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.1989年12月8日;186(1-2):123-8.
doi:10.1111/j.1432-1033.1989.tb15185.x。

AMP活化蛋白激酶的组织分布和缺乏环AMP依赖蛋白激酶的激活,使用特异和敏感的肽分析进行研究

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AMP活化蛋白激酶的组织分布和缺乏环AMP依赖蛋白激酶的激活,使用特异和敏感的肽分析进行研究

S P戴维斯等人。 欧洲生物化学杂志. .
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摘要

1.我们合成了两个肽,一个基于大鼠乙酰辅酶A羧化酶(SSMS肽)上AMP活化蛋白激酶独特位点(Ser79)的精确序列,另一个肽中与环腺苷酸依赖蛋白激酶(Ser77)位点相对应的丝氨酸残基被丙氨酸(SAMS肽)取代。2.这两种肽通过AMP活化蛋白激酶以类似的动力学磷酸化,但只有SSMS肽是环AMP依赖蛋白激酶的底物。SAMS肽未被其他五种纯化蛋白激酶磷酸化。3.SAMS肽的AMP活化蛋白激酶的Km高于乙酰辅酶A羧化酶,但肽磷酸化的Vmax是其亲本蛋白的2.5倍。因此,该肽为AMP激活的蛋白激酶提供了一种方便而敏感的检测方法。4.乙酰辅酶a羧化酶激酶和肽激酶活性从大鼠肝线粒体后上清液中经过六步共提纯,表明SAMS肽是该组织中AMP活化蛋白激酶的特异底物。我们无法证明粗制品中激酶活性的AMP依赖性,显然是由于内源性AMP仍然与酶结合。然而,8-溴代皂苷5-单磷酸(Br8AMP)是变构(AMP)位点的部分激动剂,2 mM Br8AMP的抑制可用于测试是否正在测量AMP刺激的激酶形式。5.使用这种方法,我们检测了九种不同大鼠组织和一种小鼠巨噬细胞细胞系中的激酶活性,发现表达显著水平的肽激酶活性的组织与那些活跃于脂质合成或储存的组织之间存在相关性。6.我们还使用肽分析表明,环腺苷酸依赖性蛋白激酶不激活纯化的腺苷酸活化蛋白激酶,也不影响内源性激酶激活部分纯化的腺苷活化蛋白激酶。

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