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1989年8月15日;264(23):13660-4.

转化生长因子β1前体前体区半胱氨酸残基的定点突变。突变蛋白的表达与表征

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  • PMID: 2474534
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转化生长因子β1前体前体区半胱氨酸残基的定点突变。突变蛋白的表达与表征

A M布伦纳等。 生物化学杂志
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摘要

三个半胱氨酸残基位于转化生长因子β1(TGF-β1)前体的前区,位于氨基酸位置33、223和225。先前的研究(Gentry,L.E.、Lioubin,M.N.、Purchio,A.F.和Marquardt,H.(1988)《分子细胞》。Biol.81462-4168)与中国仓鼠卵巢(CHO)细胞产生的纯化的重组TGFβ1(rTGFβ1)前体的比较表明,Cys-33可以与成熟TGFβ1中的至少1个半胱氨酸残基形成二硫键,有助于90-110-kDa蛋白的形成。我们现在证明Cys-223和Cys-225形成链间二硫键。采用定点突变将这些Cys密码子转化为Ser密码子,并将突变构建物转染到COS细胞中。免疫印迹法对重组蛋白的分析表明,通过取代Cys-33,90-110-kDa蛋白没有形成,因此,获得了更成熟的二聚体(24kDa),相应的生物活性增加了3-5倍。取代Cys-223和/或Cys-225导致成熟TGF-β1接近野生型水平。此外,在223和225位转染Ser质粒编码的细胞仅表达单体前体蛋白,并释放不需要酸活化的生物活性TGF-β1,这表明前体前区的二聚化可能是潜伏期所必需的。

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