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.1998年4月10日;273(15):8749-55。
doi:10.1074/jbc.273.15.8749。

用32P标记因子体内磷酸肽分析探讨热休克因子HSF1的转录激活

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用32P标记因子体内磷酸肽分析探讨热休克因子HSF1的转录激活

西夏等。 生物化学杂志. .
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摘要

对来自非应激或中度热应激HeLa细胞的热休克因子1(HSF1)的胰蛋白酶磷酸肽进行定位,并在体内用[32P]正磷酸盐标记,揭示了四种主要的磷酸肽A到D。热应激显著增加了磷酸肽信号。为了鉴定靶肽和氨基酸,并关联磷酸化和反式激活功能,对LexA-人HSF1嵌合体及其突变衍生物制作了磷酸肽图谱,并比较了原始嵌合体和突变嵌合体的反式激活活性。LexA-HSF1嵌合体之前被证明与HSF1受到相同的调控,只是它们与LexA-结合位点而非hsp启动子进行私人启动子交易。LexA-HSF1和内源性HSF1的磷酸肽模式相似。单残基取代分析表明,磷酸肽C是在Ser-307上磷酸化的肽VKEEPPSPPQSPR(297-309),而不是Ser-303。Ser-307而非Ser-303的替代导致因子活性的放松管制。一些与非磷酸化肽C相关的组成活性嵌合体与转录活性HSF1构象的映射,表明该肽的去磷酸化(Ser-307)可能是激活过程中的一个完整步骤,也可能用于维持HSF1的活性构象。利用这种相关性,间接证据表明HSF1的激活域与位于远处的调控域相互作用,以保持因子处于非活性状态。

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