跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
美国国家科学院院刊。2004年12月14日；101(50): 17510–17515.
2004年12月2日在线发布。 数字对象标识：10.1073/pnas.0405313101
预防性维修识别码：PMC536019
PMID：15576511

慢病毒载体传递帕金预防帕金森病α-突触核蛋白大鼠模型多巴胺能变性

克里斯托夫·罗·比安科,* 伯纳德·施耐德,*† 马蒂亚斯·鲍尔,* 阿里·萨贾迪,* 亚历克西斯·布里斯,‡ 岩手武士,§和帕特里克·埃比舍尔*
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

帕金森病（PD）的特征是中脑多巴胺神经元的逐渐丧失和被称为路易体的细胞质内含物的存在。包括α-突触核蛋白和parkin在内的几个基因的突变与家族性帕金森病有关。parkin E3连接酶活性的丧失导致早发常染色体隐性青少年帕金森病患者的多巴胺能神经元变性，这表明parkin对多巴胺神经元的生存起着关键作用。为了评估parkin在PD发病机制中的潜在神经保护作用，我们在PD慢病毒模型中测试了野生型大鼠parkin的过度表达是否可以防止突变的人类A30Pα-突触核蛋白的毒性。动物过度表达parkin显示出α-突触核蛋白诱导的神经病理学显著降低，包括在黑质中保存酪氨酸羟化酶阳性细胞体，在纹状体中保留酪氨酸氢酶阳性神经末梢。帕金介导的神经保护作用与超磷酸化α-突触核蛋白内含物的增加有关，表明帕金在路易小体的发生中起着关键作用。这些结果表明，帕金基因治疗可能是PD的一种有希望的候选治疗方法。

关键词：基因治疗、慢病毒、神经变性疾病、路易体、神经保护

帕金森氏病（PD）是最常见的神经退行性疾病之一，约占60岁以上人口的2%。黑质致密部多巴胺能神经元的丢失和随后纹状体多巴胺的耗竭会导致运动障碍，包括运动障碍、静止性震颤、肌肉僵硬、步态和姿势缺陷。PD的神经病理学特征是出现了细胞内蛋白质沉积，即路易小体和路易神经节。虽然导致散发性帕金森病中黑质多巴胺神经元选择性变性的机制尚不清楚，但由于发现了各种基因突变，有关家族型帕金森病发病机制的线索正在出现。α-突触核蛋白（A53T和A30P）中的两个错义突变是第一个被发现的，它们与早发常染色体显性PD有关(1,2). 随后发现α-突触核蛋白是散发性PD路易小体的主要成分(三,4)α-synuclein基因座三倍体导致常染色体显性PD(5)，表明野生型α-突触核蛋白的积累足以引起帕金森病。编码parkin、UCH-L1、DJ-1和PINK1的基因中也发现了其他与帕金森病相关的突变(6,7).

parkin基因突变与常染色体隐性遗传青少年帕金森综合征（AR-JP）有关，该病以青少年典型帕金森症状和病理为特征(8). Parkin是一种E3泛素连接酶，在AR-JP患者中发现的Parkin突变导致该活性部分或完全丧失(9). 已鉴定出帕金的几种底物，如CDCrel-1、联菲蛋白-1和哦-α-突触核蛋白（αSp22）和Pael-R的糖基化形式(10). 已发现αSp22和Pael-R都在AR-JP脑中积聚(11). parkin基因第3或第4外显子缺失的AR-JP患者脑内未检测到parkin(12)隐性遗传模式表明帕金功能丧失可能是AR-JP的原因。相反，一些报道描述了帕金的神经保护作用在体外对抗内质网应激(13,14)α-synuclein或Pael-R过度表达(15–17)，蛋白酶体抑制(15)，兴奋毒性(18)和聚谷氨酰胺毒性(19). 类似地，帕金可防止α-突触核蛋白和Pael-R转基因果蝇的多巴胺能细胞丢失(20). 这些发现支持帕金在多巴胺能神经元存活中的重要作用。与散发性和显性家族性PD相比，帕金突变携带者中通常不存在路易体(12,21–23)这表明parkin也可能参与路易体的形成。尽管先前有证据表明帕金可能具有神经保护作用，但这种特性从未在哺乳动物PD模型中进行过测试。因此，我们评估了帕金在α-突触核蛋白PD大鼠模型中的慢病毒传递(24). 与α-突触核蛋白转基因小鼠模型相比，人α-突触核蛋白与慢病毒或腺相关病毒载体的表达可诱导黑质多巴胺神经元进行性变性(24–28). 在本研究中，我们报道了黑质中慢病毒介导的parkin表达保护多巴胺神经元免受A30Pα-突触核蛋白诱导的神经毒性。使用Ser-129-磷酸化α-突触核蛋白的特异性抗体Pser129，我们还表明帕金的过度表达促进了含有磷酸化α-synuclein的内含物的形成，使人联想起PD脑中的路易小体(29). 因此，帕金可能通过解毒可溶性和聚集形式的错误折叠蛋白，促进多巴胺能神经元的存活，从而在缓解PD发病机制中发挥中心作用。

方法

慢病毒载体生产。将编码核定位黄色荧光蛋白（YFP）（BD Biosciences Clontech）、A30P人α-synuclein和大鼠parkin的cDNA克隆到SIN-W-PGK慢病毒转移载体中，并如参考文献所述生成病毒颗粒（lent-YFP、lent-A30P和lent-parkin）。24和30通过以1:1的比例混合病毒来制备病毒悬浮液lent-A30P/lent-YFP和lent-A30P/lent-parkin。对于每种慢病毒悬浮液，将病毒颗粒含量标准化为360000纳克p24每毫升。

立体定向注射。将慢病毒载体立体定向注射到成年雌性Wistar大鼠（Iffa-Credo，Charles River Laboratories）的右侧黑质，重量约200 g。用10μl Hamilton注射器以0.2μl/min的速度用自动注射器（Stoelting）注射病毒悬浮液（2.5μl体积），在拔出针头之前，将针头再放置10分钟。向黑质内的两个部位注射立体定向注射，坐标如下（单位：毫米）：前侧、外侧和腹侧，第一个部位和第二个部位分别为4.8、2和7.7，第5.5、1.7和7.7。从Bregma计算前、侧坐标，从颅骨表面计算腹面坐标。实验按照欧洲共同体理事会关于实验动物护理和使用的第86/609/EEC号指令进行。

免疫组织化学。注射慢病毒载体悬浮液六周后，用过量的戊巴比妥钠杀死动物，并经心灌注生理盐水和4%多聚甲醛。大脑被移除并在4%多聚甲醛中固定约24小时，在25%蔗糖/0.1M磷酸盐缓冲液中冷冻保护48小时，并按照参考文献所述进行处理。24.

如前所述，使用以下主要抗体：酪氨酸羟化酶（TH）绵羊抗体（1:500）（Pel-Freez Biologicals）、α-突触核蛋白多克隆兔抗体(24)、LB509人α-突触核蛋白特异性单克隆抗体（1:500）（Zymed）、Pser129抗体特异性识别α-突触素的磷酸化-Ser-129(29)（1:100），以及一只兔抗体到帕金C末端（1:500）（细胞信号技术，马萨诸塞州贝弗利）。对于光学显微镜，切片通过参考文献中所述的经典抗生物素-生物素复合物方法染色。24。对于荧光多重标记，与Cy2、Cy3和Cy5偶联的次级Abs购自Jackson ImmunoResearch。TOPRO-3（分子探针）被用作核标记。然后用共焦显微镜分析切片（TCS SP2 AOBS，莱卡，海德堡）。

FD NeuroSilver试剂盒（FD Neura-Technologies，巴尔的摩）根据制造商的协议用于检测退化神经元(23).

TH-阳性神经元和磷酸化包涵体的定量。如参考文献所述，通过荧光显微镜以盲法测定TH-免疫活性（TH-IR）神经元相对于对侧的百分比。24和30为了确定TH-IR终末的密度，用ABC试剂盒（Vector Laboratories）对纹状体纤维进行TH染色，并用国家卫生研究所1.4参考中所述的软件。24为了确定含有磷酸化α-突触核蛋白内含物的神经元数量，用抗生物素-生物素复合物法用Pser129抗体对黑质的五个切片进行染色，并对相邻切片进行α-突触核蛋白染色。

统计分析采用单因素方差分析，然后进行舍夫概率最小平方差事后检验(统计学5.1，StatSoft）。显著性水平设置为P（P）< 0.05.

结果

慢病毒介导Parkin和人A30P的表达α-突触核蛋白。为了评估帕金对α-突触核蛋白诱导的黑质纹状体神经退行性变的神经保护作用，将编码A30P人α-突触素和野生型大鼠帕金（lent-A30P/lent-parkin）或A30Pα-synuclein和YFP（lent-A30P/lent-YFP）的慢病毒载体混悬液1:1注入大鼠黑质。对照组动物接受单用慢蛋白或高2倍剂量的慢蛋白YFP（lent-YFP2X）（以匹配与双病毒治疗相关的病毒颗粒总量）。作为初始步骤，我们评估了编码A30Pα-突触核蛋白和parkin的慢病毒载体混合物的黑质转导效率(图1A类)结果表明，大多数转基因细胞在注射侧均过度表达A30Pα-突触核蛋白和帕金。在非注射侧未观察到内源性α-突触核蛋白和帕金染色（数据未显示）。这两种蛋白都定位于转导神经元的细胞体和轴突中。用共焦显微镜在四只动物的四个冠状切片上测定双转导细胞的百分比，结果显示为72±3%。几乎所有转导的细胞都具有典型的神经元形态，证实慢病毒载体对神经元细胞具有强烈的嗜性(31). 因此，共注射两种慢病毒载体代表了研究这两种蛋白质之间关系的可行策略。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0500466790001.jpg

大鼠黑质中人类A30Pα-突触核蛋白（绿色）和帕金（红色）的慢病毒介导表达。(A类)大量双重感染神经元同时过度表达A30Pα-突触核蛋白和parkin。双重免疫染色细胞定量显示72±3%的双重感染细胞。(B类)注射lent-A30P和lent-parkin的大鼠黑质TH（红色）、parkin（绿色）和A30P人α-突触核蛋白（蓝色）三重标记的共焦图像。高倍放大(下部)发现慢病毒注射6周后仍有大量TH神经元表达A30P人α-突触核蛋白和帕金。（比例尺：A类，100微米；B类，250微米）

Parkin的表达可保护多巴胺神经元。之前描述过慢病毒介导的野生型或突变的人类α-突触核蛋白的表达可诱导大鼠选择性多巴胺能细胞死亡(24). 表达A30Pα-突触核蛋白的动物显示黑质TH-IR神经元减少33%，几乎所有表达人类α-突触核蛋白的多巴胺能神经元在病毒注射后6周内死亡(24). 引人注目的是，对TH、人α-突触核蛋白和帕金的三重标记共聚焦显微镜分析显示，注射lent-A30P/lent-parkin的动物在慢病毒注射后6周保留了大量仍表达A30Pα-突触素和过表达大鼠帕金的多巴胺能神经元(图1B类). 高倍放大的黑质致密部显示两种病毒在黑质区域均匀扩散。注射慢-YFP2X或慢帕金的动物未显示多巴胺能黑质纹状体损伤(图2A类). 相反，表达A30P/YFP的动物显示黑质TH-IR细胞显著缺失。有趣的是，parkin的过度表达使TH-IR神经元免于A30Pα-突触核蛋白的神经毒性。与对侧非注射侧相比，黑质TH-IR神经元丢失百分比的量化显示帕金显著降低TH-IR细胞丢失率，从31%（A30P/YFP）降低到9%（A30P/parkin）(图2B类). Parkin的表达也可以阻止α-突触核蛋白诱导的纹状体TH-IR纤维的丢失(图3A类). TH阳性神经末梢密度的量化显示，帕金显著降低多巴胺能末梢的丢失，从16%（A30P/YFP）降低到4%（A30P/帕金）(图3B类). 注射lent-YFP2X或lent-parkin的动物的纹状体中未观察到TH染色减少。对泡状单胺转运体2型染色的纹状体切面观察到帕金的类似保护作用（数据未显示）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0500466790002.jpg

帕金过度表达可减少A30Pα-突触核蛋白诱导的多巴胺黑质神经元丢失。(A类)注射编码YFP（YFP2×）、大鼠parkin（parkin）和A30P人α-突触核蛋白（A30P）的慢病毒载体的不同混合物后6周大鼠黑质中TH的表达。(B类)直方图表示单侧注射不同慢病毒结构的大鼠在6周时相对于对侧TH-IR黑质神经元的丢失。数值是指平均值±SEM；n个=YFP2×或parkin的5只动物；n个A30P/YFP=10；n个A30P/停车场=18；*,P（P）与慢YFP注射动物相比，<0.05；§,P（P）<0.005，与A30P/YFP表达动物相比。（比例尺：350μm）

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0500466790003.jpg

帕金预防大鼠纹状体α-突触核蛋白诱导的多巴胺能纤维丢失。(A类)大鼠黑质内注射编码YFP（YFP2×）、大鼠帕金（parkin）和A30P人α-突触核蛋白（A30P）的慢病毒载体的不同溶液，对其纹状体切片进行TH标记物染色。(B类)直方图表示单侧注射不同慢病毒悬液的大鼠在6周时相对于对侧TH-IR纤维神经元的丢失。注射lent-A30P/lent-YFP的动物显示纹状体同侧多巴胺能神经支配显著减少。数值是指平均值±SEM；n个=5只动物用于YFP2×或parkin；n个A30P/YFP=12；n个A30P/停车场=13；*,P（P）<0.05，与lent-YFP2×注射动物相比；§,P（P）<0.005，与A30P/YFP表达动物相比。

帕金预防A30P诱导的神经变性。经历变性的神经元变得嗜银，因此可以用银染色进行特异性检测(32). 慢病毒介导的突变人类α-突触核蛋白的表达被证明可诱导强烈的神经炎和银染色检测到的细胞病理学(24). 表达A30P/YFP的动物在突起和细胞体中都有银阳性的暗结构(图4). 在表达A30P/YFP或A30P/parkin的动物大脑中也观察到类似的α-突触核蛋白表达。parkin与A30Pα-突触核蛋白的共表达可防止银阳性变性神经元的出现。在表达A30P/YFP的动物的非注射侧或注射lent-YFP或lent-parkin的动物中均未检测到银染色。这些结果表明，帕金可防止表达PD-linked突变的人类α-synuclein的大鼠的α-synuglein诱导的黑质神经变性。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0500466790004.jpg

Parkin可预防A30Pα-突触核蛋白诱导的神经退行性变。表达A30P/YFP的动物脑切片(A类–C类)或A30P/停车场(D类–F类)α-synuclein染色。在两组中均观察到A30P人α-突触核蛋白的类似表达。未观察到非注射侧（NI）、注射慢YFP或注射慢帕金（数据未显示）动物的α-突触核蛋白染色。银染色(B类,C类、和E类–我)在邻近的黑质切片上检测变性神经元。高倍镜显示，表达A30P/YFP的动物的黑质神经元的细胞体和轴突中均存在银阳性的暗结构(C类). parkin与A30Pα-突触核蛋白共表达可防止银阳性退化神经元的出现(F类). 非注射侧（NI）(G公司)和表达YFP的动物(H（H）)或停车场(我)没有显示任何特定的银染色。（比例尺：A类,B类,D类,E类、和G公司–我140微米；C类和F类，40微米）

帕金增加了磷酸化的数量α-突触核蛋白内含物。Lewy小体几乎存在于所有形式的PD中，但AR-JP患者的parkin突变除外，这表明E3连接酶parkin在Lewy体的形成中起着重要作用(12,21–23). 由于难以区分病理性包涵体和与一般α-synuclein染色相关的亚细胞区域中α-synuglein的积累，因此在129位用α-synnuclein磷酸化形式的特异性抗体Pser129检测包涵体(29). 这种形式的α-突触核蛋白选择性地大量积聚在同核蛋白病变的路易小体中(29)而正常人和大鼠大脑中只有一小部分α-突触核蛋白磷酸化(29). 在未注射大鼠的黑质中观察到极低水平的磷酸化大鼠α-突触核蛋白(图5A类)以及那些过度表达YFP的细胞（数据未显示）。相反，慢病毒介导的A30Pα-突触核蛋白的表达导致圆形过度磷酸化Pser129阳性内含物的形成(图5B类)和偶尔的磷酸化神经突(图5C类). 核标记Pser129和人α-突触核蛋白特异性抗体的三重标记表明，胞浆内磷酸化包涵体对人α-联核蛋白具有较强的免疫阳性反应(图5D类). 为了探讨parkin在α-突触核蛋白内含物形成中的作用，对过表达A30P/YFP和A30P/parkin的动物体内含有超磷酸化内含物的细胞数量进行了量化。与A30Pα-突触素共存的动物显示，含有超磷酸化内含物的神经元数量增加了45%(图5E类). 当仅对α-突触核蛋白阳性的细胞进行分析时，发现含有过磷酸化内含物的细胞增加了41%（数据未显示）。为了确定同核蛋白聚集体的其他翻译后修饰是否也与帕金提供的神经保护有关，我们还检查了A30P/YFP-和A30P/帕金过度表达动物的大脑中是否存在泛素化内含物。这些实验表明，无论是否有parkin过度表达，A30P表达动物的大脑中都没有泛素内含物（数据未显示）。帕金森病患者并非所有α-突触核蛋白内含物都对泛素具有免疫反应性，这表明泛素不是α-突触核蛋白病理学的先决条件(4).

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0500466790005.jpg

帕金增加磷酸化α-突触核蛋白内含物的数量。表达A30Pα-突触核蛋白和帕金的大鼠黑质切片用Pser129抗体进行免疫染色，该抗体对选择性广泛积聚在人类路易体中的α-突触核蛋白磷酸化-Ser-129特异性。(A类)在非注射侧观察到非常微弱的Pser129染色，对应于磷酸化大鼠α-突触核蛋白的生理水平。(B类)过度表达A30P/YFP或A30P/parkin的动物的黑质显示存在大量类似路易小体的超磷酸化内含物。(C类)在过表达A30P/parkin的动物中偶尔观察到Pser129阳性神经炎(D类)Pser129 Ab（绿色）、LB509人α-突触核蛋白特异性Ab（红色）和TOPRO-3核标记物（蓝色）的三重染色显示磷酸化包涵体富含人α-联核蛋白。(E类)定量表达A30P/YFP或A30P/parkin的大鼠黑质中含有Pser129阳性内含物的神经元数量；n个=每组6只动物；*,P（P）< 0.05;**,P（P）< 0.005. （比例尺：A类和B类150微米；C类，40微米；D类，10微米）

讨论

α-突触核蛋白异常积聚被认为是导致α-突触核蛋白连锁和散发性帕金森病选择性多巴胺能变性过程中的一个关键病理事件，但帕金森病内含物的神经毒性作用备受争议(33). 本报告的主要发现是帕金的基因治疗能有效防止PD-连锁突变α-突触核蛋白诱导的多巴胺能细胞丢失体内并促进超磷酸化α-突触核蛋白内含物的形成。与这些结果一致，编码E6-AP泛素连接酶的基因失活导致脊髓小脑共济失调1型转基因模型的神经毒性增加，核内含物数量减少(34). 最近，有报道称E3-ligase CHIP（Hsc70相互作用蛋白的羧基末端）可以减轻tau诱导的细胞死亡，并促进过度磷酸化的tau聚集(35,36). Parkin、CHIP和E6-AP同样可以通过消除可溶性有毒蛋白质而有利于不溶性聚集物来提高细胞存活率。此外，在体外哺乳动物细胞和转基因苍蝇研究也将帕金在多巴胺神经元存活中的保护作用归因于帕金(15,20). 相反，parkin在α-突触核蛋白转基因果蝇中的过度表达会导致非磷酸化α-突触核蛋白内含物的数量减少。然而，在本研究中，我们分析了帕金在形成更成熟的翻译后修饰的含α-突触核蛋白内含物中的作用。磷酸化α-突触核蛋白的存在最近被认为是α-突触核蛋白病变的病理特征(29,37,38). 在α-突触核蛋白表达6周后，并非所有α-突触素阳性细胞都形成了过度磷酸化包涵体。因为超磷酸化α-突触核蛋白内含物的形成是一个渐进的时间和剂量依赖过程(37,39)大多数包裹体可能在6周的短时间内未磷酸化。然而，检测这些Pser129内含物比经典的α-突触核蛋白染色更具优势，可以更好地区分真内含物和蛋白质的非聚集亚细胞积累(37). 我们观察到帕金的神经保护作用与超磷酸化α-突触核蛋白内含物数量的显著增加有关。因此，我们假设帕金通过促进成熟的过度磷酸化内含物中有毒的原纤前低聚物的螯合来帮助多巴胺神经元生存。有趣的是，胞质多巴胺已被证明与α-突触核蛋白相互作用，形成加合物，稳定毒性原纤维的形成，这表明多巴胺能神经元选择性变性的潜在机制(40). 这些原纤维的一种毒性活动似乎是突触小泡的破坏(41,42).

其他研究结果也表明，毒性和聚集是α-突触核蛋白诱导的病理学中的两种不同现象。最近的一项研究报道，在表达A53T人α-突触核蛋白的转基因小鼠中，与神经元功能障碍相关的行为损伤没有聚集形成(43). 此外，人α-突触核蛋白在原代中脑细胞过度表达引起的毒性与可见蛋白聚集体的存在无关(15).

帕金突变的AR-JP患者的大脑通常表现为多巴胺能神经变性，无路易体，路易体是PD中常见的神经蛋白细胞质内含物。这一发现表明路易体的发生需要帕金。我们的观察表明，帕金与A30P人α-突触核蛋白共表达增加了含有超磷酸化内含物的神经元数量，这与该假设一致。Parkin也可能通过阻断A30P人α-突触核蛋白触发的细胞死亡途径间接作用于内含物的形成，从而迫使耐药细胞在细胞质中积累α-突触核蛋白并最终形成内含物。有趣的是，当联菲蛋白-1和α-突触核蛋白共存时，帕金被证明增加了泛素化包涵体的形成在体外(44). 此外，帕金对培养细胞中α-突触核蛋白诱导的毒性的保护作用也被描述为与高分子量α-突触核蛋白的出现有关，这表明帕金促进了α-突突核蛋白的聚集(16). 我们最近还研究了编码胶质细胞系衍生神经营养因子的慢病毒载体预防与慢病毒介导的A30P突变人类α-突触核蛋白表达相关的黑质多巴胺能变性的能力(45). 与帕金相反，这种神经营养因子的表达并不能阻止α-突触核蛋白诱导的毒性。这种神经保护的差异可能反映了两种PD-linked蛋白α-synuclein和parkin之间的特殊关系，以及它们在共同的细胞途径中的意义。深入研究帕金对α-突触核蛋白毒性保护的分子机制，将为帕金森病中多巴胺神经元的独特脆弱性提供重要线索。这些结果还表明，帕金或增加帕金表达的药物的基因治疗可能是PD的潜在治疗策略。有趣的是，人类α-突触核蛋白与病毒载体的脑内传递最近已扩大到非人灵长类动物，在PD遗传灵长类动物模型中评估帕金的神经保护性能的潜力(27,46). 帕金能够克服改善疾病遗传动物模型中观察到的病理表型的巨大困难，这一证明进一步加强了基于帕金的策略作为PD患者有希望的治疗方法的理由。

致谢

我们感谢Nicole Déglon、William Pralong和Ruth-Luthi Carter的有益评论；Philippe Colin、Christel Sadeghi、Anne Maillard和Maria Rey提供了出色的技术帮助；和Michel Goedert博士研究A30P人α-突触核蛋白cDNA。这项工作得到了瑞士国家科学基金会和迈克尔·福克斯基金会的支持。

笔记

作者贡献：C.L.和P.A.设计的研究；C.L.、B.L.S.、A.B.和T.I.进行研究；C.L.、B.L.S.、M.B.和A.S.分析数据；C.L.和P.A.写了这篇论文。

本文直接（第二轨道）提交给PNAS办公室。

缩写：AR-JP，常染色体隐性遗传青少年帕金森综合征；帕金森病；TH，酪氨酸羟化酶；TH-IR、TH-免疫活性；YFP，黄色荧光蛋白。

工具书类

1Polymeropoulos，M.H.，Lavedan，C.，Leroy，E.，Ide，S.E.，Dehejia，A.，Dutra，A.，Pike，B.，Root，H.，Rubenstein，J.，Boyer，R。，等人。(1997)科学类 276,2045–2047. [公共医学][谷歌学者]
2Kruger，R.、Kuhn，W.、Muller，T.、Woitalla，D.、Graeber，M.、Kosel，S.、Przuntek，H.、Epplen，J.T.、Schols，L.和Riess，O.（1998）自然遗传学。 18,106–108. [公共医学][谷歌学者]
三。Spillantini，M.G.、Schmidt，M.L.、Lee，V.M.、Trojanowski，J.Q.、Jakes，R.和Goedert，M.（1997）自然 388,839–840页。[公共医学][谷歌学者]
4斯皮尔安蒂尼，M.G.、克劳瑟，R.A.、杰克斯，R.、长谷川，M.和戈德特，M.（1998）程序。国家。阿卡德。科学。美国 95,6469–6473.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
5Singleton，A.B.，Farrer，M.，Johnson，J.，Singleton。，等人。(2003)科学类 302,841. [公共医学][谷歌学者]
6道森·T·M·道森和道森·V·L·道森（2003）科学类 302,819–822. [公共医学][谷歌学者]
7瓦伦特·E.M.、阿布·斯莱曼·P.M.、卡普托·V.、穆奇特·M.、哈维·K、吉斯佩特·S、阿里·Z、德尔·图尔科·D、本蒂沃格利奥·A.R.、希利·D·G、。，等人。(2004)科学类 304,1158–1160. [公共医学][谷歌学者]
8北田，T.，朝川，S.，服部，N.，松美，H.，山村，Y.，广岛，S自然 392,605–608. [公共医学][谷歌学者]
9Shimura H.、Hattori N.、Kubo S.、Mizuno Y.、Asakawa S.、Minoshima S.、Shimizu N.、Iwai K.、Chiba T.、Tanaka K.和Suzuki T.（2000）自然遗传学。 25,302–305之间。[公共医学][谷歌学者]
10Cookson，M.R.（2003）神经元 37,7–10. [公共医学][谷歌学者]
11Cookson，M.R.（2003）神经摩尔。医学。 三,1–13. [公共医学][谷歌学者]
12Shimura H.、Hattori N.、Kubo S.、Yoshikawa M.、Kitada T.、Matsumine H.、Asakawa S.、Minoshima S.、Yamamura Y.、Shimizu N.和Mizuno Y.（1999）安。神经。 45,668–672. [公共医学][谷歌学者]
13Imai，Y.、Soda，M.和Takahashi，R.（2000）生物学杂志。化学。 275,35661–35664. [公共医学][谷歌学者]
14Darios，F.、Corti，O.、Lucking，C.B.、Hape，C.、Muriel，M.P.、Abbas，N.、Gu，W.J.、Hirsch，E.C.、Rooney，T.、Ruberg，M.和Brice，A.（2003）嗯，分子遗传学。 12,517–526页。[公共医学][谷歌学者]
15Petrucelli，L.、O’Farrell，C.、Lockhart，P.J.、Baptista，M.、Kehoe，K.、Vink，L.、Choi，P.、Wolozin，B.、Farrer，M.、Hardy，J.和Cookson，M.（2002）神经元 36,1007–1019. [公共医学][谷歌学者]
16Oluwatosin-Chigbu，Y.、Robbins，A.、Scott，C.W.、Arriza，J.L.、Reid，J.D.和Zysk，J.R.（2003）生物化学。生物物理学。Res.Commun公司。 309,679–684. [公共医学][谷歌学者]
17Imai，Y.、Soda，M.、Inoue，H.、Hattori，N.、Mizuno，Y.和Takahashi，R.（2001）单元格 105,891–902. [公共医学][谷歌学者]
18Staropoli，J.F.、McDermott，C.、Martinat，C.、Schulman，B.、Demireva，E.和Abeliovich，A.（2003）神经元 37,735–749. [公共医学][谷歌学者]
19Tsai，Y.C.、Fishman，P.S.、Thakor，N.V.和Oyler，G.A.（2003）生物学杂志。化学。 278,22044–22055. [公共医学][谷歌学者]
20Yang，Y.、Nishimura，I.、Imai，Y.，Takahashi，R.和Lu，B.（2003）神经元 37,911–924。[公共医学][谷歌学者]
21Takahashi，H.、Ohama，E.、Suzuki，S.、Horikawa，Y.、Ishikawa，A.、Morita，T.、Tsuji，S.和Ikuta，F.（1994）神经病学 44,437–441. [公共医学][谷歌学者]
22Hayashi，S.、Wakabayashi、K.、Ishikawa，A.、Nagai，H.、Saito，M.、Maruyama，M.，Takahashi，T.、Ozawa，T..、Tsuji，S.&Takahahi，H.（2000）运动障碍 15,884–888. [公共医学][谷歌学者]
23van de Warrenburg，B.P.、Lammens，M.、Lucking，C.B.、Denefle，P.、Wesseling，P.，Booij，J.、Praamstra，P.和Quinn，N.、Brice，A.和Horstink，M.W.（2001）神经病学 56,555–557. [公共医学][谷歌学者]
24Lo Bianco，C.、Ride，J.L.、Schneider，B.L.、Deglon，N.和Aebischer，P.（2002）程序。国家。阿卡德。科学。美国 99,10813–10818.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
25Klein，R.L.，King，M.A.，Hamby，M.E.&Meyer，E.M.（2002）嗯，基因疗法。 13,605–612. [公共医学][谷歌学者]
26Kirik，D.、Rosenblad，C.、Burger，C.、Lundberg，C.、Johansen，T.E.、Muzyczka，N.、Mandel，R.J.和Bjorklund，A.（2002）《神经科学杂志》。 22,2780–2791.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
27Kirik，D.、Annett，L.E.、Burger，C.、Muzyczka，N.、Mandel，R.J.和Bjorklund，A.（2003）程序。国家。阿卡德。科学。美国 100,2884–2889。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
28Lauwers，E.，Debyser，Z.，Van Dorpe，J.，De Strooper，B.，Nuttin，B.&Baekelandt，V.（2003）脑病理学。 13,364–372.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
29Fujiwara，H.、Hasegawa，M.、Dohmae，N.、Kawashima，A.、Masliah，E.、Goldberg，M.S.、Shen，J.、Takio，K.和Iwatsubo，T.（2002）自然细胞生物学。 4,160–164. [公共医学][谷歌学者]
30Deglon，N.，Tseng，J.L.，Bensadoun，J.C.，Zurn，A.D.，Arsenijevic，Y.，Pereira de Almeida，L.，Zufferey，R.，Trono，D.&Aebischer，P.（2000）嗯，基因疗法。 11,179–190. [公共医学][谷歌学者]
31Blomer，U.、Naldini，L.、Kafri，T.、Trono，D.、Verma，I.M.和Gage，F.H.（1997）J.维罗尔。 71,6641–6649.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
32Beltramino，C.A.、de Olmos，J.S.、Gallyas，F.、Heimer，L.和Zaborszky，L.（1993）NIDA研究专著。 136,101–126; 讨论126–132。[公共医学][谷歌学者]
33Goldberg，M.S.&Lansbury，P.T.，Jr.（2000）自然细胞生物学。 2,E115–E119。[公共医学][谷歌学者]
34Cummings，C.J.、Reinstein，E.、Sun，Y.、Antalfy，B.、Jiang，Y.，Ciechanover，A.、Orr，H.T.、Beaudet，A.L.和Zoghbi，H.Y.（1999）神经元 24,879–892. [公共医学][谷歌学者]
35Shimura，H.、Schwartz，D.、Gygi，S.P.和Kosik，K.S.（2004）生物学杂志。化学。 279,4869–4876. [公共医学][谷歌学者]
36Petrucelli，L.、Dickson，D.、Kehoe，K.、Taylor，J.、Snyder，H.、Grover，A.、De Lucia，M.、McGowan，E.、Lewis，J.和Prihar，G。，等人。(2004)嗯，分子遗传学。 13,703–714. [公共医学][谷歌学者]
37Neumann，M.，Kahle，P.J.，Giasson，B.I.，Ozmen，L.，Borroni，E.，Spooren，W.，Muller，V.，Odoy，S.，Fujiwara，H.，Hasegawa，M。，等人。(2002)临床杂志。投资。 110,1429–1439.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
38岩津博，T.（2003）神经学杂志。 250,增刊3，11-14。[公共医学][谷歌学者]
39Takahashi，M.、Kanuka，H.、Fujiwara，H.，Koyama，A.、Hasegawa，M..、Miura，M.&Iwatsubo，T.（2003）神经科学。莱特。 336,155–158. [公共医学][谷歌学者]
40Conway，K.A.，Rochet，J.C.，Bieganski，R.M.&Lansbury，P.T.，Jr.（2001）科学类 294,1346–1349. [公共医学][谷歌学者]
41Volles，M.J.、Lee，S.J.、Rochet，J.C.、Shtilerman，M.D.、Ding，T.T.、Kessler，J.C.和Lansbury，P.T.Jr.（2001）生物化学 40,7812–7819. [公共医学][谷歌学者]
42Volles，M.J.和Lansbury，P.T.，Jr.（2002）生物化学 41,4595–4602. [公共医学][谷歌学者]
43Gispert，S.、Del Turco，D.、Garrett，L.、Chen，A.、Bernard，D.J.、Hamm-Clement，J.、Korf，H.W.、Deller，T.、Braak，H.、Auburger，G.和Nussbaum，R.L.（2003）分子细胞。神经科学。 24,419–429. [公共医学][谷歌学者]
44Chung，K.K.，Zhang，Y.，Lim，K.L.，Tanaka，Y.、Huang，H.、Gao，J.、Ross，C.A.、Dawson，V.L.和Dawson自然医学。 7,1144–1150. [公共医学][谷歌学者]
45Lo Bianco，C.、Déglon，N.、Pralong，W.和Aebischer，P.（2004年）神经生物学。数字化信息系统。，正在印刷中。[公共医学]
46Kirik，D.和Bjorklund，A.（2003）《神经科学趋势》。 26,386–392. [公共医学][谷歌学者]
文章来自美国国家科学院院刊由提供美国国家科学院