miTarget™3′UTR miRNA靶克隆

GeneCopoeia在哺乳动物表达载体中提供全基因组人类、小鼠和大鼠microRNA（miRNA）3′UTR靶克隆。miRNA 3′UTR靶克隆可用于miRNA靶的鉴定和预测靶的功能验证，或用于研究miRNA对靶基因的调控作用。

从公共域基因序列数据库中获得3′UTR序列，并插入分泌型Gaussia荧光素酶（GLuc）报告基因的下游，该报告基因在哺乳动物细胞中由SV40启动子控制表达。嵌合mRNA由GLuc和3′UTR靶序列组成。因此，通过仅使用10μl细胞培养基的GLuc活细胞分析，可以轻松地进行mRNA-miRNA靶相互作用的研究。

除了使用GLuc作为miRNA 3′UTR靶向报告子外，还将CMV启动子驱动的分泌型碱性磷酸酶（SEAP）报告子克隆到同一载体中(pEZX-MT05型)作为内部控制。双报告载体系统可实现转染标准化，以进行准确的跨样本比较。

除了GLuc/SEAP双报告载体系统外，萤火虫/Renilla Duo-Luciferase报告载体(pEZX-MT06型)也可以使用。

LIN28是已知的miR-125a靶基因。将LIN28 3′UTR靶序列表达质粒单独转染HEK 293细胞（左栏）或与miR-125a前体表达质粒联合转染HEK293细胞。转染24小时后测定GLuc活性和内部对照SEAP活性。对于带有LIN28 3′-UTR靶序列表达克隆（左栏）的单个转染样品，GLuc与SEAP的活性比设置为1，并与联合转染样品的活性进行比较。结果表明，miR-125a对GLuc-LIN28-3′-UTR克隆的荧光素酶活性抑制了70%以上（右栏）。

优势