产品信息
GeneCopoeia的IndelCheck™CRISPR插入或删除（indel）检测系统为您的基因组编辑应用程序提供了强大的帮助。IndelCheck™系统可用于：
- CRISPR sgRNA功能验证(图1)在进行长期基因组编辑项目之前（基因组编辑细胞系为3-6个月，基因组编辑小鼠系为6-9个月），通过消除切割效率低的CRISPR sgRNAs，为您节省了大量时间和精力。
- 筛选细胞克隆用于淘汰（KO）和淘汰（KI）修改(图2).
优势
- 完成系统以简化CRISPR验证和编辑克隆筛选
- 靶位点PCR的稳健扩增。无需基因组DNA分离
- 优化条件和阳性对照的易于使用的T7核酸内切酶I检测
订单信息
订单信息
IndelCheck™系统由以下主要组件组成：
- 靶点PCR试剂盒V2.0。用于在不分离基因组DNA的情况下从细胞裂解物中扩增靶基因组区域。现在的2.0版中，目标位点PCR试剂盒是一种含有缓冲液、SuperHeRo™DNA聚合酶和核苷酸的混合物，以方便使用。
- T7核酸内切酶I检测试剂盒。用于检测靶点附近CRISPR诱导的indel突变。
- Smart-Join™Blunt-end PCR克隆工具。用于克隆PCR产物，用于CRISPR介导的基因组修饰的测序和鉴定。
技术概述
技术概述
应用1:CRISPR sgRNA功能验证
图1。使用IndelCheck™系统进行CRISPR功能验证。批量采集转染CRISPR质粒的细胞，然后使用靶位点PCR试剂盒在靶位点两侧的引物生成PCR产物（1）。PCR产物变性，然后重新退火，导致出现大量双链片段，其中一些包含错配。这些不匹配可通过T7内切酶I检测试剂盒（2）检测到。如果CRISPR在细胞中是活性的，那么在琼脂糖凝胶上可以看到裂解产物。
应用2：筛选CRISPR介导的基因组修饰
图2。使用IndelCheck™系统筛选携带所需CRISPR介导的基因组修饰的细胞克隆。将用CRISPR质粒转染的细胞接种单个克隆，然后用靶位点PCR试剂盒使用靶位点侧翼的引物对PCR产物进行扩增（1）。在用于鉴定NHEJ介导的敲除物的方案A（左）中，使用T7核酸内切酶I检测试剂盒（2）对PCR产物进行indels筛选。然后使用Smart-Join™Blunt-end PCR克隆试剂盒（3）将阳性PCR产物克隆到质粒载体中，并对其进行测序以确认是否存在突变。在方案B中，为了识别任何敲除或敲除修饰，使用靶点PCR克隆试剂盒（3）将PCR产物直接克隆到质粒载体中，并测序以检测是否存在突变。
产品详细信息
产品详细信息
使用IndelCheck™靶位PCR试剂盒、T7核酸内切酶I检测试剂盒和靶位PCR克隆试剂盒组合的典型验证结果图：
图3。经Cas9-sgRNA修饰的基因组扩增子的T7内切酶I消化。控制细胞（-）应该只有一个对应于未切割扩增子的单一带。用活性Cas9-sgRNA转染样本细胞（+）的扩增子产生3条带：1条未修饰的+2条预测大小的裂解产物。
图4。Smart-Join™Blunt-end PCR克隆试剂盒性能比较。将不同长度的PCR产物进行连接反应，转化到琼脂平板上，检测菌落总数和阳性连接率。结果表明，Smart-Join™Blunt-end PCR克隆试剂盒（GeneCopoeia，分类号IC007）的连接效率与Zero Blunt™PCR克隆试剂箱（Thermo Fisher，分类号K275020）相当。
图5。使用Smart-Join™Blunt-end PCR克隆试剂盒对来自多组对照插入物的结扎产物进行琼脂糖凝胶电泳。
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验证服务
GeneCopoeia还提供使用IndelCheck™CRISPR插入和删除检测系统的CRISRP验证服务。我们可以使用HEK293细胞（人类）、NIH3T3细胞（小鼠）或您的特定细胞系验证您从我们处购买的CRISPR。请联系我们inquiry@genecopoeia.com或301-762-0888。
CRISPR服务
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