性能数据
T型模板S公司开关功能
图1。 介绍模板切换RT酶的原理。使用寡核苷酸（dT）VN引物合成第一链cDNA。当到达RNA模板的5′端时，利用逆转录酶的末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）活性将一些非模板核苷酸添加到cDNA的3′端（模板切换）。cDNA的第二链是使用模板开关寡核苷酸合成的。最后，利用反向基因特异性引物和正向模板切换寡核苷酸（TSO）特异性引子进行PCR扩增，获得全长cDNA产物。
模板切换合成的高效性
图2。使用TSO引物进行AccelerRT®5G模板切换逆转录反应，然后使用TSO底物的5'末端部分和基因特异性引物（A）进行PCR扩增。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳（B），并通过产物密度值和产物长度计算模板切换效率（表）。 
图3。模板切换AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物的合成效率。使用TSO引物进行5G模板切换逆转录反应，然后使用TSO底物的5'末端部分和基因特异性引物进行PCR扩增。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。使用SuperScript IV RTase（Thermo Fisher#18090050）进行比较。
B类道路热稳定性
图4。AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物的广泛热稳定性。使用AccelerRT®5G模板切换逆转录酶在42℃至60℃的不同温度下逆转录1ng Hela总RNA。使用BlazeTaq™SYBR®Green qPCR mix 2.0（Cat.#QP031）扩增GAPDH和B2M cDNA。
卓越的RNA模板敏感性
图5。使用AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物，从Hela细胞中100 ng到1 pg的总RNA中生成第一链cDNA。合成的cDNA用作使用BlazeTaq™SYBR®Green qPCR mix 2.0（Cat.#QP031）进行qPCR的模板。
高效的反转录
图6。使用1ng Hela总RNA逆转录10分钟、15分钟、30分钟和60分钟，证明AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物的RT效率。使用BlazeTaq™SYBR®Green qPCR mix 2.0（Cat.#QP031）扩增GAPDH和B2M cDNA。
在存在多种抑制剂的情况下表现一致
图7。将各种抑制剂添加到总HeLa RNA中，然后使用AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物进行反转录反应。合成的cDNA用作后续qPCR的模板，使用BlazeTaq™SYBR®Green qPCR混合物2.0（类别号QP031）。
cDNA合成的有效扩增
图8。使用来自Hela细胞的总RNA与AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物进行反转录反应。合成的cDNA被用作后续PCR的模板，使用UltraHiPF®DNA聚合酶试剂盒（类别号PC018）。
融合基因的发现和检测
图9. 使用来自H2228细胞的总RNA与AccelerRT®5G模板切换RT酶混合物进行反转录反应。合成的cDNA作为模板用于后续PCR，使用TSO引物的5'末端部分和基因特异性引物ALK基因（a）。图A中的扩增产物通过使用EML4正向引物和ALK反向引物进行扩增来验证（B）。
*GeneCopoeia，Inc.拥有IP保护和AccelerRT®5G商标。
