Cloning, sequencing, and expression of a 24-kDa Ca(2+)-binding protein activating photoreceptor guanylyl cyclase

doi:10.1074/jbc.270.42.25200

.1995年10月20日；270(42):25200-6.

doi:10.1074/jbc.270.42.25200。

激活光感受器鸟苷酰环化酶的24-kDa-Ca（2+）结合蛋白的克隆、测序和表达

A M Dizhoor先生¹, E V奥尔谢夫斯卡娅, W J亨泽尔, S C Wong公司, J T柱, I安库迪诺娃, J B赫尔利

附属公司

PMID： 7559656
内政部： 1074年10月10日/jbc.270.4225200

免费文章

激活光感受器鸟苷酰环化酶的24-kDa-Ca（2+）结合蛋白的克隆、测序和表达

A M Dizhoor先生等。生物化学杂志. 1995.

免费文章

.1995年10月20日；270(42):25200-6.

doi:10.1074/jbc.270.42.25200。

作者

A M Dizhoor先生¹, E V奥尔谢夫斯卡娅, W J亨泽尔, S C Wong公司, J T柱, 我Ankoudinova, J B赫尔利

附属

¹美国西雅图华盛顿大学生物化学系，邮编98195。

PMID： 7559656
内政部： 1074年10月10日/jbc.270.4225200

摘要

两种脊椎动物光感受器特异性膜鸟苷酸环化酶RetGC-1和RetGC-2被可溶24-kDa视网膜蛋白p24以钙（2+）敏感的方式激活（Dizhoor，a.M.，Lowe，D.G.，Olshevskaya，E.V.，Laura，R.P.和Hurley，J.B.（1994）Neuron 12，1345-1352；Lowe，D.G.，Dizhoor，A.M.，Liu，K.，Gu，O.，Laura，R.，Lu，L.和Hurley，J.B.（1995）Proc。国家。阿卡德。科学。美国92，5535-5539）。牛p24的一级结构来自肽序列测定及其cDNA。p24是一种新的EF-型Ca（2+）结合蛋白，与另一种鸟苷酸环化酶激活蛋白GCAP相关但不完全相同（Palczewski，K.，Subbaraya，I.，Gorczyca，W.a.，Helekar，B.S.，Ruiz，C.C.，Ohguro，H.Huang，J.，Zhao，X.，Crabb，J.W.，Johnson，R.S.，Walsh，K.a.，Gray-Keller，M.P.，Detwiler，P.B.，and Baehr，W.（1994）Neuron 13，395-404）和钙结合蛋白恢复家族的其他成员。针对截短融合蛋白和针对p24特异性合成肽的抗体在免疫印迹上特异性识别视网膜p24。这两种抗体通过纯化p24抑制感光细胞膜鸟苷酸环化酶的激活。p24只在视网膜中发现，它与视网膜外膜共纯化。免疫细胞化学分析表明，它存在于视杆感光细胞中。使用固定化抗体柱从热处理的视网膜提取物中纯化p24。纯化的p24在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示为未被GCAP污染的均质蛋白，并且在体外亚摩尔浓度下激活感光体鸟苷酰环化酶。Ca2+抑制这种激活，EC50接近200 nM，Hill系数为1.7。在293细胞中表达的重组p24有效刺激光感受器鸟苷环化酶。这些发现表明，p24和GCAP一样，赋予感光细胞膜鸟苷酸环化酶对Ca2+的敏感性。我们建议将第24页称为GCAP-2，将GCAP称为GCAP-1。

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