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.2013年9月10日；6（292）:ra81。
doi:10.1126/scisional.2004324。

Ajuba家族蛋白连接JNK和Hippo信号

孙公平 1, 肯尼思·迪尔文
附属公司

Ajuba家族蛋白连接JNK和Hippo信号

孙公平等。 科学信号. .

摘要

创伤、细胞凋亡或感染可以触发邻近细胞的增殖反应，以取代受损组织。对果蝇的研究表明，c-Jun氨基末端激酶（JNK）依赖约克（Yki）的激活对再生相关生长以及肿瘤相关生长至关重要。Yki是一种转录辅激活因子，被Hippo信号抑制，Hippo是一种调节生长的保守途径。我们确定了JNK调节Hippo信号的保守机制。对果蝇的遗传学研究确定Jub（也称为Ajuba LIM蛋白）是JNK介导的Yki激活所需的，并表明Jub有助于受伤后的翅膀再生和肿瘤生长。生化研究表明，JNK促进果蝇和哺乳动物细胞中Ajuba家族蛋白的磷酸化。哺乳动物细胞中的结合研究表明，JNK增加了Ajuba家族蛋白LIMD1或WTIP与LATS1之间的结合，LATS1是Hippo通路中抑制Yki同源物YAP的激酶。此外，JNK通过LIMD1的直接磷酸化促进LIMD1和LATS1的结合。这些结果确定Ajuba家族蛋白是JNK和Hippo信号传导之间的保守链接，并暗示JNK通过促进Ajuba蛋白与Warts和LATS的结合来增加Yki和YAP活性。

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利益冲突声明

竞争利益：作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1。Yki的Jnk激活果蝇属翼盘需要Jub
A） 简化的示意图果蝇属Hpo途径。暗阴影表示抑制Yki活性的蛋白质，光阴影表示促进Yki活动的蛋白质。B–J）机翼圆盘染色不含lacZ（洋红色）或Yki（红色）和DNA（Hoechst，蓝色）销售PE-Gal4由中的表达式标识的表达式域UAS-GFP公司（绿色）。每个面板的右侧显示了从污渍到左侧的单个通道。白色虚线勾勒出销售PE-Gal4表达域。箭头指向核Yki的例子。光盘是由带有Dronc公司I29号突变，销售PE-Gal4和UAS-GFP公司转基因和B）对照，C）不含lacZ，D）UAS-hep公司。加利福尼亚州，E）不包括lacZ UAS-hep。加利福尼亚州，F）UAS-hep公司。CA无人机RNAi jun，G）UAS-hep公司。加州UAS-RNAi-Rassf，H）UAS-hep公司。CA UAS-RNAi-zyx公司，I）UAS-hep公司。CA UAS-RNAi-jub公司，J）不包括lacZ UAS-hep。CA UAS-RNAi-jub公司图像代表每个基因型至少8只动物。
图2
图2。需要Jub果蝇属翅膀再生和翼盘肿瘤生长lgl公司击倒
A） 成虫翅膀大小的分布rn-Gal4 UAS-egr管Gal80ts秒（N=78）或rn-Gal4 UAS-egr管Gal80ts秒小柱E1级/+幼虫翅膀消融和恢复后的苍蝇（N=105）。B–F）具有代表性的机翼，具有100%（B）、70%（C）、50%（D）、30%（E）和10%（F）的野生型尺寸。G） 量化所示基因型前后室中ex-lacZ表达的平均强度比率（N=3个基因型椎间盘）。H） 量化所示基因型的前后室面积比率（N=3个椎间盘/基因型）。误差条表示标准误差，显示小于0.05的P值。I–L）机翼圆盘染色外拉茨（β-gal，洋红），后部以表达en-Gal4无人机-GFP（绿色）。每个面板的右侧部分显示不含lacZ只在图像左边着色。光盘是由带有前lacZ,en-Gal4（英语）和UAS-GFP公司转基因和I）UAS-lglRNAi，J）UAS-lglRNAi UAS-bskRNAi，K）UAS-lglRNAi UAS-myc:重量，L）UAS-lglRNAi UAS-jubRNAi.
图3
图3。JNK抑制哺乳动物细胞中的Hippo通路并增强LIMD1和WTIP与LATS1的结合
A） 用二甲基亚砜（对照，以−表示）、SP600125和/或茴香霉素（以+表示）处理的MCF10A细胞裂解液上的蛋白质印迹，使用所示抗血清进行印迹。TUB是一种装载控制装置。直方图显示了三个生物复制品的pYAP相对于YAP比率的定量，并将其归一化为模拟处理细胞中的比率。B） 定量CTGF公司用二甲基亚砜（−）、SP600125和/或茴香霉素（+）处理MCF10A细胞，通过RT-PCR检测mRNA丰度（N=3个生物重复）。GAPDH被用作内部控制。CTGF与GAPDH的比值被归一化为模拟处理细胞的比值。C） 用二甲基亚砜（−）、SP600125和/或茴香霉素（+）处理的MCF10A细胞裂解液上的蛋白质印迹，使用指示的抗血清进行印迹。TUB是一种装载控制装置。直方图显示了三个生物复制品中pLATS1相对于LATS1比率的定量，并将其归一化为模拟处理细胞中的比率。如图所示，在存在或不存在表达活化JNK2的质粒的情况下，从共转染Myc:LATS1和Ajuba:V5（D）、WTIP:V 5（E）或LIMD1:V 5（F）的HEK293细胞进行D–F）共免疫沉淀实验。标记为“输入”的印迹显示了细胞裂解液中指示蛋白质的相对数量。标记为“IPV5”的印迹显示抗V5珠沉淀的蛋白质的相对数量。直方图显示了来自三个生物复制品的LATS1/Ajuba家族蛋白质的平均比率，并将其标准化为对照组的比率。G） 用茴香霉素处理或不处理MCF10A细胞的共免疫沉淀实验。标记为“Input”的斑点显示细胞裂解物中内源性LATS1和LIMD1的相对量。标记为“IP LATS1”的印迹显示与抗LATS1免疫沉淀蛋白的相对数量。直方图显示了三个生物复制品LIMD1/LATS1的平均比率，并将其归一化为对照组的比率。H） 体外结合实验比较JNK2激活对LATS1和LIMD1的影响。抗V5珠子斑点显示珠子上的LIMD1或GFP（对照）数量，co-IP显示这些珠子沉淀的Myc:LATS1数量。LIMD1裂解产物显示用于纯化V5珠的裂解产物中LIMD1:V5和JNK2融合蛋白的相对数量，LATS1裂解产物表明添加到珠的裂解物中Myc:LATS1和JNK融合蛋白。直方图显示了三个生物复制品LATS1/LIMD1的平均比率，并将其归一化为对照组的比率。在所有直方图中，误差条表示标准误差，并显示小于0.05的P值。
图4
图4。JNK诱导Ajuba家族蛋白磷酸化以增加与LATS1的结合
A） 用Ajuba:V5、LIMD1:V5或WTIP:V5以及如所示的MKK7B2:FLAG:JNK1a1（活化的JNK1）、MKK7B2:FLAG:JNK1a1（APF）（非活化的JNK1）或MKK7B2:FLAG:JNK2a2（活化的JNK2）共转染的HEK293细胞裂解物上的蛋白质印迹。转染JNK结构的表达如Flag blots所示。对于每个Ajuba家族蛋白，上部印迹显示标准凝胶，下部印迹显示Phos-tag凝胶。印迹是3个生物复制品的代表。B） 活性JNK2体外磷酸化LIMD1后LIMD1与LATS1的体外结合。上部印迹显示珠子上LIMD1的数量，下部印迹显示Myc:LATS1与珠子结合。直方图显示了三个生物复制品的平均LATS1/LIMD1比率，并将其归一化为无JNK2磷酸化的比率。C） 比较野生型LIMD1和LIMD1的体外结合试验2SA型与LATS1结合的突变体。抗-V5珠印迹显示LIMD1、LIMD12SA型或珠上的GFP（对照）蛋白。Co-IP显示Myc:LATS1与野生型或突变型LIMD1结合。组成活性JNK2的表达如LIMD1裂解物印迹所示。直方图显示了三个生物复制品的平均LATS1/LIMD1比率，并将其归一化为野生型LIMD1对照的比率。B、C中的误差条显示标准误差。指示P值小于0.05。D） 说明JNK对河马信号传导的影响的模型，活性蛋白用黑色表示，P表示磷酸化。在没有JNK激活的情况下，MST（Hpo）、MOB（Mats）和WW45（Sav）可以激活LATS（Wts），然后通过磷酸化抑制YAP（Yki）。当JNK处于激活状态时，它促进Ajuba家族蛋白（LIMD1、WTIP或Jub）的磷酸化，然后与LATS更紧密地结合。这种结合可能通过阻断磷酸化位点或通过抑制WW45或MOB的结合来抑制LATS磷酸化和随后的LATS激活。E） 说明JNK增强LATS结合导致Ajuba家族蛋白的拟议构象变化的模型。如果没有JNK激活，Ajuba家族蛋白将保持“封闭”状态，LATS无法访问（左）。当JNK被激活时，Ajuba家族蛋白的N末端被磷酸化，导致C末端暴露于LATS（右）。
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中的注释

  • 细胞信号：连接JNK和河马信号。
    杜托伊特A。 杜托伊特A。 Nat Rev Mol细胞生物学。2013年11月；14(11):690. doi:10.1038/nrm3677。Epub 2013年9月25日。 Nat Rev Mol细胞生物学。2013 PMID：24064539 没有可用的摘要。

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