Sastre和P.Palese。2001.重组新城疫病毒作为疫苗载体。J.维罗尔。 75:11868-11873.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 70Nakaya，Y.、T.Nakayan、M.S.Park、J.Cros、J.Imanishi、P.Palese和A.Garcia-Sastre。两种重组负链RNA病毒载体诱导猴免疫缺陷病毒Gag的细胞免疫应答。J.维罗尔。 78:9366-9375.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 71Nelson，C.B.、B.S.Pomeroy、K.Schrall、W.E.Park和R.J.Lindeman。1952年，家禽饲养工人因新城疫病毒（NDV）引起的结膜炎暴发。美国公共卫生杂志 42:672-678.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 72Newman，J.T.、J.M.Riggs、S.R.Surman、J.M McAuliffe、T.A.Mulaikal、P.L.Collins、B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2004年。通过输入对温度敏感的异源副粘病毒的减毒突变产生重组人副流感病毒1型候选疫苗。J.维罗尔。 78:2017-2028.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 73Newman，J.T.，S.R.Surman，J.M.Riggs，C.T.Hansen，P.L.Collins，B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2002.人类副流感病毒1型（HPIV1）Washington/1964毒株的序列分析以及通过反向遗传学产生的野生型重组HPIV1的回收和表征。病毒基因 24:77-92. [公共医学][谷歌学者] 74Nolan，S.M.、S.R.Surman、E.Amaro-Carambot、P.L.Collins、B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2005.通过反向遗传学开发的鼻内副流感病毒2型减毒候选活疫苗，含有从异源副粘病毒进口的L聚合酶蛋白突变。疫苗 23:4765-4774. [公共医学][谷歌学者] 75Park，M.S.、J.Steel、A.Garcia-Sastre、D.Swayne和P.Palese。2006.具有双重特异性的工程病毒疫苗构建物：禽流感和纽卡斯尔病。程序。国家。阿卡德。科学。美国 103:8203-8208.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 76Peeters、B.P.、O.S.de Leeuw、G.Koch和A.L.Gielkens。从克隆的cDNA中拯救新城疫病毒：融合蛋白的可裂解性是毒力的主要决定因素的证据。J.维罗尔。 73:5001-5009.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 77Pennathur，S.、A.A.Haller、M.MacPhail、T.Rizzi、S.Kaderi、F.Fernandes、L.Bicha、J.H.Schickli、R.S.Tang、W.Chen、N.Nguyen、S.Mathie、H.Mehta和K.L.Coelingh。2003.在恒河猴体内评价牛副流感病毒3型（PIV-3）疫苗和重组牛/人PIV-3嵌合疫苗载体的衰减、免疫原性和效力。《病毒遗传学杂志》。 84:3253-3261. [公共医学][谷歌学者] 78Pham，Q.N.，S.Biacchesi，M.H.Skiadopoulos，B.R.Murphy，P.L.Collins和U.J.Buchholz。将核蛋白或磷酸蛋白开放阅读框替换为禽偏肺病毒的嵌合重组人偏肺病毒在体外表现出更好的生长和在体内的衰减。J.维罗尔。 79:15114-15122.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 79Publicover，J.、E.Ramsburg和J.K.Rose。2004.诱导有效细胞免疫反应的非致病性活病毒疫苗载体的特征。J.维罗尔。 78:9317-9324中。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 80Pulmanausahakul，R.、M.Faber、K.Morimoto、S.Spitsin、E.Weihe、C.Hooper、M.J.Schnell和B.Dietzschold。2001.细胞色素过度表达c（c）通过重组狂犬病病毒减弱致病性并增强抗病毒免疫。J.维罗尔。 75:10800-10807.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 81Quiñones Kochs、M.I.、M.J.Schnell、L.Buonocore和J.K.Rose。重组水疱性口炎病毒中外源基因表达缺失的机制。病毒学 287:427-435. [公共医学][谷歌学者] 82Quiroz，E.、N.Moreno、P.H.Peralta和R.B.Tesh。1988年，一起与水疱性口炎病毒（印第安纳血清型）感染相关的脑炎人间病例。美国J.特罗普。医学Hyg。 39:312-314. [公共医学][谷歌学者] 83Radecke，F.、P.Spielhofer、H.Schneider、K.Kaelin、M.Huber、C.Dotsch、G.Christiansen和M.A.Billeter。从克隆DNA中拯救麻疹病毒。EMBO J。 14:5773-5784.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 84Ramsburg，E.、J.Publicover、L.Buonocore、A.Poholek、M.Robek、A.Palin和J.K.Rose。2005年。一种表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的水泡性口炎病毒重组物可诱导增强的T细胞反应，并且在动物体内复制时高度衰减。J.维罗尔。 79:15043-15053.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 85赖斯、C.S.、I.V.普拉霍夫和T.小松。1998年。病毒在嗅觉受体神经元中复制并进入嗅球和大脑。纽约学院安。科学。 855:751-761. [公共医学][谷歌学者] 86路透社、J.D.、B.E.维瓦斯·冈萨雷斯、D.戈麦斯、J.H.威尔逊、J.L.布兰德斯玛、H.L.格林斯通、J.K.罗斯和A.罗伯茨。2002年。用表达棉尾兔乳头瘤病毒L1蛋白的重组水疱性口炎病毒进行鼻内接种，可对乳头瘤病毒诱导的疾病提供完全保护。J.维罗尔。 76:8900-8909之间。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 87B.里奇、G.哈里森和L.哈里森。1993年。鸟类医学：原理和应用。Wingers出版社，佛罗里达州沃思湖。
88Roberts，A.、L.Buonocore、R.Price、J.Forman和J.K.Rose。1999.作为疫苗载体的减毒水疱性口炎病毒。J.维罗尔。 73:3723-3732.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 89Roberts，A.、E.Kretzschmar、A.S.Perkins、J.Forman、R.Price、L.Buonocore、Y.Kawaoka和J.K.Rose。1998年。用表达流感病毒血凝素的重组水疱性口炎病毒进行疫苗接种，可完全防止流感病毒的攻击。J.维罗尔。 72:4704-4711.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 90Roberts，A.、J.D.Reuter、J.H.Wilson、S.Baldwin和J.K.Rose。使用表达高水平L1蛋白的水疱性口炎病毒载体进行单一疫苗接种后，可完全防止乳头瘤病毒的攻击。J.维罗尔。 78:3196-3199.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 91Rose，J.K.和M.A.Whitt。2001鼠疫病毒科《病毒及其复制》，第1221-1244页。在D.M.Knipe、P.M.Howley、D.E.Griffin、R.A.Lamb、M.A.Martin、B.Roizman和S.E.Straus（编辑），菲尔德病毒学，第4版。，第一卷利平科特-雷文出版社，宾夕法尼亚州费城。[谷歌学者] 92Rose，N.F.、P.A.Marx、A.Luckay、D.F.Nixon、W.J.Moretto、S.M.Donahoe、D.Montefiori、A.Roberts、L.Buonocore和J.K.Rose。2001年，一种基于减毒活水泡性口腔炎病毒重组体的有效艾滋病疫苗。单元格 106:539-549. [公共医学][谷歌学者] 93Rose，N.F.、A.Roberts、L.Buonocore和J.K.Rose。2000.基于水疱性口炎病毒的糖蛋白交换载体能够有效增强和产生针对人类免疫缺陷病毒1型主要分离物的中和抗体。J.维罗尔。 74:10903-10910.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 94Schlereth，B.，L.Buonocore，A.Tietz，V.ter Meulen，J.K.Rose和S.Niewiesk。2003年。在存在麻疹病毒特异性抗体的情况下，棉鼠粘膜免疫的成功取决于疫苗载体和病毒剂量的衰减程度。《病毒遗传学杂志》。 84:2145-2151. [公共医学][谷歌学者] 95Schmidt，A.C.、J.M.McAuliffe、A.Huang、S.R.Surman、J.E.Bailly、W.R.Elkins、P.L.Collins、B.R.Murphy和M.H.Skiadopoulos。2000.牛副流感病毒3型（BPIV3）融合和血凝素-神经氨酸酶糖蛋白对BPIV3在灵长类动物中的有限复制做出了重要贡献。J.维罗尔。 74:8922-8929.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 96Schmidt，A.C.、J.M.McAuliffe、B.R.Murphy和P.L.Collins。2001.表达呼吸道合胞病毒（RSV）G和F蛋白的重组牛/人副流感病毒3型（B/HPIV3）可用于实现对RSV和HPIV3的同时黏膜免疫。J.维罗尔。 2001:4594-4603.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 97Schmidt，A.C.、D.R.Wenzke、J.M.McAuliffe、M.St.Claire、W.R.Elkins、B.R.Murphy和P.L.Collins。2002.使用基于宿主范围减弱的牛副流感病毒3型载体主干的活cDNA衍生疫苗，对恒河猴进行呼吸道合胞病毒A亚群和B亚群以及人副流感3型病毒的粘膜免疫。J.维罗尔。 76:1089-1099.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 98Schnell，M.J.、L.Buonocore、E.Boritz、H.P.Ghosh、R.Chernish和J.K.Rose。驱动水疱性口炎病毒有效出芽的非特异性糖蛋白胞质结构域序列的要求。EMBO J。 17:1289-1296.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 99Schnell，M.J.、L.Buonocore、E.Kretzschmar、E.Johnson和J.K.Rose。重组水疱性口炎病毒表达的外源糖蛋白可有效地并入病毒颗粒中。程序。国家。阿卡德。科学。美国 93:11359-11365.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 100Schnell，M.J.、L.Buonocore、M.A.Whitt和J.K.Rose。1996年。最小的保守转录停止启动信号促进水疱性口炎病毒中外源基因的稳定表达。J.维罗尔。 70:2318-2323.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 101Schnell，M.J.、H.D.Foley、C.A.Siler、J.P.McGettigan、B.Dietzschold和R.J.Pomerantz。重组狂犬病病毒作为潜在的HIV-1活病毒疫苗。程序。国家。阿卡德。科学。美国 97:3544-3549.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 102Schnell，M.J.、T.Mebatsion和K.K.Conzelmann。1994.克隆cDNA中的传染性狂犬病病毒。EMBO J。 13:4195-4203.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 103Skiadopoulos，M.H.、S.Biacchesi、U.J.Buchholz、E.Amaro-Carambot、S.R.Surman、P.L.Collins和B.R.Murphy。2006.人偏肺病毒F、G和SH表面糖蛋白对诱导中和抗体和保护性免疫的个体贡献。病毒学 345:492-501. [公共医学][谷歌学者] 104Skiadopoulos，M.H.、S.Biacchesi、U.J.Buchholz、J.M.Riggs、S.R.Surman、E.Amaro-Carambot、J.M McAuliffe、W.R.Elkins、M.St.Claire、P.L.Collins和B.R.Murphy。2004年。两种主要的人类偏肺病毒遗传谱系在抗原上高度相关，而融合（F）蛋白是这种抗原相关性的主要贡献者。J.维罗尔。 78:6927-6937.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 105Skiadopoulos，M.H.、A.C.Schmidt、J.M.Riggs、S.R.Surman、W.R.Elkins、M.St.Claire、P.L.Collins和B.R.Murphy。2003.牛副流感病毒3型在恒河猴中复制的宿主范围限制的决定因素是多基因的。J.维罗尔。 77:1141-1148.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 106Skiadopoulos、M.H.、S.Surman、J.M.Tatem、M.Paschalis、S.L.Wu、S.A.Udem、A.P.Durbin、P.L.Collins和B.R.Murphy。1999.识别导致活性减弱冷传递的温度敏感性、冷适应和衰减表型的突变45(内容提供商45）人副流感病毒3候选疫苗。J.维罗尔。 73:1374-1381.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 107Skiadopoulos，M.H.、S.R.Surman、A.P.Durbin、P.L.Collins和B.R.Murphy。2000.人类副流感病毒3型HN和L蛋白编码区之间的长核苷酸插入产生具有温度敏感性和衰减表型的病毒。病毒学 272:225-234. [公共医学][谷歌学者] 108Skiadopoulos，M.H.、S.R.Surman、J.M.Riggs、P.L.Collins和B.R.Murphy。表达麻疹病毒血凝素的嵌合人-牛副流感病毒3型在恒河猴中被减弱复制，但仍具有免疫原性。J.维罗尔。 75:10498-10504.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 109Skiadopoulos，M.H.、S.R.Surman、J.M.Riggs、W.R.Elkins、M.St.Claire、M.Nishio、D.Garcin、D.Kolakofsky、P.L.Collins和B.R.Murphy。2002.仙台病毒是一种1型鼠副流感病毒，在非洲绿猴和黑猩猩的上下呼吸道中复制到与人类PIV1相似的水平。病毒学 297:153-160. [公共医学][谷歌学者] 110Skiadopoulos，M.H.、S.R.Surman、J.M.Riggs、C.Orvell、P.L.Collins和B.R.Murphy。2002.表达多达三种外源糖蛋白的重组人副流感病毒3型载体的复制和免疫原性的评估。病毒学 297:136-152. [公共医学][谷歌学者] 111Skiadopoulos，M.H.、T.Tao、S.R.Surman、P.L.Collins和B.R.Murphy。1999.通过用PIV1对应物替换活性减弱的PIV3 cp45疫苗病毒的HN和F糖蛋白，生成副流感病毒1型候选疫苗。疫苗 18:503-510. [公共医学][谷歌学者] 112Slobod、K.S.、J.L.Shenep、J.Lujan-Zilbermann、K.Allison、B.Brown、R.A.Scroggs、A.Portner、C.Coleclough和J.L.Hurwitz。2004年。健康成人鼻内鼠副流感病毒1型（仙台病毒）的安全性和免疫原性。疫苗 22:3182-3186. [公共医学][谷歌学者] 113Smith，G.L.，M.Mackett和B.Moss。表达乙型肝炎病毒表面抗原的感染性痘苗病毒重组体。自然 302:490-495. [公共医学][谷歌学者] 114Span，K.M.、P.L.Collins和M.N.Teng。2003年，人类呼吸道合胞病毒两个突变株联合感染期间的基因重组。J.维罗尔。 77:11201-11211.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 115Steinhauer，D.A.、E.Domingo和J.J.Holland。1992年，缺乏与RNA病毒聚合酶相关的校对机制的证据。基因 122:281-288页。[公共医学][谷歌学者] 116Subbarao，K.、J.McAuliffe、L.Vogel、G.Fahle、S.Fischer、K.Tatti、M.Packard、W.-J.Shieh、S.Zaki和B.Murphy。2004年。先前感染和被动转移中和抗体可防止严重急性呼吸综合征冠状病毒在小鼠呼吸道中的复制。J.维罗尔。 78:3572-3577.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 117Takimoto，T.、J.L.Hurwitz、C.Coleclough、C.Prouser、S.Krishnamurthy、X.Zhan、K.Boyd、R.A.Scroggs、B.Brown、Y.Nagai、A.Portner和K.S.Slobod。2004。表达呼吸道合胞病毒G糖蛋白的重组仙台病毒引起对呼吸道合胞病毒的免疫保护。J.维罗尔。 78:6043-6047.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 118Tan、G.S.、P.M.McKenna、M.L.Koser、R.McLinden、J.H.Kim、J.P.McGettigan和M.J.Schnell。2005年。异种弹状病毒原虫-宿主方法诱导的强大细胞和体液抗-HIV Env免疫反应。病毒学 331:82-93. [公共医学][谷歌学者] 119Tang，R.S.、K.Mahmood、M.Macphail、J.M.Guzzetta、A.A.Haller、H.Liu、J.Kaur、H.A.Lawlor、E.A.Stillman、J.H.Schickli、R.A.Fouchier、A.D.Osterhaus和R.R.Spaete。2005.一种表达人偏肺病毒（hMPV）融合蛋白的宿主范围限制性副流感病毒3型（PIV3）在非洲绿猴中引发保护性免疫。疫苗 23:1657-1667.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 120Tang，R.S.，J.H.Schickli，M.MacPhail，F.Fernandes，L.Bicha，J.Spaete，R.A.Fouchier，A.D.Osterhaus，R.Spaete和A.A.Haller。2003.人偏肺病毒和呼吸道合胞病毒抗原插入牛/人3型副流感病毒两个3′近端基因组位置对病毒复制和免疫原性的影响。J.维罗尔。 77:10819-10828.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 121Tao，T.、A.P.Durbin、S.S.Whitehead、F.Davoodi、P.L.Collins和B.R.Murphy。1998年。恢复完全存活的嵌合人副流感病毒（PIV）3型，其中血凝素-神经氨酸酶和融合糖蛋白已被PIV 1型所取代。J.维罗尔。 72:2955-2961.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 122Tao，T.、M.H.Skiadopoulos、F.Davoodi、J.M.Riggs、P.L.Collins和B.R.Murphy。2000.将重组副流感病毒3型（PIV3）的血凝素-神经氨酸酶和融合糖蛋白的外结构域替换为PIV2的对应物，可产生减毒PIV2疫苗候选。J.维罗尔。 74:6448-6458.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 123Tao，T.、M.H.Skiadopoulos、A.P.Durbin、F.Davoudi、P.L.Collins和B.R.Murphy。1999.一种编码PIV 3型内部蛋白和PIV 1型表面糖蛋白的减毒嵌合重组副流感病毒（PIV）可诱导对PIV1攻击的完全抵抗和对PIV3攻击的部分抵抗。疫苗 17:1100-1108. [公共医学][谷歌学者] 124Techaarpornkul，S.、P.L.Collins和M.E.Peeples。融合蛋白为其唯一病毒糖蛋白的呼吸道合胞病毒对细胞糖胺聚糖的粘附依赖性低于全病毒。病毒学 294:296-304. [公共医学][谷歌学者] 125Teng，M.N.和P.L.Collins。1999.改变了不产生NS2蛋白的重组呼吸道合胞病毒的生长特性。J.维罗尔。 73:466-473.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 126Teng，M.N.、S.S.Whitehead、A.Bermingham、M.St Claire、W.R.Elkins、B.R.Murphy和P.L.Collins。不表达NS1或M2-2蛋白的重组呼吸道合胞病毒在黑猩猩中高度减毒且具有免疫原性。J.维罗尔。 74:9317-9321.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 127德久弥、T.、A.Iida、T.Hirata、A.Kato、Y.Nagai和M.Hasegawa。2002.表达不同水平外国报告基因的重组仙台病毒。病毒研究。 86:33-38. [公共医学][谷歌学者] 128Veits，J.、D.Wiesner、W.Fuchs、B.Hoffmann、H.Granzow、E.Starick、E.Mundt、H.Schirmeier、T.Mebatsion、T.C.Mettenleiter和A.Romer-Oberdorfer。2006年。表达H5血凝素基因的新城疫病毒保护鸡免受新城疫和禽流感的侵袭。程序。国家。阿卡德。科学。美国 103:8197-8202.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 129沃尔奇科夫、V.E.、V.A.沃尔奇科娃、E.Muhlberger、L.V.Kolesnikova、M.Weik、O.Dolnik和H.D.Klenk。2001.从互补DNA中恢复传染性埃博拉病毒：GP基因的RNA编辑和病毒细胞毒性。科学类 291:1965-1969. [公共医学][谷歌学者] 130Wang，Z.、L.Hangartner、T.I.Cornu、L.R.Martin、A.Zuniga、M.A.Billeter和H.Y.Naim。表达腮腺炎和猴免疫缺陷病毒异源抗原的重组麻疹病毒。疫苗 19:2329-2336. [公共医学][谷歌学者] 131Wertz、G.W.、R.Moudy和L.A.Ball。将基因添加到水疱性口炎病毒的RNA基因组：对表达稳定性的位置效应。J.维罗尔。 76:7642-7650.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 132Wertz、G.W.、V.P.Perepelitsa和L.A.Ball。基因重排减弱非片段负链RNA病毒的表达和致死性。程序。国家。阿卡德。科学。美国 95:3501-3506.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 133Whelan，S.P.、L.A.Ball、J.N.Barr和G.T.Wertz。从cDNA克隆中完全高效回收传染性水疱性口炎病毒。程序。国家。阿卡德。科学。美国 92:8388-8392.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 134Witko，S.E.，C.S.Kotash，R.M.Nowak，J.E.Johnson，L.A.C.Boutiler，K.J.Melville，S.G.Heron，D.K.Clarke，A.S.Abramovitz，R.M Hendry，M.S.Sidhu，S.A.Udem和C.L.Parks。2006.一种有效的无辅助病毒方法，用于从适合疫苗开发的细胞系中拯救重组副粘病毒和杆状病毒。J.维罗尔。方法 135:91-101. [公共医学][谷歌学者] 135Wyatt，L.S.、B.Moss和S.Rozenblatt。1995年。用于哺乳动物细胞中瞬时基因表达的复制缺陷型痘苗病毒编码噬菌体T7 RNA聚合酶。病毒学 210:202-205年。[公共医学][谷歌学者] 136Yan，X.、P.S.Mohankumar、B.Dietzschold、M.J.Schnell和Z.F.Fu。狂犬病病毒糖蛋白决定了不同狂犬病毒株在大脑中的分布。神经病毒学杂志。 8:345-352. [公共医学][谷歌学者] 137Zhao，H.和B.P.Peeters。作为病毒载体的重组新城疫病毒：外源基因的基因组位置对基因表达和病毒复制的影响。《病毒遗传学杂志》。 84:781-788. [公共医学][谷歌学者] 
