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.1995年12月;16(12):2249-57。
doi:10.1002/elps.11501601357。

使用双向凝胶电泳深入了解复杂的细胞器,吞噬体

附属公司

使用双向凝胶电泳深入了解复杂的细胞器,吞噬体

J伯克哈特等。 电泳. 1995年12月.

摘要

吞噬体是大颗粒物质(包括各种致病微生物)内化后在各种细胞中从头形成的细胞器。我们在此提出了一种系统方法,可用于研究吞噬体/吞噬溶酶体的多肽组成,并获得有关其蛋白质特性的分析信息。采用密度转移法从小鼠J774和人U937巨噬细胞中分离出填充有低密度乳胶珠的纯吞噬体制剂。进行高分辨率二维(2-D)凝胶电泳,以生成分离吞噬体的整体[35S]蛋氨酸标记蛋白图谱。由此得到的图谱显示了200多种多肽的最小存在,表明了这种细胞器的复杂性。迁徙实验表明,这两个物种共有几种吞噬体多肽,其中有几种已知蛋白质。使用Triton X-114和碳酸钠进行提取,以区分膜蛋白和可溶性蛋白,并测量对一组蛋白酶的敏感性,以识别吞噬体膜细胞质表面上暴露的蛋白。本文讨论了二维凝胶法在细胞器蛋白质定位中的一般价值。

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