概述
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产品名称 -
亲本细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子2插入1 bp,外显基因2缺失2 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC),Sanger测序 -
经测试应用 -
生物安全水平 2 -
规则说明 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供能够在复活时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 坚持者 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 通过I型干扰素(IFN-α和IFN-β)调节信号传导的转录调节因子。 在I型IFN与细胞表面受体结合后,Jak激酶(TYK2和JAK1)被激活,导致STAT1和STAT2的酪氨酸磷酸化。 磷酸化的STAT二聚化,与IRF9/ISGF3G结合形成一种称为ISGF3转录因子的复合物,进入细胞核。 ISGF3与干扰素刺激反应元件(ISRE)结合,激活干扰素激发基因的转录,从而使细胞处于抗病毒状态。 -
序列相似性 属于IRF家族。 包含1个IRF色氨酸五重复DNA结合域。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 通过IFN-α/β激活后转移到细胞核中。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物
应用
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图片
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所有车道: 抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[EPR24260-55]( 约271043 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa处理的干扰素α1(hIFN-a1)(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物 车道2: IRF9敲除HeLa处理的:hIFN-a1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa控制干扰素α1(hIFN-a1)(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物 车道4: IRF9敲除HeLa载体对照:hIFN-a1(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物 车道5: THP-1细胞裂解物 车道6: ACHN细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 44千帕 观察到的频带大小: 48千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[EPR24260-55]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约271043 显示与干扰素调节因子9/IRF-9特异性结合。 在处理过的野生型HeLa细胞裂解液中在48 kDa处观察到一条带,在IRF9敲除细胞系ab266051(敲除细胞裂解液 约258472 ). 在48kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表干扰素调节因子9/IRF-9的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成此图像,分析了野生型和IRF9敲除HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
约271043 干扰素调节因子9在野生型HeLa细胞和IRF9敲除HeLa的细胞中的染色( 约48750 )10 ng/ml,持续16小时。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约271043 浓度为0.4μg/ml 约7291 (小鼠对α-微管蛋白的单克隆抗体),在4°C下稀释1/1000过夜,然后在室温下与山羊对兔IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[14HCLC]( ab277803型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HeLa处理的hIFN-a1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物 车道2: IRF9敲除HeLa处理的hIFN-a1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物 3号车道: 野生型HeLa载体控制hIFN-a1(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物 车道4: IRF9敲除HeLa载体对照hIFN-a1(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 44千帕 观察到的频带大小: 48千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[14HCLC]以2µg/ml染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab277803型 显示与干扰素调节因子9/IRF-9特异性结合。 在处理过的野生型HeLa细胞裂解液中在48 kDa处观察到一条带,在IRF9敲除细胞系ab266051(敲除细胞裂解液 约258472 ). 在48kDa以下的敲除裂解物泳道中观察到的条带可能代表干扰素调节因子9/IRF-9的截短形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析野生型和IRF9敲除的HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
等位基因-1:1 bp插入外显子2 -
所有车道: 稀释1/1000的抗IRF9抗体 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: IRF9敲除HeLa细胞裂解物 3号车道: THP-1细胞裂解物 车道4: ACHN细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 44千帕 观察到的频带大小: 48千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-4: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在48 kDa时观察到抗IRF9抗体。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 western blot显示抗IRF9抗体与野生型HeLa细胞中的IRF-9反应。 IRF9敲除细胞系ab266051(IRF9基因敲除细胞裂解物 约258472 )低于48 kDa可能代表截断形式和劈开碎片。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 对HeLa野生型和IRF9敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )与抗IRF9抗体孵育前 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )在成像前在室温下以1/2000稀释1小时的二次抗体。 -
等位基因2:外显子2缺失2 bp。
数据表及文件
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