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.1998年12月25日;273(52):35347-54.
doi:10.1074/jbc.273.52.35347。

AMP活化蛋白激酶α1催化亚基的功能域

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AMP活化蛋白激酶α1催化亚基的功能域

B E克鲁特等。 生物化学杂志. .
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摘要

AMP激活的蛋白激酶是一种异源三聚体酶,在细胞适应营养饥饿、缺氧、ATP利用增加或热休克的应激中起重要作用。这种哺乳动物酶由催化α亚基、非催化β亚基和γ亚基组成,是包括酿酒酵母SNF1激酶在内的更大蛋白激酶家族的成员。在本研究中,我们通过截断和定点突变鉴定了α1催化亚基的几个功能域,这些功能域调节其活性、亚基关联和蛋白质周转。548-氨基酸(aa)野生型α1蛋白的C-末端截断为aa 312或392,消除了β/γ亚基的结合,并显著增加了蛋白表达。全长野生型α1亚单位在缺乏共同表达的β/γ的情况下仅具有最低活性,α1(1-392)同样也几乎没有活性。然而,进一步截断为aa 312与酶的特异性活性大幅增加相关,从而揭示了aa 313和392之间的自抑制序列。α-1(1-312)仍然需要激活环Thr-172的磷酸化才能进行酶活性,但现在它独立于变构激活剂AMP。瞬时转染截短的α亚单位cDNA时,蛋白质表达水平增加是因为脉冲相分析中的酶转换减少。综上所述,这些数据表明AMP活化蛋白激酶的α1亚单位包含决定酶活性和稳定性的几个特征。不需要非催化亚单位参与的组成活性形式的激酶为探索AMP活化蛋白激酶的功能提供了独特的试剂。

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