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特集页（不使用动物的化学物质的眼刺激性试验法“Vitrigel”®-Eye Irritancy Test（Vitrigel®-EIT法）“”

专题页面（生命科学）

眼睛刺激性试验法“Vitrigel®-EIT法“是指

眼刺激性试验法是为了评价化学物质附着在眼睛上引起的障碍的严重性的试验法。以前是通过在兔子的眼睛里滴下受试物质，观察障碍程度的动物实验（德雷兹试验）来进行的。但是，在2013年EU以禁止对化妆品进行动物实验为契机，世界范围内减少动物实验实施的潮流正在加速。以这样的社会状况为背景，开发了利用培养细胞等代替动物的各种试验法（动物实验代替法）。
人眼最接近外界的组织是角膜（图1）。角膜表面的上皮层具有被称为上皮屏障功能的功能。在健康状态下，即使化学物质和微生物等异物接触到眼睛表面，该上皮屏障功能也不会发挥作用而侵入眼睛内部。另一方面，如果有眼刺激性的化学物质接触到眼睛，上皮屏障功能被破坏，化学物质侵入角膜内部，会引起角膜浮肿和白浊等障碍。

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　Vitrigel®-EIT法着眼于这个上皮屏障功能。首先ad-MED沥青胶®内培养角膜上皮来源的细胞，构建具有上皮屏障功能和与人的角膜上皮相似结构的角膜上皮模型（图2）。

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作为简便地评价上皮屏障功能的健全性的方法，有经上皮电阻值（Transepithelial electrical resistance，TEER）测定。具有良好屏障功能的组织较高TEER与此相对，如果屏障功能受到故障TEER值会降低。Vitrigel®-EIT方法是在角膜上皮模型上滴入化学物质TEER通过用专用的测量装置测量值的变化，仅仅3分钟就能判定化学物质有无眼刺激性（图3）。
本试验法于2019年6月为国际公定法OECD测试准则*No.494的明细栏样式中定义的设置。由此，在世界各国广泛用于化妆品等的安全性试验。

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＊“维特利格尔®」、「Vitrigel®」关于，关于
“维特利格尔®」、「Vitrigel®」是国立研究开发法人农业·食品产业技术综合研究机构（农研机构）的注册商标。眼睛刺激性试验法“Vitrigel®-EIT法》是在农林水产省“农业健康实用化研究促进项目”的支持下，与农研机构共同开发的。

＊OECD什么是测试准则
这是经济合作与发展组织（OECD）以用国际通用的方法评价化学物质对人的健康和生态系统的影响为目的收集的试验法的清单。通过多个设施的验证试验和专家的第三方评价，确认了有效性和可靠性的试验法OECD中描述的场景，使用以下步骤创建明细表，以便在概念设计中分析体量的体积。

Vitrigel-EIT 相关视频

这次，农研机构NARO单击功能区上Vitrigel®-EIT法的介绍动画被公开了，请允许我在下面的链接上介绍。


※关于上述动画，得到农研机构的同意后刊登。未经许可禁止转载。
※根据农研机构的情况等，动画的链接可能会在没有预告的情况下断开。请谅解。

产品信息

相关链接

研究发表

论文

  • Multi-laboratory Validation Study of the Vitrigel-Eye Irritancy Test Method as an Alternative to In Vivo Eye Irritation Testing
    H.Kojima, H.Yamaguchi, T.Sozu, N.Kleinstreuer, L.Chae-Hyung, W.Chen, M.Watanabe, T.Fukuda, K.Yamashita, T.Takezawa
    Alternatives to Laboratory Animals, 47(3-4),140-157(2019).
  • 使用胶原三凝胶膜室的眼刺激性试验法
    竹泽俊明、山口宏之
    皮肤安全性、有用性评价法、株式会社技术信息协会、73-77（2018）。
  • Development of a human corneal epithelium model utilizing a collagen vitrigel membrane and the changes of its barrier function induced by exposing eye irritant chemicals
    T.Takezawa, K.Nishikawa, Pi-Chao.Wang
    Toxicology in Vitro,25(6), 1237-1241(2011).

外部发布

  • 可用于含有固体被测物质的Vitrigel-EIT法的修订程序的提案
    山口宏之、押方步、绵谷弘胜、小岛肇、竹泽俊明
    日本动物实验代替法学会第33届大会、2020年
  • Vitrigel-EIT将方法应用于固体的新适用范围的提案
    山口宏之、押方步、绵谷弘胜、小嶋肇、竹泽俊明
    日本动物实验代替法学会第32届大会、2019年

其他应用程序开发

ad-MED沥青胶®、ad-MED沥青胶®介绍关于使用2的脏器模型开发发表的文献、本公司参加的外部发表。

论文

iPS细胞的小肠模型制作

  • Generation of human-induced pluripotent stem cell-derived functional enterocyte-like cells for pharmacokinetic studies
    S.Yoshida, T.Honjo, K.Iino, R.Ishibe, S.Leo, T.Shimada, T.Watanabe, M.Ishikawa, K.Maeda, H.Kusuhara, N.Shiraki, S.Kume
    Stem Cell Reports, Vol.16, 1–14(2021).


iPS细胞肝脏模型制作

  • Collagen vitrigel promotes hepatocytic differentiation of induced pluripotent stem cells into functional hepatocyte-like cells
    S.Nakai, I.Shibata, T.Shitamichi, H.Yamaguchi, N.Takagi, T.Inoue,T.Nakagawa, J.Kiyokawa, S.Wakabayashi, T.Miyoshi, E.Higashi, S.Ishida, N.Shiraki, S.Kume
    Biology Open,8(7), bio042192(2019).


肝脏模型制作

  • Prediction of Human Hepatic Clearance for Cytochrome P450 Substrates via a New Culture Method Using the Collagen Vitrigel Membrane Chamber and Fresh Hepatocytes Isolated from Liver Humanized Mice
    R.Watari, M.Kakiki, C.Yamasaki, Y.Ishida, C.Tateno, Y.Kuroda, S.Ishida, K.Kusano
    Biological and Pharmaceutical Bulletin, 42(3), 348-353(2019).
  • A long-term culture system based on a collagen vitrigel membrane chamber that supports liver-specific functions of hepatocytes isolated from mice with humanized livers
    R.Watari, M.Kakiki, A.Oshikata, T.Takezawa, C.Yamasaki, Y.Ishida, C.Tateno, Y.Kuroda, S.Ishida, K.Kusano
    The Journal of Toxicological Sciences,43(8), 521-529(2018).
  • Development of an oxygenation culture method for activating the liver-specific functions of HepG2 cells utilizing a collagen vitrigel membrane chamber
    A.Oshikata-Miyazaki, T.Takezawa
    Cytotechnology,68(5), 1801-1811(2016).


药剂的角膜透过性试验

  • Fabrication of a Corneal Model Composed of Corneal Epithelial and Endothelial Cells via a Collagen Vitrigel Membrane Functioned as an Acellular Stroma and Its Application to the Corneal Permeability Test of Chemicals
    H.Yamaguchi, T.Takezawa
    Drug Metabolism and Disposition,46(11), 1684-1691(2018).


皮肤敏感性试验


外部发布

iPS来自细胞的肝脏或小肠模型制作

  • 使用去甲硫氨酸培养基和胶原原三凝胶薄膜诱导分化的人iPS利用细胞来源肝脏细胞构建药物毒性试验体系
    柴田伊真、下道隆广、渡边辉彦、山口宏之、白木伸明、姶昭苑
    细胞测定研究会研讨会“细胞测定技术的现状和将来”，2019年
  • 人类iPS从细胞到功能性小肠上皮吸收细胞的新分化诱导系的构筑
    本庄贵之、饭生启太、前田和哉、渡边辉彦、石川晶也、楠原洋行、白木伸明、姶昭苑
    第41回日本分子生物学会年会、2018年
  • 人类iPS从细胞到肝脏细胞的新分化诱导系的构筑，以及与第一代培养肝细胞的功能比较
    仲井峻、山口宏之、高木信幸、井上智彰、中川俊人、清川顺平、白木伸明、姶昭苑
    2017年度生命科学系学会联合年度大会、2017年