图1。 使用来自试管或96孔板的细胞裂解物的一步RT-qPCR的灵敏度。 答：。使用GeneCopoeia、Ambion或Bio-Rad的裂解缓冲液裂解HCT116细胞的细胞裂解液对GAPDH基因进行一步RT-qPCR分析。将5µl不同浓度（5至5000个细胞/µl）的悬浮细胞与裂解缓冲液混合，并按照每个制造商的用户手册进行处理。在每个一步RT-qPCR反应中使用2µl细胞裂解液（估计相当于1-1000个细胞/反应）。BH1299细胞接种在96孔板中，梯度为250至5000个细胞/孔。培养96小时后，根据初始播种密度，估计每个孔的最终细胞数约为2500至50000个细胞。将每个孔中的细胞与50µl裂解缓冲液和DNase I混合，并按照用户手册进行处理。一步RT-qPCR反应使用2µl细胞裂解液（估计相当于10-200个细胞/反应）。

图2。使用总RNA或CytoCt的基因表达的一步RT-qPCR™缓冲液中的lysed-cell裂解物来自相同数量的细胞。每个反应大约有1500个细胞当量。答：。来自HCT116细胞的42个基因。B。来自H1299细胞的37个基因。

图3。基因表达的一步RT-qPCR，使用来自相同数量细胞的细胞裂解物，用GeneCopoeia或BioRad裂解缓冲液裂解。每个反应大约有1500个细胞当量。答：。HCT116细胞裂解物中的43个基因。B。来自H1299细胞裂解物的37个基因。

图4。在96 well板中使用细胞裂解物进行RT-qPCR检测。每孔接种3000–5000个HEK293细胞，置于96 well板中，培养至70%至90%汇合。细胞要么用GeneCopoeia和Bio-Rad的裂解缓冲液进行裂解，要么提取RNA。使用少量细胞裂解物（估计相当于200个细胞/反应）进行一步RT-qPCR反应，以检测8个基因的表达。