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.1993年3月;13(3):1737-45.
doi:10.1128/mcb.13.3.1737-1745.1993年。

GTPase激活蛋白和磷脂酰肌醇3-激酶SH2结构域的体内结合特性

附属公司

GTPase激活蛋白和磷脂酰肌醇3-激酶SH2结构域的体内结合特性

J A库珀等。 分子细胞生物学. 1993年3月.

摘要

我们使用瞬时表达系统和突变的血小板衍生生长因子(PDGF)受体来研究Ras GTPase激活蛋白(GAP)的Src同源性2(SH2)区域和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3激酶)的p85α亚基的结合特异性。许多融合蛋白的表达水平与内源性GAP相当,每个融合蛋白都带有一个表位,可被单克隆抗体识别。包含GAP的中心SH2-SH3-SH2区域或p85α的C末端区域的融合蛋白,其中包括两个SH2结构域,与PDGF受体结合以响应PDGF刺激。两种融合蛋白对PDGF受体中酪氨酸磷酸化位点的要求与它们来源的全长蛋白相同,即GAP融合蛋白的结合通过Tyr-771的突变而减少,p85融合蛋白的结合通过Tyr-740、Tyr-751或两个残基的突变而减少。在该系统中,含有GAP或p85α的单个SH2结构域的融合蛋白没有检测到与PDGF受体的结合,这表明单个多肽中的两个SH2结构区合作提高了结合亲和力。单个SH2结构域的序列特异性是根据包含一个来自GAP的SH2结构区和另一个来自p85的SH2域的融合蛋白的结合特性推导出来的。结果表明,C末端GAP SH2结构域指定与Tyr-771结合,C末端p85αSH2结构区与Tyr-740或Tyr-751结合,每个蛋白质的N末端SH2结构段与未识别的磷酸化位点结合。(摘要删减250字)

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