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图9

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Parkin的致病突变破坏了Parkin向线粒体的募集和/或Parkin诱导的有丝分裂。

(A) 用含有指示突变的YFP-Parkin(白色和绿色)转染HeLa细胞,并用CCCP处理1 h。用抗Tom20抗体(红色)标记线粒体。底部行中的图像是由中间行中的框指示的区域的展开。WT,野生型。(B) 在三个或更多独立实验中,(A)中YFP-Parkin和线粒体之间的克隆化得分≥150个细胞/条件。(C) HeLa细胞按照(A)进行转染和处理,并分为核后上清液(PNS)、富含线粒体的重膜部分(HMF)和上清液。部分在SDS凝胶上运行,并对Parkin和VDAC进行免疫印迹。(D和E)HeLa细胞如(A)中所述转染并用CCCP或DMSO处理24小时。(E) WT、R42P和R275W Parkin(绿色)的图像与(A)中一样染色。星号(*)表示工程突变;所有其他疾病都与帕金森病有关。所有图像中的比例尺代表10µm。(B和D)中的误差线表示标准偏差。

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