A recombinant Newcastle disease virus (NDV) expressing VP2 protein of infectious bursal disease virus (IBDV) protects against NDV and IBDV

doi:10.1128/JVI.78.18.10054-10063.2004

.2004年9月；78(18):10054-63.

doi:10.128/JVI.78.18.10054-10063.2004。

表达传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2蛋白的重组新城疫病毒（NDV）对NDV和IBDV具有保护作用

黄竹辉¹, 苏比亚·埃兰库马兰, 阿卜杜勒·S·尤努斯, 锡巴K萨马尔

附属公司

PMID： 15331738
预防性维修识别码： PMC514986型
内政部： 10.1128/JVI.78.18.10054-10063.2004

表达传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2蛋白的重组新城疫病毒（NDV）对NDV和IBDV具有保护作用

黄竹辉等人。 J维罗尔. 2004年9月.

.2004年9月；78(18):10054-63.

doi:10.1128/JVI.78.18.10054-10063.2004。

作者

黄竹辉¹, 苏比亚·埃兰库马兰, 阿卜杜勒·尤努斯, 锡巴K萨马尔

附属

¹马里兰大学弗吉尼亚-马里兰地区兽医学院，8075 Greenmead Dr.，College Park，MD 20742。ssamal@umd.edu

PMID： 15331738
预防性维修识别码： PMC514986型
内政部： 10.1128/JVI.78.18.10054-10063.2004

摘要

传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起鸡的高度免疫抑制性疾病。目前可用的IBDV活疫苗可导致产生变异病毒。我们已经开发出一种不会产生变异性IBDV的替代疫苗。通过使用反向遗传学方法，我们从常用疫苗株LaSota设计了一种重组新城疫病毒（NDV）载体，以表达IBDV变异株GLS-5的宿主保护免疫原VP2。将编码IBDV VP2蛋白的基因插入全长NDV cDNA的最近3’-近端位点进行高水平表达。我们成功地回收了重组病毒rLaSota/VP2。rLaSota/VP2基因稳定，在鸡胚中至少连续传代12次，并显示表达VP2蛋白。VP2蛋白没有被整合到重组病毒的病毒粒子中。重组rLaSota/VP2在鸡胚和细胞培养中复制到与NDV亲本株LaSota滴度相似的滴度。为了评估rLaSota/VP2的保护效果，在接种后3周，用重组病毒接种2日龄的特异性无痘鸡，并用强毒力NDV毒株Texas GB或IBDV变异株GLS-5进行攻击。rLaSota/VP2疫苗产生了针对新冠病毒和IBDV的抗体反应，并对新冠病毒和IBDV提供了90%的保护。强化免疫可诱导较高水平的NDV和IBDV抗体反应，并对这两种病毒提供完全保护。这些结果表明，重组NDV可作为其他禽类病原体的疫苗载体。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
表达IBDV VP2蛋白的重组NDV的构建。（A）用一对FseI标记的引物通过RT-PCR扩增IBDV的VP2基因，用FseI消化，并导入NP基因非编码区的FseI位点。在VP2基因后立即放置一个终止密码子（TGA），然后再添加四个核苷酸（GGCA）以保持六的规则。VP2基因两侧有NDV基因末端（GE）、基因间序列和基因启动（GS）信号。（B）用AscI和SacII切除含有VP2基因的片段，并用于替换pLaSota中的相应片段。产生的pLaSota/VP2编码16596 nt的抗原RNA，是6的倍数。

**图2。**
IBDV VP2蛋白表达的免疫荧光分析。融合的DF1细胞在第12代（C）以0.1的MOI感染rLaSota（A）、细胞培养适应的GLS-5（B）或rLaSota/VP2。将感染细胞固定、渗透，并用兔抗IBDV抗血清进行检测，然后用FITC-结合的山羊抗兔IgG抗体进行孵育。在Eclipse TE（尼康）荧光显微镜下观察细胞。放大倍数，×400。数据显示在感染后24小时。

**图3。**
细胞培养中rLaSota和rLaSota/VP2的多级生长曲线。25厘米DF1细胞单层²烧瓶以0.01的MOI感染病毒，并在37°C的DMEM中培养，DMEM补充5%胎牛血清和1μg乙酰-胰蛋白酶/ml。每隔8小时采集上清液进行病毒滴定。数值来自两个独立的实验，每个实验一式三份。条形图显示标准偏差。

**图4。**
激发3天后法氏囊的组织病理学。鸡接种PBS（A和B）、商用IBDV疫苗（C）或rLaSota/VP2（D），并用IBDV强毒株GLS-5（B、C、D）进行攻击。面板A显示了一个无挑战的控件。激发72小时后，取出法氏囊并固定在中性缓冲福尔马林中。组织用石蜡包埋，切片，用苏木精和伊红染色以进行显微镜检查。放大倍数，×40。（A）正常鸡的卵泡囊：大型活动卵泡，滤泡间组织很少。（B）未接种疫苗的攻击鸡的囊：严重的多灶髓质空泡化和淋巴细胞耗竭（箭头），以及严重的滤泡变性（箭头）。（C）接种商用IBDV疫苗的鸡的法氏囊受到挑战：一些轻微的多灶髓质空泡化和淋巴细胞耗竭（箭头所示）。（D）接种rLaSota/VP2并激发的鸡囊：未观察到组织学损伤。

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[2] Alexander，D.J.1989年。纽卡斯尔病，第114-120页。H.G.Purchase、L.H.Arp、C.H.Domermuth和J.E.Pearson（编辑），《鸟类病原体分离和鉴定实验室手册》，第三版，美国鸟类病理学家协会，宾夕法尼亚州肯尼特广场。

[3] Alexander，D.J.，1997年。新城疫和其他禽副粘病毒科感染，第541-569页。B.W.Calnek（编辑），《家禽疾病》，第10版，爱荷华州立大学出版社，艾姆斯。

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[10] Boyle，D.B.和H.G.Heine。1993年。家禽用重组鸡痘病毒疫苗。免疫学。细胞生物学。71:391-397.-项目管理咨询公司-公共医学

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