PD-1/L1靶向sgRNA慢病毒颗粒| GeneCopoeia™

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用于PD-1的sgRNA慢病毒颗粒

猫#	品名	基因	目标外显子	价格
LP609-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子1	$795
LP610-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子1	$795
LP611-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子1	$795
LP612-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子2	$795
LP613-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子2	$795
LP614-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子2	$795
LP615-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子2	$795
LP616-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子3	$795
第617-050页	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子3	$795
LP618-050	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子3	$795
LP619-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子4	$795
第620-050页	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子5	$795
LP621-050型	PD-1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	产品开发-1	外显子5	$795

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用于PD-L1的sgRNA慢病毒颗粒

猫#	品名	基因	目标外显子	价格
LP622-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子1	$795
LP623-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子2	$795
LP624-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子3	$795
LP625-050型	PD-L1靶向sgRNA纯化的Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子3	$795
LP626-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子3	$795
LP627-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子4	$795
LP628-050型	PD-L1-靶向sgRNA纯化Lentifect™慢病毒颗粒（50μl x 1小瓶，>10⁸时间单位/毫升）	PD-L1型	外显子5	$795

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产品详细信息现成的纯化慢病毒颗粒，与Cas9核酸酶克隆,Cas9慢病毒颗粒,Cas9稳定细胞系或预制标记癌细胞系用于在多种细胞类型中有效敲除人PD-1、PD-L1基因，包括难以转染的细胞、原代细胞、干细胞和非分裂细胞以及体内用于转基因动物。靶向PD-1或PD-L1的sgRNA由U6启动子驱动。慢病毒基因组中有一个mCherry报告基因和一个嘌呤霉素选择标记，如图1所示。慢病毒颗粒的转导可通过mCherry蛋白使用荧光显微镜观察，如图2所示。纯化的慢病毒颗粒提供在3×10以上⁸时间单位/毫升。 sgRNA慢病毒基因组

图1。携带慢病毒基因组的sgRNA。

图2。用携带sgRNA和mCherry报告基因的慢病毒颗粒转染HEK293细胞的荧光显微镜图像。A.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-1的HEK293细胞。B.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-L1转染HEK293细胞。

使用以下方法验证PD-1和PD-L1的目标识别和裂解索引检查^TM公司T7核酸内切酶I分析如图3所示。

图3。通过T7内切酶I（T7EI）分析验证靶裂解。用PD-1进行T7EI检测。然后用T7E1检测PCR中631 bp的PD-1基因片段。T7E1裂解产生两条额外的带：一条515 bp，另一条116 bp。B。用PD-L1进行T7EI检测。PCR中701 bp的PD-L1基因片段随后用T7EI-检测。T7EI裂解产生两条额外的带：一条535 bp，另一条166 bp。

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技术概述 PD-1和PD-L1路径介绍PD-1（程序性死亡-1）受体（也称为CD279）和程序性死亡配体-1（PD-L1）是免疫检查点蛋白。PD-1是一种表达在活化T细胞表面的抑制性受体，其配体PD-L1在上皮细胞和内皮细胞上表达，除了不同类型的免疫细胞作为抗原提呈细胞（树突状细胞、巨噬细胞、B细胞）外。PD-L1可以通过慢性组织感染等炎症状态下的干扰素组成性表达和上调。PD-L1也在肿瘤细胞的表面表达。PD-1和PD-L1的结合将抑制信号传递到T细胞，从而减少细胞因子的产生，抑制T细胞的增殖并阻止其靶向肿瘤细胞。免疫检查点通路已成为一种重要的肿瘤回避机制；因此，靶向PD-1或PD-L1均可刺激免疫系统，提高T细胞介导的肿瘤细胞清除效率。 PD-1、PD-L1通道

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PD-1、PD-L1与癌症治疗

当与肿瘤细胞表达的PD-L1结合时，肿瘤特异性T细胞上表达的抑制性受体PD-1会导致激活功能受损，抑制效应器功能，如增殖、细胞因子分泌和肿瘤细胞溶解。免疫检查点阻断在使用针对PD-1和PD-L1的单克隆抗体进行癌症免疫治疗方面取得了进展[1]。使用这种方法的有效癌症治疗包括晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌（NSCLC）、肾细胞癌（RCC）和其他肿瘤类型[2]。然而，必须注意的是，大多数组织依赖PD-L1的表达来限制T细胞反应，因此全身注射PD-L1/PD-1阻断抗体仍有破坏外周耐受的风险。CRISPR和PD-1、PD-L1CRISPR-Cas9系统已被开发用于有效的基因组编辑。使用单导向RNA（sgRNA），Cas9内切酶可以被精确地引导到目标位点，产生DNA双链断裂（DSB），从而启动DNA修复过程，导致特定位点的基因组修改。自2013年首次应用于哺乳动物细胞和动物[3]以来，基于CRISPR-Cas9的治疗策略一直在癌症建模和治疗研究中积极实施。CRISPR-Cas9系统可以通过非病毒或病毒传递编码Cas9和sgRNA的基因组成分直接应用于人类细胞[4]。PD-1基因缺失可能是提高肿瘤T细胞免疫治疗效率的有效方法[5]。使用Cas9-sgRNA核糖核蛋白和外源单链DNA模板取代靶向核苷酸已实现PD-1的敲除[6]。同样，已经证明，人类T细胞中sgRNA和Cas9靶向基因敲除PD-1导致PD-1表达显著降低，从而上调T细胞免疫反应并增强癌细胞系的细胞毒性[7]。开发了一个基于Jurkat T细胞的慢病毒CRISPR工具箱，以促进T细胞功能的研究[8]。最近，美国国立卫生研究院（NIH）重组DNA咨询委员会批准了一项临床试验。在本临床试验中，CRISPR-Cas9将同时敲除PD-1、内源性T细胞受体和NY-ESO-1受体。CRISPR/Cas9的首次临床试验已经启动[9]。CRISPR-Cas9在前列腺（NCT02867345）、膀胱癌（NCT002863913）和肾细胞癌（NCT02867332）的自体T细胞中进行PD-1基因敲除的类似试验也正在启动。CRISPR基因编辑的CAR T细胞显示出强大的抗肿瘤活性在体外在动物模型中[10]。肿瘤细胞上PD-L1的表达可导致人CAR T细胞功能低下，导致皮下异种移植模型中肿瘤清除率受损。CRISPR/Cas9对CD19-CAR T细胞PD-1的干扰增强了CAR T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用在体外增强PD-L1+肿瘤异种移植物的清除体内[11].

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工具书类

Keir，M.E.、Butte M.J.、Freeman G.J.和Sharpe A.H.PD-1及其配体在耐受性和免疫力方面的研究。每年。免疫学评论。26, 677–704 (2008).
Suzanne，L.T.等人，癌症中抗PD-1抗体的安全性、活性和免疫相关性。北英格兰。《医学杂志》366、2443–2454（2012）。
Cong L，Ran FA，Cox D，Lin S，Barretto R，Habib N，Hsu PD，Wu X，Jiang W，Marraffini LA，Zhang F.使用CRISPR/Cas系统的多重基因组工程。科学。339(6121):819-23 (2013).
H.Yin，C.-Q.Song，J.R.Dorkin，L.J.Zhu，Y.Li，Q.Wu，A.Park，J.Yang，S.Suresh，A.Bizhanova，通过CRISPR系统成分在体内的病毒和非病毒联合传递进行治疗基因组编辑，《国家生物技术》。34228-333（2016年）。
S.L.Topalian、C.G.Drake和D.M.Pardoll，《免疫检查点封锁：癌症治疗的共同标准方法》，《癌症细胞》，第27期，第450-461页（2015年）。
K.Schumann，S.Lin，E.Boyer，D.R.Simeonov，M.Subramaniam，R.E.Gate，G.E.Haliburton，J.Y.Chun，J.A.Bluestone，J.A.Doudna，使用Cas9核糖核蛋白生成敲除的初级人类T细胞，Proc。国家。阿卡德。科学。美国A11210437-10442（2015）。
S.Su，B.Hu，J.Shao，B.Shen，J.Du，Y.Du，J.周，L.Yu，L.Zhang，F.Chen，CRISPR-Cas9介导的PD-1对癌症患者原代T细胞的高效破坏，科学。代表620070（2016）。
Chi S，Weiss A，Wang H.基于CRISPR的T细胞信号转导研究工具箱。《生物医学研究国际》2016:5052369（2016）。
Cyranoski D，CRISPR基因编辑首次在一个人身上进行测试。《自然》杂志539:479（2016）。
任杰，刘旭，方C，江S，June CH，Zhao Y.多重基因组编辑以产生抗PD1抑制的通用CAR T细胞。临床癌症研究23（9）：2255-2266（2017）。
Rupp LJ、Schumann K、Roybal KT、Gate RE、Ye CJ、Lim WA、Marson A.CRISPR/Cas9-介导的PD-1破坏增强了人类嵌合抗原受体T细胞的抗肿瘤功效。科学报告7（1）：737（2017）。

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相关产品

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靶向sgRNA慢病毒颗粒的PD-1和PD-L1

优势

用于PD-1的sgRNA慢病毒颗粒

用于PD-L1的sgRNA慢病毒颗粒

图1。携带慢病毒基因组的sgRNA。

图2。用携带sgRNA和mCherry报告基因的慢病毒颗粒转染HEK293细胞的荧光显微镜图像。A.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-1的HEK293细胞。B.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-L1转染HEK293细胞。

使用以下方法验证PD-1和PD-L1的目标识别和裂解索引检查^TM公司T7核酸内切酶I分析如图3所示。

PD-1、PD-L1与癌症治疗

工具书类

靶向sgRNA慢病毒颗粒的PD-1和PD-L1

优势

用于PD-1的sgRNA慢病毒颗粒

用于PD-L1的sgRNA慢病毒颗粒

图1。携带慢病毒基因组的sgRNA。

图2。用携带sgRNA和mCherry报告基因的慢病毒颗粒转染HEK293细胞的荧光显微镜图像。A.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-1的HEK293细胞。B.用携带sgRNA的慢病毒颗粒在亮场和RFP通道中靶向PD-L1转染HEK293细胞。

使用以下方法验证PD-1和PD-L1的目标识别和裂解索引检查TM公司T7核酸内切酶I分析如图3所示。

PD-1、PD-L1与癌症治疗

工具书类

使用以下方法验证PD-1和PD-L1的目标识别和裂解索引检查^TM公司T7核酸内切酶I分析如图3所示。