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.1998年7月2日;394(6688):88-92.
doi:10.1038/27938。

二聚体14-3-3蛋白是Raf激酶活性的必要辅因子

附属公司

二聚体14-3-3蛋白是Raf激酶活性的必要辅因子

G Tzivion公司等。 自然. .

摘要

cRaf-1是一种促分裂原活化蛋白激酶,是GTP结合的Ras募集的主要效应物,以激活MAP激酶途径。在含有Hsp90、Hsp50(Cdc37)和14-3-3蛋白的复合物中,在细胞质中发现了不活动的Raf。GTP-结合的Ras结合Raf,对于Raf的稳定激活是必要的,但不足以对血清、表皮生长因子、血小板衍生生长因子或胰岛素产生反应。这些试剂导致Raf在丝氨酸/苏氨酸残基上的总磷酸化增加两到三倍,用蛋白质(丝氨酸/苏氨酸)磷酸酶处理cRaf-1可以使其至少部分失活。14-3-3蛋白在调节Raf激酶活性中的作用尚不明确,本文对此进行了研究。通过使用合成磷酸肽置换14-3-3,活性Raf几乎可以在体外完全失活。通过添加纯化的重组细菌14-3-3可以显著逆转失活;然而,Raf必须事先在体内被激活,才能在体外被14-3-3重新激活。14-3-3支持Raf活性的能力取决于Raf上丝氨酸残基的磷酸化和14-3-3二聚体的完整性;突变单体形式的14-3-3虽然能够在体内结合Raf,但不能在体内激活Raf,也不能在体外置换14-3-3后恢复Raf活性。14-3-3蛋白不是诱导Raf二聚所必需的。我们认为,在缺乏GTP-结合Ras的情况下,需要二聚体14-3-3来维持Raf处于非活性状态,并稳定体内激活过程中产生的Raf的活性构象。

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