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.2017年6月2日；292(22):9420-9430.
doi:10.1074/jbc。M117.783787。 Epub 2017年4月13日。

转录共激活物TAZ的ETS（E26转化特异性）上调促进前列腺癌细胞迁移和转移

刘晨英 1 2, 童羽 三, 黄玉鸡（Yuji Huang） 三, 龙翠 4, Wanjin Hong公司 5
附属公司

转录共激活物TAZ的ETS（E26转化特异性）上调促进前列腺癌细胞迁移和转移

刘晨英等。 生物化学杂志. .

摘要

前列腺癌是一种非常常见的恶性疾病，也是西方世界男性死亡的主要原因。前列腺癌的肿瘤发生和发展涉及多种信号通路，包括Hippo通路。Yes-associated protein（YAP）是Hippo通路的下游转录共激活物，在前列腺癌中过度表达，在前列腺肿瘤的发生和发展中起着至关重要的作用。然而，YAP paralog和Hippo通路的另一个下游效应器，PDZ结合基序转录共激活物（TAZ）在前列腺癌中的作用尚未完全阐明。这里，我们表明TAZ是前列腺上皮的基底细胞标记物。我们发现TAZ的过度表达促进了RWPE1前列腺上皮细胞的上皮-间充质转化（EMT）、细胞迁移和锚定非依赖性生长。值得注意的是，敲除DU145前列腺癌细胞中的TAZ可抑制细胞迁移和转移。我们还发现，SH3结构域结合蛋白1（SH3BP1）是一种驱动细胞运动的RhoGAP蛋白，是前列腺癌细胞中TAZ的直接靶基因，介导TAZ促进细胞迁移的功能。此外，前列腺癌相关致癌E26转化特异性（ETS）转录因子ETV1、ETV4和ETV5是PC3前列腺癌细胞TAZ基因转录所必需的。MAPK抑制剂U0126处理降低了RWPE1细胞中TAZ的表达，ETV4过表达通过U0126治疗挽救了RWPE1细胞中的TAZ表达。我们的结果显示了TAZ转录的调节机制，并提示TAZ在前列腺癌进展中具有重要作用。

关键词：ETS转录因子家族；Hippo通路；SH3BP1；TAZ；细胞迁移；前列腺癌；肿瘤转移。

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数字

图1。
图1。
TAZ是前列腺上皮细胞的基础细胞标志物。 A类TAZ在正常前列腺上皮、增生和前列腺癌组织中的免疫组化分析。代表性图片(一)正常前列腺上皮中的TAZ(b条)增生组织中的TAZ(c（c）)前列腺癌组织中TAZ无表达(d日)TAZ在一些前列腺癌组织中有强表达。比例尺：50微米(一,c（c）,d日)，100微米(b条).B类TAZ在前列腺癌组织阵列中表达的免疫组织化学分析，该阵列由73个前列腺癌组织组成，具有Gleason评分。分析TAZ表达与Gleason评分之间的相关性。X（X）2统计分析采用检验法。显示了患者的分布。C类通过Western blotting分析AR中YAP、TAZ和AR的蛋白表达+前列腺癌细胞系（LNCaP，22Rv1）和AR−前列腺癌细胞系（DU145，PC3）。D类AR中YAP、TAZ和CTGF的mRNA表达+前列腺癌细胞系（LNCaP，22Rv1）和AR−用qPCR方法分析前列腺癌细胞系DU145、PC3。E类TAZ的表达水平与基础标记TP63呈正相关，与管腔标记CK8和CK18呈负相关。前列腺癌TCGA数据集中的共表达数据来自cBioPortal数据库。皮尔逊相关系数和斯皮尔曼相关系数值由cBioPortal生成。TAZ在基底细胞中的表达表示为箭头所示。误差线，标准偏差。
图2。
图2。
TAZ在永生化前列腺上皮细胞中的过度表达可促进EMT、细胞迁移和锚定非依赖性生长。 A类、载体控制RWPE1细胞、TAZ的代表性相控图像和罗丹明结合的卵磷脂染色图像S89A型过表达RWPE1细胞和TAZS89A-S51A型RWPE1细胞过度表达。B类，载体对照的Transwell分析，TAZS89A型和TAZS89A-S51A型RWPE1电池。显示了Transwell迁移分析的代表性图像。将相对迁移能力标准化为载体对照组。*，第页<0.05由学生t吨测试。C类、载体对照软琼脂试验、TAZS89A和TAZS89A-S51A型RWPE1电池。显示了软琼脂集落的代表性图像。计算了每个井的克隆数。*，第页<0.05由学生t吨测试。D类、载体控制中EMT标记物（FN1、N-钙粘蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白和E-钙粘蛋白）的Western blotting分析、TAZS89A型和TAZS89A-S51A型显示RWPE1细胞。对蛋白质印迹进行定量分析。误差线，标准偏差。
图3。
图3。
敲除DU145前列腺癌细胞中的TAZ抑制细胞迁移和转移。 A类，生成TAZ击倒DU145细胞。显示了pLKO.1对照DU145细胞和TAZ shRNA敲除DU145的细胞中TAZ的Western blotting分析和qPCR结果。B类pLKO.1创伤愈合试验控制DU145细胞和TAZ shRNA击倒DU145的细胞。显示创面形成后和72小时后的相位对比图像。C类pLKO.1的Transwell分析控制DU145细胞和TAZ shRNA击倒DU145的细胞。显示了Transwell迁移分析的代表性图像。相对迁移能力归一化为pLKO.1载体对照组，第页<0.05由学生t吨测试。D类分析pLKO.1对照DU145细胞和TAZ shRNA敲除DU145的细胞的转移潜能体内显示了肺转移的图像和肺的苏木精-伊红染色切片。肺转移用箭头标记。n个=每组5人。记录各组肺转移的发生率。根据肿瘤面积/苏木精-伊红视野对转移潜能进行统计分析。*，第页<0.05由学生t吨测试。误差线，标准偏差。
图4。
图4。
SH3BP1是TAZ的直接靶基因，可增强前列腺癌细胞中的细胞迁移。 A类TAZ敲低DU145细胞中SH3BP1表达降低。分别用Western blotting和qPCR分析TAZ敲除DU145细胞中SH3BP1的蛋白和mRNA水平。B类，TAZ的过表达促进了SH3BP1在RWPE1细胞中的表达。载体对照TAZ中SH3BP1的蛋白和mRNA水平S89A型和TAZS89A-S51A型RWPE1细胞分别用Western blotting和qPCR进行分析。阳性对照包括已知的TAZ下游靶基因CTGF。C类TAZ增强SH3BP1 WT启动子的荧光素酶活性，但不增强M-CAT基序突变体的荧光素酶活性。与TAZ表达质粒共转染的SH3BP1-WT和M-CAT基序突变体启动子的荧光素酶分析。*，第页<0.05由学生t吨测试。D类，TAZ在SH3BP1启动子区富集。对DU145细胞中的TAZ进行ChIP分析。利用SH3BP1启动子特异性引物，通过qPCR分析SH3BP1启动子中TAZ的富集情况，第页<0.05由学生t吨测试。E类SH3BP1的敲除可削弱TAZ在RWPE1细胞中过度表达诱导的细胞迁移。将NC和SH3BP1 siRNA转染细胞2天。用Transwell法分析这些细胞的迁移能力。显示了Transwell迁移的代表性图像。相对迁移能力归一化为vector/siCON组。*，第页<0.05由学生t吨测试。F类显示了TCGA前列腺癌数据集中SH3BP1与Hippo靶基因（CTGF，AXL）的相关性。皮尔逊相关系数和斯皮尔曼相关系数值由cBioPortal生成。误差线，标准偏差。
图5。
图5。
前列腺癌细胞中TAZ基因的转录受ETV1、ETV4和ETV5 PC相关ETS家族成员的调节。 A类，转录因子ETV4和ETV5显著增加了TAZ启动子的萤光素酶活性。TAZ启动子报告质粒与单个ETS TFs表达质粒共转染293细胞。24小时后测量相对荧光素酶活性。B类ETV4转录因子通过TAZ启动子的近端区域增强TAZ启动区的荧光素酶活性。将截短的TAZ启动子报告质粒与ETV4表达质粒共转染293细胞。24小时后测量相对荧光素酶活性。C类，ETV4在TAZ启动子区富集。对PC3细胞中ETV4进行ChIP分析。利用TAZ启动子特异性引物，通过qPCR分析TAZ启动因子的富集情况，第页<0.05由学生t吨测试。D类ETV1、ETV4和ETV5的敲低降低了PC3细胞中TAZ mRNA的水平。用指定的siRNA转染PC3细胞3天。通过qPCR分析TAZ的mRNA水平。E类ETV1、ETV4和ETV5的敲除降低了PC3细胞中TAZ蛋白的水平。同时用ETV1、ETV4和ETV5 siRNA转染PC3细胞3天。通过Western blotting和qPCR分析TAZ和ETV1、ETV4和ETV5的mRNA和蛋白水平。F类MAPK活性的抑制抑制了RWPE1细胞中TAZ的表达。用U0126（10μ米用Western blotting分析TAZ的表达。G公司ETV4的过度表达促进TAZ的表达，且与MAPK活性无关。pBABE载体控制和FLAG-ETV4 RWPE1细胞用U0126（10μ米24 h），通过Western blotting分析TAZ的表达。H（H）TAZ基因敲除可削弱RWPE1细胞中ETV4过度表达诱导的细胞迁移。用指示的siRNA转染RWPE1细胞2天。用Transwell法分析这些细胞的迁移情况。显示了Transwell迁移分析的代表性图像。相对迁移能力归一化为vector/siCON组。*，第页<0.05由学生t吨测试。误差线，标准偏差。
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