常见问题解答
常见问题解答：shRNA克隆集
答案：你只需要去shRNA克隆搜索页面，搜索你的基因，然后选择适合你的系统的克隆。如果您有任何自定义要求，则需要联系我们在确定您需要什么后，我们将向您发送自定义报价。
答案：GeneCopoeia提供了一组包含3个单独的shRNA结构和一个加扰控制。每个克隆以5µg纯化质粒的形式提供。包含每个克隆、载体和限制性内切酶位点信息的数据表可用于在我们的网站上下载。您需要GeneCopoeia帐户、销售订单号和目录号才能下载数据表。
答案：GeneCopoeia保证表达盒中的shRNA序列与目标基因相同。如果根据qRT-PCR，这三种结构都没有产生70%或更高的敲除效率，并且效率低下是由我们的结构设计中的缺陷造成的，那么我们将免费提供另一组针对特定基因的三个新克隆。
答案：我们提供两种促销方式，以便客户可以根据自己的喜好进行选择。然而，U6是更强的启动子，因为它越强，就越有可能导致非靶向效应或细胞毒性。在大多数情况下，任何一个启动子都可以使用，然而，每个启动子都有组织和细胞的特异性。我们建议进行文献检索，看看其他研究人员对您正在使用的特定细胞使用了什么。
答案：是的，建议使用Stbl3。
答案：当转染效率大于80%时，应测量击倒效率。载体中的报告基因用于监测转染效率。或者，如果你的细胞系转染效率低，你可以订购克隆的慢病毒版本，并用慢病毒转染你的细胞。可以从转染细胞中获取RNA，并用于定量RT-PCR，以评估基因表达的减少。与qPCR相比，推荐使用Western blot来评估shRNA结构的沉默效果。必须将用打乱的对照克隆转染的细胞的基因表达水平与shRNA转染的样品进行比较。
答案：影响转染效率的因素包括：1）质粒DNA的质量；2） 细胞状况；3） 转染试剂和质粒的质量、条件或年龄；4） 转染时的细胞密度；和5）细胞与DNA/转染试剂复合体的接触时间。
答案：扰码控制克隆是通过将扰码序列（与任何基因组序列都不匹配的序列）克隆到shRNA载体中来构建的。它用作阴性对照，以消除质粒表达诱导的潜在非特异性效应。
答案：我们强烈建议对每批细胞进行杀伤曲线测定，以确定最佳嘌呤霉素浓度。
