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.2021年4月；21(4):398.
doi:10.3892/etm.2021.9829。 Epub 2021年2月24日。

长非编码RNA SNHG7通过调节miR-146b-5p/Robo1轴促进胰腺癌进展

于健 1, 齐凡 2
附属公司

长非编码RNA SNHG7通过调节miR-146b-5p/Robo1轴促进胰腺癌进展

于健等。 实验治疗学. 2021年4月.

摘要

长非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因7（SNHG7）在胰腺癌（PC）的进展中起着至关重要的作用。SNHG7在PC中上调；因此，本研究旨在探讨SNHG7在PC进展中的作用及其潜在机制。在本研究中，通过逆转录定量PCR检测SNHG7、microRNA（miR）-146b-5p和环状同源物1（Robo1）的mRNA表达水平。此外，分别用MTT和流式细胞仪检测细胞活力和凋亡。通过Transwell分析评估细胞迁移和侵袭的能力。此外，还进行了双核糖核酸酶报告、RNA免疫沉淀和RNA下拉分析，以评估miR-146b-5p与SNHG7或Robo1之间的相互作用。western blotting检测Robo1的蛋白表达。此外，建立了小鼠异种移植物模型，以进一步研究SNHG7对PC进展的影响体内结果表明，SNHG7在PC组织和细胞中高度表达。还发现SNHG7被miR-146b-5p所吸附，Robo1是miR-146b-5p的靶点。此外，SNHG7敲除抑制PC细胞的增殖、迁移和侵袭，以及肿瘤发生和凋亡在体外和体内通过调节miR-146b-5p。结果还表明，miR-146b-5p过度表达通过调节Robo1抑制PC细胞的生长。此外，SNHG7沉默通过海绵miR-146b-5p下调Robo1表达。总之，本研究结果表明SNHG7通过海绵miR-146b-5p和上调Robo1促进PC进展。

关键词：肿瘤进展；长非编码RNA小核仁RNA宿主基因7；microRNA-146b-5p；胰腺癌；环状同源物1。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
SNHG7在前列腺癌组织中显著上调，并与前列腺癌患者的肿瘤大小、远处转移、淋巴结转移和TNM分期等病理特征相关。采用逆转录定量PCR方法检测SNHG7-在（A）前列腺癌组织或（B）不同肿瘤分期中的表达。（C） 总生存率与SNHG7表达之间的关系。*与各正常组相比，P<0.05。SNHG7，小核仁RNA宿主基因7。
图2
图2
SNHG7敲除可抑制细胞增殖、迁移和侵袭，但可诱导SW1990和AsPC-1细胞凋亡。（A） 通过逆转录定量PCR检测SNHG7在人胰腺癌细胞系PANC-1、BxPC-3、SW1990和AsPC-1以及人胰腺正常导管上皮细胞系HPDE中的表达。在用（B）sh对照和sh-SNHG7或（C）pcDNA-NC和pcDNA-SNHG7转染的SW1990和AsPC-1细胞中检测到SNHG7的表达。SW1990和AsPC-1细胞转染sh-control、sh-SNHG7或在正常条件下培养。用MTT法评估（D）SW1990和（E）AsPC-1细胞的细胞活力。通过流式细胞术评估（F）SW1990和（G）AsPC-1细胞的凋亡率。（H） 用Transwell法检测转染细胞的迁移和（I）侵袭能力。比例尺，100µm。*与各自的正常组相比，P<0.05。sh，短发夹RNA；SC，（标准条件）；SNHG7，小核仁RNA宿主基因7；外径，光密度。
图3
图3
miR-146b-5p是SNHG7的直接靶点。（A） miR-146b-5p和SNHG7之间的互补序列以及SNHG7的MUT序列。通过双荧光素酶报告子评估转染miR-146b-5p或miR-control的（B）SW1990和（C）AsPC-1细胞中SNHG7 WT或SNHG7-MUT报告子的荧光素酶活性。（D） 通过RIP分析评估抗Ago2或抗IgG标记的SW1990细胞中SNHG7在转染miR-146b-5p或miR-control的细胞中的富集情况。（E） 通过RNA下拉试验分析转染Bio-miR-146b-5p或Bio-NC的SW1990细胞中SNHG7的富集情况。（F） 通过RIP分析评估抗Ago2或抗IgG标记的AsPC-1细胞中SNHG7在转染miR-146b-5p或miR-control的细胞中的富集情况。（G） 通过RNA下拉试验分析转染Bio-miR-146b-5p或Bio-NC的AsPC-1细胞中SNHG7的富集情况。在（H）SW1990和（I）转染miR-control或miR-146b-5p的AsPC-1细胞中检测miR-146b-5p探针的转染效率。在SW1990和转染（J）miR-control和miR-146b-5p或（K）抑制剂control及miR-146b-5p抑制剂的AsPC-1细胞中检测miR-146b5p的表达。（五十） 通过逆转录定量PCR检测转染sh-control、sh-SNHG7、pcDNA-control或pcDNA-SNHG7的细胞中miR-146b-5p的表达。（M） 采用Pearson检验分析SNHG7与miR-146b-5p的相关性。*与各自的正常组相比，P<0.05。WT，野生型；MUT，突变体；SNHG7，小核仁RNA宿主基因7；miR，microRNA；sh，短发夹RNA；NC，阴性对照；Ago2，argonaute-2。
图4
图4
miR-146b-5p抑制剂减轻了对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用，并减少了由SNHG7沉默引起的SW1990和AsPC-1细胞凋亡的影响。SW1990和AsPC-1细胞转染sh-control、sh-SNHG7、sh-SNHG7+抑制剂对照或sh-SNHG7+miR-146b-5p抑制剂。通过逆转录定量PCR检测miR-146b-5p在（A）SW1990和（B）AsPC-1细胞中的表达。通过MTT法评估（C）SW1990和（D）AsPC-1细胞的细胞活力。通过流式细胞术评估（E）SW1990和（F）AsPC-1细胞的凋亡率。（G） 通过Transwell测定法检测迁移能力和（H）侵袭能力。*与各正常组相比，P<0.05。SNHG7，小核仁RNA宿主基因7；miR，microRNA；sh，短发夹RNA；外径，光密度。
图5
图5
Robo1与miR-146b-5p发生负面反应。（A） miR-146b-5p和Robo1 3'UTR之间的互补结合位点，以及Robo1 3'UTR的MUT序列。通过双荧光素酶报告子分析评估转染miR-146b-5p模拟物或miR-control的（B）SW1990和（C）AsPC-1细胞中Robo1 3'UTR WT或Robo1 3'UTR MUT报告子的荧光素素酶活性。（D） 在SW1990和转染载体和Robo1的AsPC-1细胞中检测Robo1 mRNA和（E）蛋白的表达水平。（F） 用逆转录定量PCR和western blotting分别检测转染miR-control、miR-146b-5p、抑制剂control或miR-146b-5p抑制剂的（G）SW1990和（H）AsPC-1细胞中Robo1的mRNA和蛋白表达水平。（一） Robo1和miR-146b-5p之间的相关性通过Pearson检验进行评估。*与各自的正常组相比P＜0.05。3'UTR，3'非翻译区；MUT，突变体；WT，野生型；miR，microRNA；机器人1，环岛同源物1；SNHG7，小核仁RNA宿主基因7。
图6
图6
Robo1过表达减轻了对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用，并降低了miR-146b-5p模拟物诱导的SW1990和AsPC-1细胞凋亡的影响。用miR-control、miR-146b-5p、miR-46b-5p+载体或miR-146b-5p+Robo1转染SW1990和AsPC-1细胞。采用逆转录定量PCR方法检测Robo1在（A）SW1990和（B）AsPC-1细胞中的表达。western blotting检测Robo1在（C）SW1990和（D）AsPC-1细胞中的蛋白表达。采用MTT法评估（E）SW1990和（F）AsPC-1细胞的细胞活力。用流式细胞术检测（G）SW1990和（H）AsPC-1细胞的凋亡率。（一） 通过Transwell分析检测转染SW1990和AsPC-1细胞的迁移和（J）侵袭能力。*与各正常组相比，P<0.05。miR，microRNA；机器人1，环岛同源物1；小核仁RNA宿主基因7；外径，光密度。
图7
图7
SNHG7沉默通过靶向miR-146b-5p下调Robo1的表达。（A） Robo1和SNHG7之间的相关性通过Pearson检验确定。用sh-control、sh-SNHG7、sh-SNHG7+抑制剂或sh-SNHG7+miR-146b-5p抑制剂转染SW1990和AsPC-1细胞。（B） 采用逆转录定量PCR检测Robo1的mRNA表达。western blotting检测Robo1在（C）SW1990和（D）AsPC-1细胞中的蛋白表达。*与各正常组相比，P<0.05。miR，microRNA；机器人1，环岛同源物1；SNHG7，小核仁RNA宿主基因7；sh，短发夹RNA。
图8
图8
SNHG7沉默阻断异种移植瘤生长体内给小鼠注射转染sh-SNHG7或sh-对照的SW1990细胞。（A） 呈现了PC异种移植物组织的代表性图像。（B） 治疗小鼠的肿瘤体积。（C） 治疗小鼠的异种移植瘤重量。通过逆转录定量PCR检测异种移植瘤中（D）SNHG7、（E）miR-146b-5p和（F）Robo1的mRNA表达水平。（G） western blotting检测Robo1在异种移植瘤中的蛋白表达。*与各正常组相比，P<0.05。miR，microRNA；机器人1，环岛同源物1；SNHG7，小核仁RNA宿主基因7；sh，短发夹RNA。
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