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2005年7月22日;280(29):27329-38.
doi:10.1074/jbc。M414132200美元。 Epub 2005年5月27日。

一种新的二酰甘油内酯在蛋白激酶C(PKC)亚型α和δ的C1结构域中显示出显著的体外选择性,与PKCalpha相比,RasGRP具有选择性

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一种新的二酰甘油内酯在蛋白激酶C(PKC)亚型α和δ的C1结构域中显示出显著的体外选择性,与PKCalpha相比,RasGRP具有选择性

永美铺等。 生物化学杂志
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摘要

虽然多种天然产物是蛋白激酶C(PKC)、RasGRP的二酰甘油结合C1结构域和相关靶点的有效配体,但C1结构域的高度保守性阻碍了选择性配体的发展。我们在这里表征了一种二酰基甘油内酯130C037,它来自一种组合化学合成策略,具有很高的选择性。130C037给出了PKC亚型α、β、γ、δ和ε的浅结合曲线,PKCalpha的表观Ki值从340 nm到PKCepsilon的29 nm不等。当与PKCalpha和-delta的分离C1结构域结合时,130C037仅对deltaC1b表现出良好的亲和力(Ki=1.78 nm),而佛波醇12,13-二丁酸酯表现出10倍的亲和力。在LNCaP细胞中,130C037同样选择性地诱导δC1b的膜移位。130C037结合完整的RasGRP1和RasGRP3,Ki值分别为3.5和3.8nm,反映了相对于PKCepsilon和PKCalpha的8倍和90倍的选择性。通过中国仓鼠卵巢细胞的Western blot,130C037选择性地诱导RasGRP3胞浆丢失(ED50=286 nm),PKCepsilon部分减少(ED50>10 micro),而对PKCalpha无影响。通过共聚焦显微镜在LNCaP细胞中测定,130C037引起RasGRP3的快速易位,PKCε的有限缓慢易位,并且没有PKCα的易位。最后,130C037诱导HEK-293细胞外表达RasGRP3而非对照细胞的Erk磷酸化,而佛波酯诱导两者的磷酸化。130C037的性质为开发C1结构域治疗靶点中具有选择性的配体提供了强有力的原理证明。

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