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.2012:18:1773-86.
Epub 2012年6月30日。

晶状体自噬基因的空间表达模式及晶状体细胞自噬的诱导

丽莎·安·布伦南 1, 万达·李·坎托罗, 丹尼尔·乔斯, 丽贝卡·麦格雷尔, 何树英, 林季·马图奇, 建宁卫, S Amer Riazuddin公司, Ales Cvekl公司, J Fielding Hejtmancik公司, 马克·坎托罗
附属公司

晶状体自噬基因的空间表达模式及晶状体细胞自噬的诱导

丽莎·安·布伦南等。 摩尔-维斯. 2012.

摘要

目的：自噬基因FYVE（以四种富含半胱氨酸的蛋白质命名：Fab 1（PIKfyve的酵母同源蛋白）、YOTB、Vac 1（囊泡运输蛋白）和EEA1）和含有1（fyco1）的螺旋线圈的突变导致人类白内障，表明自噬在晶状体功能中起作用。在这里，我们分析了晶状体自噬基因的范围和空间表达模式，并评估了在暴露于压力下的晶状体细胞中是否可以诱导自噬。

方法：通过微阵列数据分析、实时PCR和western blot分析，在mRNA和蛋白质水平上评估显微切割的人类晶状体上皮和纤维之间自噬基因的表达水平及其空间分布模式。用免疫组织化学方法检测新生小鼠晶状体中选定的自噬蛋白空间表达模式。通过计数在有或无血清培养的细胞中微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）阳性斑点的数量，测定培养的人晶状体上皮细胞的自噬体含量。

结果：共检测到42个自噬基因在人类晶状体上皮和纤维中表达。自噬体标记物LC3B和FYCO1在新生小鼠晶状体中被检测到。一直以来，在显微解剖的人类晶状体纤维中检测到LC3B（LC3B II）的自噬活性形式。血清饥饿后培养的晶状体细胞中检测到LC3B阳性点状细胞数量增加，表明在应激条件下晶状体细胞中诱导自噬。

结论：数据证明自噬是晶状体上皮细胞和纤维细胞功能的重要组成部分。这些数据与以下观点一致：通过特定自噬蛋白的突变或失活破坏晶状体自噬可能导致晶状体对压力的抵抗力丧失和/或晶状体分化丧失，从而导致白内障的形成。

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数字

图1
图1
自噬基因在晶状体上皮和纤维中的表达。一个：微阵列基因表达数据的直方图表示。数据标准化为GAPDH公司（甘油醛-3-磷酸脱氢酶），PGK公司（磷酸甘油酸激酶），以及TRP公司（三磷酸异构酶）。B类：通过半定量RT-PCR在分离的人类晶状体上皮和纤维细胞中表达自噬基因。C类：显微切割的人类晶状体上皮和纤维细胞中指示蛋白质的自噬蛋白水平。
图2
图2
LC3B和FYCO1在整个小鼠晶状体中的空间定位。用LC3B特异性抗体和FYCO1特异性抗体对出生后第1天小鼠晶状体中的LC3B和FYCO 1进行免疫染色。仅二级抗体显示为对照。显示晶状体上皮（LE）、晶状体皮质纤维（CF）和核纤维（NF）。棕色染色显示抗体交叉反应阳性，蓝色苏木精染色为核染色。
图3
图3
血清饥饿的人晶状体上皮细胞中的LC3B水平。一个：通过免疫荧光共焦成像（绿色）检测暴露于血清饥饿和氯喹（50µM）的晶状体上皮HLEB3细胞中的LC3B水平。DAPI染色显示细胞核（蓝色）。B类：显示了每个处理的LC3B点的平均数（n=50个单元格；误差条表示标准偏差）。通过Tukey分析，数据在p<0.001时具有统计学意义。
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