(美国)
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子5中1 bp插入 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
试验 -
生物安全水平 2 -
常规说明 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,野生型细胞系不会自动包含在敲除细胞系订单中,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1添加推荐的野生型细胞系,无需额外费用。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,在适当的细胞培养瓶中以2x10的密度播种细胞 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.将培养物在37°C培养箱中与5%CO一起培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
该产品受布罗德研究所、ERS基因组学有限公司和Sigma Aldrich有限责任公司的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 作为细胞表面受体,在神经元表面发挥与轴突生长、神经元粘附和轴突生成相关的生理功能。 通过蛋白质-蛋白质相互作用参与细胞迁移和转录调节。 可通过与APBB1-KAT5结合促进转录激活,并通过与Numb的相互作用抑制Notch信号。 成对的凋亡诱导途径,如G(O)和JIP介导的途径。 抑制G(o)α-ATP酶活性(通过相似性)。 作为驱动蛋白I膜受体,介导β-分泌酶和早老蛋白1的轴突运输。 通过铜离子还原参与铜稳态/氧化应激。 在体外,铜金属APP直接或通过Cu(2+)介导的低密度脂蛋白氧化增强诱导神经元死亡。 可通过与细胞外基质成分(如肝素、I型胶原和IV型胶原)的结合调节神经突起的生长。含有BPTI结构域的剪接亚型具有蛋白酶抑制剂活性。 诱导AGER依赖性通路,该通路涉及p38 MAPK的激活,导致淀粉样β肽的内化,并导致培养皮层神经元的线粒体功能障碍。 为GPC1提供铜(2+)离子,这是释放一氧化氮(NO)和随后降解GPC1上硫酸乙酰肝素链所必需的。 β-淀粉样肽是具有金属还原活性的亲脂金属螯合物。 结合铜、锌和铁等瞬态金属。 在体外,可将Cu(2+)和Fe(3+)分别还原为Cu(+)和Fe2+。 β-淀粉样蛋白42是一种比β-淀粉状蛋白40更有效的还原剂。 β-淀粉样蛋白肽与CSF中的脂蛋白和载脂蛋白E和J结合,并与血浆中的高密度脂蛋白颗粒结合,抑制金属催化的脂蛋白氧化。 β-APP42可能激活大脑中的单核吞噬细胞并引发炎症反应。 促进τ聚集和TPK II介导的磷酸化。 与过度表达的HADH2相互作用导致氧化应激和神经毒性。 还可在脂筏中结合GPC1。 Appicans引起神经细胞与细胞外基质的粘附,并可能调节大脑中神经突起的生长。 γ-CTF肽以及半胱氨酸天冬氨酸酶裂解肽,包括C31,是神经元凋亡的有效增强剂。 N-APP结合TNFRSF21,触发caspase激活和神经元细胞体(通过caspase-3)和轴突(通过caspase-6)的退化。 -
组织特异性 在所有检查的胎儿组织中表达,在大脑、肾脏、心脏和脾脏中含量最高。 肝脏中弱表达。 在成人大脑中,在皮层的额叶和前外侧皮质-视皮层中表达最高。在小脑皮层、后外侧皮质-脑皮层和颞叶相关皮层中表达中等。 纹状体皮质、纹状体外皮质和运动皮质表达较弱。 在脑脊液和血浆中表达。 APP695亚型是神经元组织中的主要形式,APP751亚型和APP770亚型在非神经元细胞中广泛表达。 同种型APP751是T淋巴细胞中最丰富的形式。 Appican在星形胶质细胞中表达。 -
附属公司 阿尔茨海默病1 脑淀粉样血管病,APP-相关 -
序列相似性 属于APP系列。 包含1个BPTI/Kunitz抑制剂域。 -
结构域 基底外侧分选信号(BaSS)是将膜蛋白分选到上皮细胞基底外侧表面所必需的。 在许多酪氨酸磷酸化蛋白中发现的NPXY序列基序是PID结构域特异性结合所必需的。 然而,NPXY基序的N端或C端的额外氨基酸通常是完全相互作用所必需的。 结合APP的PID结构域蛋白需要YENPTY基序才能进行完全的相互作用。 这些相互作用与末端酪氨酸残基的磷酸化无关。 NPXY位点也参与了氯氰菊酯介导的内吞作用。 -
翻译后修饰 在正常细胞条件下进行蛋白质水解处理。 α-分泌酶、β-分泌酶或θ-分泌酶的裂解导致可溶性APP肽S-APP-α和S-APP-β的生成和胞外释放,并保留相应的膜锚定C末端片段C80、C83和C99。 γ-分泌酶对C80和C83的后续处理产生P3肽。 这是主要的分泌途径,并且是非淀粉样变性的。 或者,早老素/尼卡司汀介导的C99的γ分泌酶处理释放淀粉样β蛋白,淀粉样β40(Abeta40)和淀粉样β42(Abeta42),淀粉样斑块的主要成分,以及细胞毒性C末端片段,γ-CTF(50)、γ-CTF(57)和γ-CTF(59)。 在脑脊液(CSF)中发现了许多其他次要的β淀粉样肽,即β淀粉样1-X肽,包括β淀粉样X-15肽,这些肽由α分泌酶裂解产生,均终止于Gln-686。 神经元凋亡过程中被半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶裂解。 通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-6、-8或-9在Asp-739处裂解,产生神经毒性C31肽,并增加β-淀粉样肽的产生。 N-和O-糖基化。 Ser和Thr残基与核心1或可能的核心8聚糖的O-糖基化。 部分酪氨酸糖基化(Tyr-681)存在于一些较小的短β淀粉样肽(β淀粉样1-15、1-16、1-17、1-18、1-19和1-20)上,但在β淀粉样38、β淀粉样40和β淀粉样42上均未发现。 酪氨酸修饰不常见,在AD患者中更常见。 聚糖具有Neu5AcHex(Neu5Ac)HexNAc-O-Tyr、Neu5AacNeu5AacHex(Neu5Ac,Neu5Ac-O-Ty)HexNAc-O-Try和O-AcNeu5Ac/Neu5Ac:Hex(Nou5Ac(Neu3Ac)Hex NAc-O-Tyr结构,其中O-Ac是Neu5Ac.的O-乙酰化。 Neu5AcNeu5Ac很可能与Neu5Aic 2,8Neu5Ac-相连。 裂解位点附近的O-糖基化可能影响蛋白水解过程。 Appicans是含有O-连接硫酸软骨素的L-APP亚型。 酪氨酸、苏氨酸和丝氨酸残基上C末端的磷酸化是神经元特异性的。 磷酸化可以影响APP处理、神经元分化以及与其他蛋白质的相互作用。 通过Cdc5激酶和Mapk10对神经元细胞中的Thr-743进行磷酸化,通过Cdc2激酶以细胞周期依赖的方式分裂细胞,在G2/M期和体外通过GSK-3-beta达到最大水平。 Thr-743磷酸化形式引起构象变化,减少Fe65家族成员的结合。 SHC结合需要Tyr-757上的磷酸化。 可溶性和膜结合APP上的酪蛋白激酶在细胞外区域磷酸化。 这种磷酸化被肝素抑制。 细胞外结合和铜的还原导致Cys-144和Cys-158相应的氧化,并形成二硫键。 在体外,APP-Cu(+)复合物在过氧化氢存在下导致含有β淀粉样蛋白的肽的产生增加。 Trophic因子剥夺触发β-分泌酶对表面APP的裂解,释放sAPP-beta,sAPP-bet被进一步裂解,释放APP的N末端片段(N-APP)。 β-淀粉样肽被IDE降解。 -
细胞定位 膜。 膜,氯氰菊酯涂层坑。 细胞表面蛋白质通过网格蛋白包被的凹坑迅速内化。 在成熟过程中,未成熟APP(内质网中的N-糖基化)移动到高尔基复合体,在那里发生完全成熟(O-糖基化和硫酸化)。 在α-分泌酶裂解后,可溶性APP被释放到细胞外空间,C末端内化到内体和溶酶体。 一些APP积聚在分泌运输小泡中,离开晚期高尔基体室并返回细胞表面。 γ-CTF(59)肽位于神经元的细胞质和细胞核。 它可以通过与APBB1(Fe65)结合转移到细胞核。 Beta-APP42在细胞表面与FRPL1结合,然后复合物被迅速内化。 APP在上皮细胞的基底外侧表面分类。 在神经元分化过程中,Thr-743磷酸化形式主要位于生长锥中,中度位于神经突中,少量位于细胞体中。 酪蛋白激酶磷酸化可以发生在细胞表面或高尔基体后室。 与核周隔室中的GPC1相关。 在细胞质和核周区域以水泡状模式与SORL1结肠癌。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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KO细胞裂解物 -
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应用
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车道1-2: 抗A多倍体前体蛋白抗体[DE2B4]( 约12266 )稀释1/500 3-4车道: 抗A多倍体前体蛋白抗体[DE2B4]( 约12266 ) 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: SH-SY5Y细胞裂解液 3号车道: 野生型HEK-293T细胞裂解物 车道4: APP敲除HEK-293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( 约216772 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 86千帕 观察到的频带大小: 37千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 车道1-4: 绿色信号。 绿色- 约12266 在110 kDa下观察到。 5-8车道: 红色信号。 红色-装载控制, 约181602 在37 kDa时观察到。 约12266 在野生型HEK-293T细胞中显示与淀粉样前体蛋白反应。 敲除细胞系ab255362(敲除细胞裂解物 ab263777型 )已使用。 对野生型和淀粉样前体蛋白敲除样品进行SDS-PAGE。 ab12266年 和抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负荷控制( 约181602 )分别在4°C、1/500稀释度和1/20000稀释度下培养过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( 约216772 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约32136 野生型HEK293细胞中淀粉样前体蛋白染色(顶面板)和APP敲除的HEK292细胞(ab255362)(底面板)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约32136 稀释1/500 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
纯合子:第5外显子插入1 bp
数据表及文件
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