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.2011年4月；25(4):564-74.
doi:10.1210/me.2010-0425。 Epub 2011年2月17日。

多序列特异性DNA结合蛋白通过栓系途径介导雌激素受体信号

尼娜·赫尔丁 1, 加里·德·艾萨克斯, 亚当·迪尔, 苗孙, 张爱玲（Edwin Cheung）, 杰弗里·拉尼什, W Lee Kraus女士
附属公司

多序列特异性DNA结合蛋白通过栓系途径介导雌激素受体信号

尼娜·赫尔丁等。 分子内分泌学. 2011年4月.

摘要

雌激素受体（ER）通过其他DNA-结合转录因子（如激活蛋白1）间接募集（栓系）到DNA是雌激素分泌途径的重要组成部分，但我们对该途径中配体依赖性激活机制的了解有限。通过蛋白质组学、基因组学和基因特异性分析，我们证明大量DNA结合转录因子通过栓系途径促进雌激素信号传导。此外，我们定义了一组内源性基因，ERα通过激活蛋白1（例如c-Fos）和cAMP反应元件结合蛋白家族成员对其进行栓系，从而介导雌激素反应。最后，我们表明c-Fos和cAMP反应元件结合蛋白1之间的功能相互作用通过栓系途径促进雌激素依赖性调节。根据我们的结果，我们得出结论，栓系途径中ERα的招募依赖于配体诱导的转录因子复合物的形成，该复合物涉及不同蛋白家族转录因子之间的相互作用。

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图1。
图1。
TRE结合蛋白的蛋白质组学分析及其与ERα依赖性基因调控的关系。A、 在E2存在的情况下，ERα通过TRE刺激转录在体外用染色质模板进行分析。如图所示，将不含TRE或腺病毒E4启动子上游两个TRE位点的质粒模板组装成染色质，并在ERα和E2存在的情况下转录，使用HeLa细胞核提取物作为RNA聚合酶II转录机制的来源。B、 TRE相关蛋白质组分离中使用的固定化模板示意图。C、 Western blot显示用于质谱分析的结合组分中存在C-Fos和C-Jun。用HeLa细胞核提取物孵育含有或不含五个TRE的固定模板。使用针对c-Fos和c-Jun的抗体对结合材料进行蛋白质印迹。D，使用iTRAQ在TRE结合部分中鉴定的bZip蛋白的列表。如补充材料和方法中所述，对C组的结合蛋白进行iTRAQ分析。那些富集度大于或等于2倍的蛋白质包括在列表中。一，与所列蛋白质对应的所有独特肽的平均iTRAQ117/iTRAQ114比率。b条,P（P）在ProteinPilot软件中使用来自同一蛋白质的多肽的折叠比率计算的值。*，P（P）值未确定，因为折叠比率基于单个唯一/明确的肽序列。E、 比较AP-1、MAF和CREB家族的共识反应要素。F、 ERα+E2通过TREs、MARE和CRE刺激HeLa细胞中的基因表达。结果显示，SV40-荧光素酶报告基因构建物的瞬时转染-报告基因检测缺乏或包含启动子上游的两个TREs，MARE或CRE位点（参见底部的示意图). 将每个报告者连同或不连同ERα表达载体转染到HeLa细胞中，然后进行±E2（100 n米)持续16小时。收集细胞并进行萤光素酶测定分析。结果显示为−ERα/−E2条件下的折叠。每个酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。
图2。
图2。
HeLa-ERα细胞启动子近端ERα结合位点中TREs、CREs、MARE和EREs的分析。A、 ChIP-ChIP使用Nimblegen启动子阵列分析HeLa-ERα细胞中的启动子-近端ERα结合位点，该启动子阵列包含大约19000个启动子，从TSS上游2200 bp扩展到下游500 bp。数据显示为日志的热图21221个具有显著结合的启动子的ERα+E2 ChIP-ChIP数据。B、 原木的元基因分析2A组区域的富集率显示ERα结合显著。所有重要且独特的ERα结合位点的探针信号集中在峰值上，并在各区域进行平均。C、 由TRE、CRE、MARE和ERE位置权重矩阵生成的序列，用于对重要且独特的ERα结合位点峰进行生物信息学分析。这些序列显示为网络徽标。TRE、CRE和MARE位置权重矩阵来自TRANSFAC（58）。ERE位置权重矩阵是根据O'Lone的信息生成的等。(60). D、 HeLa-ERα细胞中显著且独特的ERα结合位点峰下的TRE、CRE、MARE和ERE的生物信息学分析。面板C中的位置权重矩阵与MAST（34）一起用于绘制结合位点的位置。显示了ERα显著峰值且含有TRE、CRE、MARE或ERE的启动子的数量。IP，免疫沉淀。
图3。
图3。
缺乏ERE的ERα结合基因的E2依赖性调节。A、 HeLa-ERα细胞E2调节基因RT-qPCR表达数据的热图以对数表示2根据栓系蛋白结合位点将折叠比分为三类。细胞被处理±E2（100 n米)如图所示。B、 对E2依赖性ERα与a组所示基因子集启动子结合的ChIP-qPCR分析酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。C、 面板B中分析的启动子示意图显示了增强子元件类型及其相对于TSS的位置。箭头对指示用于qPCR的引物的位置。
图4。
图4。
缺乏ERE的ERα结合启动子上c-Fos和CREB1结合的E2依赖性调节。HeLa ERα细胞中c-Fos（A）和CREB1（B）与图3A所示基因亚群启动子结合的ChIP-qPCR分析。细胞被处理为±E2（100 n米)每次45分钟酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。
图5。
图5。
用DN c-Fos或CREB1抑制E2依赖的TRE-和CRE-报告基因活性。A、 DN抑制剂对c-Fos和CREB1结合以及ERα募集的影响示意图。B、 Western blot显示转染HeLa细胞中A-Fos和A-CREB的表达与。空矢量控制。聚ADP-核糖聚合酶（PARP-1）用作负荷对照。C、 A-Fos和A-CREB对HeLa细胞中E2依赖的TRE-和CRE-报告基因活性的影响。SV40-荧光素酶报告基因构建缺乏或含有两个TRE或CRE，用ERα表达载体转染HeLa细胞，然后治疗±E2（100 n）米)收集细胞并进行荧光素酶分析。结果显示为控制/−E2条件下的折叠。每个酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。TF，转录因子。
图6。
图6。
用DN c-Fos或CREB1抑制含天然TRE和CRE基因的E2依赖性表达。A、 Western blot显示HeLa-ERα细胞中A-Fos、A-CREB和ERα的稳定表达与。空矢量控制。ERα用作负荷控制。B、 用RT-qPCR分析对照、A-Fos和A-CREB HeLa-ERα细胞对E2处理0、3和6 h（100 n）的mRNA表达米)如图所示。数据显示为每个细胞系中0 h E2条件下的折叠。每个酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。
图7。
图7。
抑制ERα、c-Fos和CREB1与含有DN c-Fos或CREB1的天然TRE-和CRE基因的启动子结合。对照、A-Fos和A-CREB HeLa-ERα细胞中ERα（A）、c-Fos（B）和CREB1（c）与图3A所示基因子集启动子结合的ChIP-qPCR分析。细胞被处理为±E2（100 n米)每次45分钟酒吧表示平均值±扫描电镜（n≥3）。酒吧标有星号与对照组明显不同(P（P）< 0.05).
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    1. Heldring N、Pike A、Andersson S、Matthews J、Cheng G、Hartman J、Tujague M、StröM A、Treuter E、Warner M、Gustafsson JA。2007年。雌激素受体：它们是如何发出信号的，它们的靶点是什么。生理学评论87:905–931-公共医学
    1. McDevitt MA、Glidewell-Kenney C、Jimenez MA、Ahearn PC、Weiss J、Jameson JL、Levine JE.2008。雌激素经典和非经典作用的新见解：来自雌激素受体敲除和敲入小鼠的证据。分子细胞内分泌290:24–30-项目管理委员会-公共医学
    1. Jakacka M、Ito M、Martinson F、Ishikawa T、Lee EJ、Jameson JL。雌激素受体（ER）α脱氧核糖核酸结合域敲除突变为体内非经典ER通路信号传导提供了证据。摩尔内分泌16:2188–2201-公共医学
    1. O'Brien JE、Peterson TJ、Tong MH、Lee EJ、Pfaff LE、Hewitt SC、Korach KS、Weiss J、Jameson JL。雌激素诱导的子宫上皮细胞增殖独立于与经典雌激素反应元件结合的雌激素受体α。生物化学杂志281:26683–26692-公共医学
    1. Syed FA、Mödder UI、Fraser DG、Spelsberg TC、Rosen CJ、Krust A、Chambon P、Jameson JL、Khosla S.2005。雌激素的骨骼效应由经典和非经典雌激素受体途径的相反作用介导。骨矿工研究杂志20:1992–2001-项目管理委员会-公共医学

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