跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并且被安全地传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.1998年3月3日；95(5):2050-5.
doi:10.1073/pnas.95.5.2050。

c-Jun N末端激酶对糖皮质激素受体转录激活的拮抗作用

I罗加茨基 1, S K洛根, M J加拉贝迪安
附属公司

c-Jun N末端激酶对糖皮质激素受体转录激活的拮抗作用

I罗加茨基等。 美国国家科学院院刊. .

摘要

丝裂原活化蛋白激酶ERK（细胞外信号调节激酶）、JNK（c-Jun N末端激酶）和p38磷酸化并激活促进增殖和炎症反应的转录因子，而糖皮质激素受体（GR）激活抑制细胞生长和炎症。我们证明JNK和ERK在体外主要在Ser-246磷酸化GR，而不是p38。ERK或JNK在体内的选择性激活抑制GR介导的转录激活，这取决于JNK对Ser-246的受体磷酸化，而不是ERK。因此，JNK通过直接受体磷酸化抑制GR转录激活，而ERK则是间接抑制。我们认为，JNK对GR的磷酸化或ERK对GR-辅因子的磷酸化提供了机制，以确保在GR-依赖性基因表达与促有丝分裂或炎症信号发生冲突时快速抑制其表达。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
MAPK家族成员对GR的磷酸化作用。(A类)通过ERK、JNK和p38实现GR磷酸化在体外一种含有受体残基106–318（GST–GR106–318)表示为大肠杆菌，经谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化（5），磷酸化在体外使用纯化的重组ERK、JNK和p38。MBP、纯化的重组GST–c-Jun和PHAS-I根据制造商的说明进行磷酸化，并分别用作ERK、JNK和p38激酶的激酶活性的独立测量。GST–GR的金额相同106–318考马斯蓝染色（未显示）验证了每对通道中的相应控制蛋白，放射自显影术显示底物磷酸化。(B类)ERK和JNK通过二维磷酸肽图谱分析GR磷酸化。使用V8蛋白酶消化含有ERK或JNK标记的受体的聚丙烯酰胺凝胶，并进行如所述的磷酸肽映射（5）。Dex处理大鼠肝癌细胞中代谢标记和分离的受体的二维图谱(体内)以及所鉴定的GR磷酸肽的示意图体内如左图所示。
图2
图2
GR Ser-246是JNK磷酸化的主要位点。(A类)JNK对野生型GR和GR S246A突变体的磷酸化作用在体外GST–政府106–318（wt），以及含有残基106–414（GST–GR106–414)、wt或具有单一氨基酸替代的S246A表达于大肠杆菌经JNK纯化和磷酸化在体外用SDS/PAGE在10%凝胶上分离反应产物，用考马斯蓝染色，以验证每条通道中存在等量的受体衍生物，并进行放射自显影。wt-GR磷酸化的密度测量值被任意设置为1。(B类)JNK磷酸化GR残基Ser-246在体外GST–政府106–414（wt GR）和GST-GR106–414S246A（GR S246A）被JNK磷酸化在体外并进行二维磷酸肽映射。注意在受体S246A突变体的图谱上缺乏肽5。
图3
图3
有丝分裂原刺激导致Ser-246磷酸化体内将体外表达大鼠wt GR（25）的SAOS2人骨肉瘤细胞在0.1%FBS/DMEM中进行48小时的血清饥饿处理。用1 mCi/ml的[32P] 在不含（血清）和含（血清+）10%FBS的情况下，添加正磷酸盐和100 nM Dex。体内用GR特异性单克隆抗体BuGR2（26）从细胞裂解液中免疫沉淀标记的受体，并进行二维磷酸肽定位。
图4
图4
ERK或JNK通路的激活抑制GR转录激活。(A类)f-sos和racQ61L对HeLa细胞中ERK和JNK的选择性激活。如有指示，将pRK5-HA ERK（1.5μg）、pRK5-M2 JNK（1.5微克）以及pRK5-2 f-sos（4微克）或pCMV5-racQ61L（4微格）或空pRK5载体（4微g）转染到HeLa细胞（2.5×105细胞/60-mm培养皿）。转染细胞按指示用100 nM Dex处理，8小时后收获。为了观察HA ERK和HA f-sos，用抗HA小鼠单克隆抗体对ERK转染细胞的WCE进行免疫印迹（左面板）。使用FLAG特异性小鼠单克隆抗体M2从WCE中免疫沉淀FLAG标记的JNK，并使用在体外磷酸化重组纯化的GST–c-Jun。在10%SDS/聚丙烯酰胺凝胶上分离磷酸化蛋白，用考马斯蓝染色，以验证每条车道上的GST-c-Jun数量相等，并进行放射自显影（右侧面板）。(B类)激活ERK和JNK抑制GR转录增强。HeLa细胞如在A类此外，每个培养皿中均含有1.25μg GR报告质粒ΔGTCO-CAT和0.5μg pCMV-LacZ质粒。采集细胞，通过CAT分析（29）评估内源性GR的转录活性，并将其归一化为β-Gal活性。(C类)GR蛋白水平不受JNK或ERK激活的影响。WCE由一组平行的转染细胞制备而成。用SDS/PAGE分离等量的总蛋白（50μg/lane），转移到Immobilon纸上，用GR特异性多克隆抗体进行检测，并通过增强化学发光进行可视化。
图5
图5
JNK而非ERK抑制GR转录增强是通过Ser-246受体磷酸化介导的。使用磷酸钙沉淀法转染GR缺陷的U-2OS人骨肉瘤细胞（28）。每个60-mm培养皿接受1.5μg pRK5-HA ERK和4.0μg pR K5-HA f-sos或pRK5质粒(A类)或1.5μg pRK5-M2 JNK与4.0μg pCMV5-racQ61L或pRK5质粒(B类)如图所示。此外，每个培养皿接受0.7μg pCMV-GR（wt GR或GR S246A，如图所示）、1.25μgΔGTCO-CAT和0.5μg pCMCV-LacZ。用100 nM Dex处理转基因细胞8小时，采集并检测CAT和β-Gal活性。每个实验重复进行三次，偏差小于5%。
图6
图6
激活JNK而非ERK途径体内增加GR磷酸化。HeLa细胞（1×106)用pCMV-GR S224A S232A（2.3μg）和(A类)pRK5-M2 JNK（4.5μg）与pCMV5-racQ61L（12μg）或空pCMV5载体（12μg）或(B类)pRK5-HA ERK（4.5μg）与pRK5-HA f-sos（12μg）或使用脂质体的空pRK5载体（12μc）。18小时后，用1 mCi/ml的[32P] 存在100 nM Dex的正磷酸盐。体内用大鼠GR特异性单克隆抗体BuGR2从细胞裂解液中免疫沉淀标记的受体。免疫沉淀物在9%SDS/PAGE凝胶上分离，转移到Immobilon膜上，并暴露在膜上以观察磷酸化GR(上部). 为了使GR蛋白表达正常化，用抗GR兔多克隆抗体对同一膜进行Western blotting(下部). 在没有共转染racQ61L的情况下获得的密度测定值(A类)或f-sos(B类)被任意设置为1。
图7
图7
JNK对GR和AP-1转录激活的相互调节模型。在JNK不活动的条件下，AP-1介导的转录较低，因为c-Jun在完全转录活性所需的位点没有磷酸化，而激素诱导的GR依赖性转录较高，因为GR在抑制位点Ser-246没有磷酸化。在存在生长因子或炎性细胞因子的情况下，JNK被激活并磷酸化c-Jun和GR，这导致AP-1介导的转录激活增加和GR依赖性转录增强减少。激活的JNK影响AP-1和GR转录活性的能力相反，提供了一种机制，以确保在GR依赖性基因表达与促有丝分裂或炎症信号发生冲突时快速抑制其表达。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Yamamoto K R.Annu Rev.基因。1985;19:209–252.-公共医学
    1. Didonato J A，Saatcioglu F，Karin M.Am J Respir Crit Care Med.1996；154:11–15.-公共医学
    1. 卡托·A·C，韦德·E·生物论文。1996;18:371–378.-公共医学
    1. 韦伯斯特·J·C、朱厄尔·C·M、博德威尔·J·E、芒克·A、萨·M、西德洛夫斯基·J·A·J·生物化学。1997;272:9287–9293.-公共医学
    1. Krstic M D、Rogatsky I、Yamamoto K R、Garabedian M J.《分子细胞生物学》。1997;17:3947–3954.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源