醋酸损伤CRC细胞的自噬。(一)醋酸暴露48小时后细胞内Beclin-1水平 h(110和220 百万分之一;70和140 RKO和HCT-15细胞分别为mM)(b条)HCT116、RKO和HCT-15细胞株中LC3-I/II的免疫印迹分析。将细胞维持在完全培养基中或在HBSS培养基(饥饿)中孵育6 有无20时为h nM巴非霉素A1(Baf.A1)。HCT116细胞系对营养限制(饥饿)表现出最强的自噬反应,因此被选为研究醋酸盐对饥饿诱导自噬的影响。(c(c))使用Quantity One软件(Bio-Rad制造商)测定HCT116、RKO和HCT-15细胞的LC3-II/肌动蛋白比率。(d日)通过减去Baf存在时的标准化LC3-II水平来确定自噬通量。在没有Baf的情况下获得的相应水平的A1。答:(e(电子))LC3-I/II和(克)暴露于醋酸盐的HCT116细胞中的Beclin-1和Atg5。细胞未经处理(空白)或用100、150或200处理 42 mM醋酸盐 h.然后,将细胞保存在完整培养基或HBSS培养基(饥饿)中,再加上醋酸盐6次 h存在或不存在20 毫巴。A1.这些数据表明,醋酸盐以剂量依赖性的方式降低CRC细胞的自噬流量,如LC3-II向溶酶体的递送以及Beclin-1和Atg5蛋白水平的降低所示。((f))使用Quantity One软件(Bio-Read制造商)测定HCT116细胞的LC3-II/actin比率。肌动蛋白被用作加载控制。数值为平均值±S。三个独立实验的E.M。典型的免疫印迹如所示(一,b条,e(电子)和克). Bonferroni测试后的单向方差分析,##P(P)≤0.01和###P(P)与HBSS(饥饿培养基)处理的对照细胞相比≤0.001