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图8

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致病性PINK1突变体无法重建Parkin募集到去极化线粒体。

(A) PINK1的主要MEF−/−用YFP-Parkin(绿色)和指示的V5标记的PINK1构建体以1∶4的比例共转染的小鼠在血清中用DMSO或20µM CCCP处理3小时。用抗Tom20抗体(红色)染色线粒体。图像中的比例尺表示10µm。中间行和底部行中的图像是由顶部行中的框指示的图像的展开。(B) 在三个或多个独立实验中,对(A)中YFP-Parkin和线粒体之间的克隆化进行了评分,每种条件下的细胞数超过150个。误差线表示标准偏差。(C) 将稳定表达YFP-Parkin的HeLa细胞转染到指定的V5标记结构,在无血清培养基中用二甲基亚砜或2µM CCCP处理3 h,然后分馏。富含线粒体的膜部分在SDS凝胶上运行,并对PINK1、V5标签和线粒体蛋白VDAC进行免疫印迹。

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