跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年6月24日7:11853。
doi:10.1038/ncomms11853。

内皮细胞向间充质细胞转化在动脉粥样硬化病变中很常见，并与斑块不稳定有关

Solene M Evrard公司 1, 劳拉·莱切 1, 凯瑟琳·米歇利斯 1, 野村佳彦 1, 高拉夫·潘迪 2, K-Raman Purushothaman公司 1, 瓦伦蒂娜·德斯卡马尔 1, 詹妮弗·R·李 1, 拉胡阿里亚·哈德里 1, 藤谷贤治 1, 佩德罗·莫雷诺 1, 卢多维克·贝纳德 1, 波琳·里梅勒 1, 阿里拉·科亨 2, 布里格姆·麦卡姆 三, Gwendalyn J Randolph公司 4, 伊丽莎白·纳贝尔 5, 罗杰·哈贾尔 1, 瓦伦汀·法斯特 1 6 7, 曼弗雷德·博姆 8, 杰森·科瓦西奇 1
附属公司

内皮细胞向间充质细胞转化在动脉粥样硬化病变中很常见，并与斑块不稳定有关

Solene M Evrard公司等。 国家公社. .

勘误表in

摘要

内皮细胞向间充质细胞转化（EndMT）在发育过程中起着重要作用，也会导致一些成人心血管疾病。重要的是，包括成纤维细胞在内的间充质细胞在动脉粥样硬化中表现突出，其关键功能包括调节炎症、基质和胶原生成以及斑块结构完整性。然而，对动脉粥样硬化相关成纤维细胞的起源知之甚少。在这里，我们使用内皮特异性血统追踪显示，终末MT-衍生成纤维细胞样细胞在动脉粥样硬化病变中很常见，终末MT衍生细胞表达一系列成纤维细胞特异性标记物。体外模型证实EndMT由TGF-β信号传导、氧化应激和缺氧驱动；动脉粥样硬化的所有特征在共同表达内皮和成纤维细胞/间充质蛋白的人类斑块中很容易检测到过渡细胞，表明存在EndMT。EndMT的程度与不稳定斑块表型相关，这似乎是由EndMT衍生细胞中胶原蛋白-基质金属蛋白酶产生的改变所驱动的。我们得出结论，EndMT有助于动脉粥样硬化的病理生物学，并与可能与临床事件相关的复杂斑块相关。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有竞争性的经济利益。

数字

图1
图1。繁殖和世代终结。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−老鼠。
这个人物是用施维雅的医学艺术创作的。
图2
图2。EndMT在内膜斑块中产生成纤维细胞样细胞。
(a–c)三苯氧胺诱导末端胸主动脉切片的免疫荧光共聚焦显微镜。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−之后的老鼠(一) 8, (b条) 18, (c（c）)30周HFD显示Yfp+内膜斑块内共表达成纤维细胞特异性标记Fap的细胞。L=流明；比例尺，100μm。如图所示，以较高放大倍数插入。箭头表示共阳性细胞。(d日)内膜斑块中的细胞定量显示，HFD 8周、18周和30周后，分别有10.2±2.1%、25.7±9.0%和25.6±6.3%的细胞表达Fap，表明存在成纤维细胞表型。(e（电子）)定量分析（不考虑表达Yfp的内皮细胞比例）表明，在相同的时间点，内膜Fap分别为10.0±2.6%、6.4±3.9%和14.0±7.2%+细胞共表达Yfp。(如果)在计算了内皮细胞系追踪系统的效率（表达Yfp的内皮细胞的%）后，在相同的时间点，我们确定内膜Fap的32.5±8.5%、20.7±12.6%和45.5±23.3%+细胞来源于内皮细胞谱系。(克)再次考虑到我们的内皮细胞系追踪系统的效率，在相同的时间点，我们分别确定3.1±1.0%、3.0±1.4%和8.8±4.7%的所有内膜细胞是内皮细胞系衍生的Fap+细胞。对于图1e–h，对每只小鼠至少三个空间分离的胸主动脉切片中的每一个进行至少四个图像评估(n个=5只小鼠，持续8周和18周；n个=4只小鼠，持续30周）。对每只动物的数据进行平均，然后用于统计分析（单向方差分析）。NS，不显著。(小时)三苯氧胺诱导端胸主动脉切片的四色免疫荧光共聚焦显微镜。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−18周HFD后显示Yfp的小鼠+法珀+血管钙粘蛋白+（箭头）和Yfp+法珀+血管钙粘蛋白负极单元格（箭头）。L=流明；比例尺，100μm。Yfp定量+，传真+和Ve-Cadherin+内膜斑块中的（VeCad）细胞，如小时已执行(n个=5只小鼠）进行评估(我)所有Fap中Yfp和Ve-Cadherin的相对共表达+单元格(j个)所有Yfp中Fap和Ve-Cadherin的相对共表达+细胞。(k个)在Yfp中评估Fap的表达+细胞FACS显示，在对照组非动脉粥样硬化结束。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp喂食日粮的小鼠，Yfp的21.5±0.2%+细胞表达Fap，而在他莫昔芬诱导的末端。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−HFD 18周后的小鼠，Yfp的36.2±3.6%+细胞表达Fap。在小组中研究的所有小鼠k个他们的总体年龄相同（24周）*P（P）<0.05时，n个=每组3人。
图3
图3。氧化应激促进EndMT并对TGF-β有加性作用。
(一)三苯氧胺诱导端胸主动脉切片的代表性二氢乙锭（DHE）显微图像。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−8周和18周HFD演示后的小鼠就地超氧化物生成。单因素方差分析；总体的P（P）<0.0001. (b条)三苯氧胺诱导端动脉粥样硬化病变的TUNEL分析。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−8周和18周HFD后的小鼠显示Yfp凋亡+细胞。对于一和b条：L=流明；比例尺，100μm。如图所示，以更高的放大倍数插入。箭头表示共阳性细胞。对每只小鼠至少三个空间分离的胸主动脉切片进行染色(n个=每组5只小鼠）。非动脉粥样硬化小鼠的对照实验如补充图8所示。(c（c）)生长在基础培养基（ctrl）中或暴露于TGF-β和/或H后的HUVEC的相差显微镜2哦2持续5天。比例尺，100μm。(d日)热图显示内皮基因的表达（顶部），非内皮基因在EndMT/EMT中也下调，已知在EndMT/EMT中上调的基因和HUVEC暴露于对照条件下（基础培养基未刺激）的间充质基因（底部），TGF-β或TGF-2哦2。由于GO、KEGG、Reactome或MSigDB等数据库中没有“EndMT”或“成纤维细胞”的基因集，该基因列表是通过广泛的文献检索汇编的（补充表2）。(e（电子）)通过western blot定量检测暴露于对照（ctrl）条件（未刺激）或TGF-β、有或无H的HUVEC中FAP蛋白的表达2哦2100或200μM。FAP阶梯（L）表示100 kDa（上部）和75 kDa。FAP预期分子量/大小为90 kDa。GAPDH梯形图表示37 kDa。GAPDH预期分子量/大小为37 kDa。(如果)FAP公司在相同条件下通过qRT-PCR评估RNA水平。(克)CD31蛋白经western blot定量。CD31阶梯（L）代表150 kDa（上部）和100 kDa的（下部强带）。CD31的预期分子量/大小为130 kDa。GAPDH梯形图表示37 kDa。GAPDH预期分子量/大小为37 kDa。(小时)CD31型在相同条件下，用qRT-PCR评估HUVEC的RNA水平。数据输入e（电子）——小时通过双向方差分析进行分析，完整结果见补充表3。(我)未刺激HUVEC的细胞迁移与仅用TGF-β或TGF-2哦2持续5天。单因素方差分析；总体的P（P）=0.015. (j个)未刺激HUVEC的细胞侵袭与仅用TGF-β或TGF-2哦2持续5天。单因素方差分析；总体的P（P）<0.0001.n个qRT-PCR为6-9，western blots为3-6。迁移和入侵由三个独立的实验确定，每个实验都有n个=3.NS，不显著*P（P）<0.05,**P（P）<0.01,***P（P）<0.001，****P（P）<0.0001.
图4
图4。低氧增加EndMT，并增加TGF-β的作用。
(一)代表性的吡莫硝唑染色显示三苯氧胺诱导端主动脉切片的缺氧程度。SclCreER公司T型;R26R停止Yfp;阿波（ApoE）−/−喂食8周和18周HFD的小鼠。红色表示pO缺氧2<10毫米汞柱。使用吡莫硝唑（红色）和DAPI（蓝色）进行特定染色。L=流明；比例尺，100μm。对每只小鼠至少三个空间分离的胸主动脉切片进行染色(n个=每组5只小鼠）。单因素方差分析；总体的P（P）<0.0001. (b条)暴露于缺氧和/或TGF-β5天的HCAECs的免疫染色在体外.比例尺，100μm。(c（c）——如果)间充质基因的相对RNA表达FAP公司，SM22αqRT-PCR评估，HCAEC中Calponin和Versican（分别）因缺氧而增加。(克——j个)内皮基因的相对RNA表达CD31型、Ve-Cadherin、，电子NOS和韩国存托凭证经qRT-PCR评估，缺氧反应呈现混合效应。(k个——我)相对RNA表达SNAI2公司和SNAI1公司HCAECs中的含量因缺氧而增加。(米)如图所示，通过蛋白质印迹评估HCAECs中SM22α蛋白的表达因缺氧而增加。SM22α梯形图（L）表示25 kDa（上部）、20 kDa。SM22α的预期分子量/大小为23 kDa。GAPDH梯形图表示37 kDa。GAPDH预期分子量/大小为37 kDa。(n个)CD31蛋白的表达，通过蛋白质印迹在HCAECs中进行评估。CD31梯形图（L）表示150 kDa。CD31的预期分子量/大小为130 kDa。GAPDH梯形图表示37 kDa。GAPDH预期分子量/大小为37 kDa。由于我们的目的是评估缺氧的具体影响，而不是与TGF-β的相互作用（作为参考），t吨在这种情况下进行了测试。n个在所有实验中=3。所有实验重复3次以上。NS，不显著*P（P）<0.05,**P（P）<0.01,***P（P）<0.001,****P（P）<0.0001.
图5
图5。EndMT发生于人类动脉粥样硬化，常见于复杂斑块。
根据标准标准，在尸检时从腹主动脉获得的人体样本中发现的斑块被分类为AHA V型或VI型。根据指示，使用各种内皮-间充质标记物组合进行染色。×20场共阳性细胞的百分比表示为DAPI总数的函数+单元格（每个字段）如下：(一)FAP/vWF(b条)FSP-1/vWF(c（c）)FAP/CD31(d日)FSP-1/CD31。比例尺，100μm。插图以较高的放大倍数显示，如图所示，箭头表示共阳性细胞。(e（电子）)FAP百分比+vWF（vWF）+共阳性细胞根据破裂与未破裂斑块形态呈现*P（P）<0.05,**P（P）<0.01,***P（P）<0.001. (如果)主动脉斑块帽厚度与%FAP的散点图和回归线+vWF（vWF）+共阳性细胞。第页=0.6902,P（P）=0.0002。对于FAP/vWF，从16名患者中随机选择24个斑块进行评估（11个V型，13个VI型），而对于其他组合，每个分析中至少随机包括来自6名不同患者的10个斑块。
图6
图6。EndMT导致成纤维细胞样表型，胶原-基质金属蛋白酶平衡发生改变。
(一)基于全局基因表达的分层聚类分析表明，未经治疗的和仅经TGF-β治疗的HUVEC混合并聚集在一起，而经TGF-β+H治疗的HUVEC2哦2单独集群。人成纤维细胞再次分别聚集到所有内皮衍生细胞（未经治疗、仅TGF-β和TGF-2哦2-治疗的HUVEC）。x个轴（1-相关性）表示相关性的强度。每个数据点（树状图的叶子）代表这些条件的单独样本。(b条)HUVEC的主成分分析（未经处理、仅TGF-β和TGF-α+H2哦2治疗）和基于图3d和补充表2中所示基因的人类成纤维细胞。(c（c）)成纤维细胞和EndMT-衍生成纤维细胞样细胞（TGF-β+H）表达的基因和转录因子的比较2哦2-治疗的HUVEC）。19个间充质细胞/成纤维细胞基因中的5个在这些细胞群中的表达水平在统计学上没有区别，而单个基因(MYH9年)在EndMT衍生的成纤维细胞样细胞中表达更高。(d日)人类成纤维细胞和EndMT-derived成纤维细胞样细胞之间细胞外基质组织相关基因表达的比较表明，这些人群之间胶原蛋白和MMP转录产物的平衡不同。(e（电子）)全球MMP蛋白活性测定表明，与人类成纤维细胞相比，EndMT-derived成纤维细胞样细胞的细胞裂解物中的MMP活性降低了3倍，但这些细胞的条件培养基中的MMP-活性增加了8.2倍；****P（P）<0.0001;n个在所有组中=4。(如果)与人成纤维细胞条件培养基相比，来自EndMT衍生的成纤维细胞样细胞的条件培养基表现出更高的MMP1、9和10以及TIMP2和4的蛋白质水平。相反，成纤维细胞条件培养基中MMP3水平较高。细胞群之间MMP2和TIMP1的水平没有差异，而MMP8和MMP13的水平没有检测到（未显示）。**P（P）<0.01,***P（P）<0.001,****P（P）<0.0001;n个在所有组中=4。
图7
图7
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Vicovac L.和Aplin J.D.滋养层细胞分化过程中的上皮-间充质转化。《安娜特学报》。（巴塞尔）156202-216（1996）。-公共医学
    1. Kovacic J.C.、Mercader N.、Torres M.、Boehm M.和Fuster V.上皮-间充质和内皮-间充质变：从心血管发育到疾病。发行量125，1795–1808（2012）。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Kalluri R.和Weinberg R.A.上皮-间质转化的基础。临床杂志。投资。119, 1420–1428 (2009).-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Santini M.P.、Forte E.、Harvey R.P.和Kovacic J.C.内源性心脏干细胞的发育起源和谱系可塑性。发展1431242-1258（2016）。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Markwald R.R.、Fitzharris T.P.和Manasek F.J.心内膜垫的结构发展。美国J.Anat。148, 85–119 (1977).-公共医学

出版物类型