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.2007年1月12日；25(1):57-70.
doi:10.1016/j.molcel.2006.11.022。

平行SUMOylation依赖性通路介导LXRs和PPARgamma的基因和信号特异性转阻遏

塞雷娜·吉莱斯蒂 1, 温迪黄, 小川住友, 加布里埃尔·帕斯科尔, 穆恩林, 蒂莫西·M·威尔逊, 迈克尔·罗森菲尔德, 克里斯托弗·K·格拉斯
附属公司

平行SUMOylation依赖性通路介导LXRs和PPARgamma的基因和信号特异性转阻遏

塞雷娜·吉莱斯蒂等。 分子电池. .

摘要

转阻遏被广泛用于负性调节基因表达，但不同核受体影响基因和信号特异性转阻抑程序的机制尚不清楚。在这里，我们报告了选择性SUMOylation依赖机制的鉴定，这些机制使PPAR-gamma和LXRs负调控重叠但不同的促炎基因亚群。SUMO2/3与LXRs或SUMO1与PPARgamma的配体依赖性结合将它们靶向TLR靶基因的启动子，在那里它们阻止转录激活所需的NCoR辅压复合物的信号依赖性去除。SUMO1-PPARgamma和SUMO2/3-LXRs抑制不同的NCoR清除机制，允许启动子和TLR特异性抑制模式。对天然存在的氧甾醇配体的突变分析和研究表明，LXR的反式激活和SUMOylation依赖的反式阻遏活性可以独立调节。这些研究定义了PPARgamma和LXRs所利用的平行但功能不同的途径，以区别调节控制免疫和体内平衡的复杂基因表达程序。

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数字

图1
图1。LXR转阻遏需要NCoR
NCoR特异性siRNA消除LPS诱导的原代巨噬细胞内源性iNOS基因表达的LXR依赖性抑制（A）和RAW264.7细胞iNOS-核糖核酸酶报告基因活性（B）。siRNA转染后，在不存在或存在LXR配体（GW3965，1μM）的情况下，用LPS（1μg/ml）刺激巨噬细胞6h。通过QPCR评估腹腔巨噬细胞iNOS的表达，通过荧光素酶分析评估RAW264.7细胞iNOS启动子的激活*与LPS+对照siRNA相比p<0.03**p<0.02 vs GW3965+LPS控制siRNA。C.ChIP分析显示iNOS启动子的配体依赖性和NCoR依赖性LXR募集。用LPS（1μg/ml）和LXR配体（GW3965，1μM）处理初级巨噬细胞1h。用抗LXR（α和α亚型）抗体或对照IgG进行ChIP分析。用iNOS特异性引物通过QPCR分析免疫沉淀DNA。从LXR分离的染色质−/−小鼠被用作LXR抗体特异性的阴性对照。*与未经治疗或单独使用LPS相比，p<0.05**p<0.03 vs GW3965或GW3965+LPS控制siRNA。D.LXR配体抑制LPS刺激的NCoR从iNOS启动子释放，如在腹腔巨噬细胞中的ChIP试验所示，如C组所述。*p<0.02 vs未治疗**与LPS相比p<0.02。结果表示为三个独立实验的平均值。误差线表示标准偏差。
图2
图2。LXR依赖性反式阻遏依赖于SUMO酸化
Ubc9特异性siRNA逆转LPS诱导的初级巨噬细胞iNOS表达的LXR依赖性抑制（A）和RAW264.7细胞iNOS启动子激活（B）。siRNA转染后，在不存在或存在LXR配体（GW3965，1μM）的情况下，用LPS（1μg/ml）刺激巨噬细胞6h。通过QPCR评估腹腔巨噬细胞iNOS的表达，通过荧光素酶分析评估RAW264.7中iNOS启动子的激活。*与LPS对照siRNA相比p<0.03**p<0.02 vs GW3965+LPS控制siRNA。针对Ubc9的siRNA阻止LXR募集（C），并消除LXR激动剂抑制iNOS启动子NCoR清除（D）的能力，如ChIP所示。用LPS（1μg/ml）和LXR配体（GW3965，1μM）处理初级巨噬细胞1h。用抗LXR或NCoR抗体或对照IgG进行ChIP分析。使用iNOS启动子特异性引物通过实时PCR分析免疫沉淀的DNA。（C） *与未治疗+对照siRNA相比，p<0.01**p<0.02 vs GW3965对照siRNA。（D）*p<0.03 vs未治疗+对照siRNA**p<0.02 vs LPS对照siRNA，***p<0.01 vs GW3965+LPS对照siRNA。结果表示为2个独立实验的平均值。误差线表示标准偏差。
图3
图3。LXRβ被SUMO-2和SUMO-3修饰
A.LXRβ被SUMO-2和SUMO-3 SUMO化。用FLAG-LXRβ、Ubc9和SUMO-1、SUMO-2或SUMO-3表达载体（如图所示）转染HeLa细胞，并用GW3965处理1h（1μM）。对全细胞裂解物进行FLAG-tag免疫印迹。B.特定siRNA敲除Ubc9阻断LXRβ的SUMO-2结合。用siControl、siUbc9（如有指示）、FLAG-LXRβ和MYC-SUMO-2表达载体转染HeLa细胞。用FLAG抗体免疫沉淀裂解的全细胞，并对FLAG-tag和SUMO2-MYC-tag进行免疫印迹。C.针对HDAC4的siRNA阻断LXRβSUMO化。用siControl、siHDAC4（如有指示）、FLAG-LXRβ和SUMO-2表达载体转染HeLa细胞，并用GW3965处理1h（1μM）。对全细胞裂解物进行FLAG-tag免疫印迹。D.LXRβ和HDAC4在物理上相互作用。用FLAG-LXRβ和Ha-HDAC4转染HeLa细胞，并用GW3965处理1h，如图所示。用HA抗体免疫沉淀全细胞裂解液（中板），用FLAG抗体检测LXRβ（上板）。在下部面板中，INPUT显示每个样本中LXRβ的相等表达。仅转染LXRβ或HDAC4（第一条和最后一条通道）的细胞作为IP的阴性对照。E.LXRβ在体外被HDAC4磺胺酰化。按照实验程序中的描述进行体外SUMO酸化试验，添加到反应HDAC4或HDAC4突变体（67-257）中，如图所示。对这些蛋白进行HA-tag免疫印迹。F.HDAC4在体内调节LXRβSUMO化。用FLAG-LXRβ、Ubc9、SUMO-2和HDAC4或HDAC4突变体（67-257）表达载体（如图所示）转染HeLa细胞，并用GW3965处理1h（1μM）。对全细胞裂解物进行FLAG-tag免疫印迹。G.HDAC4的敲除阻断MCP1的LXR反式抑制。用对照组或HDAC4特异性siRNA转染原代巨噬细胞48小时，然后在没有或存在LXR配体（GW3965，1μM）的情况下用LPS（1μg/ml）刺激6小时。实时PCR检测MCP1的表达。结果表示为两个独立实验的平均值。误差线代表标准偏差。*p<0.02 vs LPS+对照siRNA**p<0.03 vs GW3965+LPS+对照siRNA。
图4
图4。LXRβSUMO受体位点突变可消除反式阻遏，但不能消除反式激活活性
A.在转染WT FLAG-LXRβ或FLAG突变体K31、K410、K448或双突变体K410/K448的HeLa细胞中，LXR？的SUMO化试验（如图3A所示）证明，LXR-？在K410和K448处发生SUMO酸化，但在K31处不发生。B、 C.转阻遏需要LXRβK410和K448，而非激活。用iNOS-luc（B）或ABCA1-luc（C）报告质粒和LXRβ野生型表达载体转染RAW264.7细胞，或如图所示在K31、K410、K448或K410/K448中突变。转染24小时后，在没有（黑条）或存在LXR配体（GW3965，1μM，灰色条）的情况下，用DMSO（白色条）或LPS（1μg/ml）处理细胞12小时。结果表示为三个独立实验的平均值。误差线表示标准偏差。（B） *p<0.01 vs LPS**与GW3965+LPS+LXRβ野生型相比，p<0.05。（C） *p<0.03 vs pCMX。
图5
图5。内源性LXRs配体促进进入转运抑制途径
A、 B.天然LXRs配体诱导ABCA1表达并抑制iNOS激活。WT（图A和B，灰色条）和LXR的原代巨噬细胞−/−用GW3965（1μM）或5μM氧甾醇22R、22S、24（S）、25EC、24HC、25HC和27HC（A）处理小鼠（B组，黑色条）18小时。在B板细胞中，用指示的配体预处理细胞，然后用LPS（1μg/ml）处理6h。通过QPCR评估ABCA1（A）和iNOS（B）的表达。（A） *与未治疗组相比p<0.03；（B） *p<0.01 vs LPS。C.25HC和27HC的剂量反应实验。用GW3965（1μM）、25HC和27HC以增加的浓度（1μM、5μM、10μM、50μM）预处理初级巨噬细胞，然后用LPS（1μg/ml）处理6h。通过QPCR评估iNOS的表达。*与LPS相比，p<0.01。D.天然LXRs配体需要Ubc9转抑制iNOS表达。用Ubc9 siRNA（黑条）或非特异性siRNA（白条）转染原代巨噬细胞48小时，然后在不存在或存在LXR配体的情况下用LPS（1μg/ml）刺激6小时（5μM）。通过QPCR评估腹腔巨噬细胞iNOS的表达。*与对照siRNA相比p<0.05。结果表示为两个独立实验的平均值。误差线表示标准偏差。
图6
图6。NCoR和SUMOylation依赖途径在LXR和PPARγ反抑制中的基因特异性利用
A.通过表达谱分析确定受LPS或poly I:C刺激的初级巨噬细胞中LXR或PPARγ激动剂反式阻遏的基因之间的关系。根据LPS和poly I:C至少5倍的诱导以及每个PPARγ或LXR激动剂至少50%的抑制筛选基因。数据来源于（Ogawa等人，2005）。B.IL1β和TNFα的受体特异性抑制。用siRNA对照或NCoR特异性siRNA转染原代巨噬细胞48小时，然后在没有或存在LXR配体（GW3965，1γM）或PPARγ配体（罗格列酮，1μM）的情况下用LPS（1μg/ml）刺激6小时。通过QPCR评估IL1β和TNFα的表达。*与LPS相比p<0.01；**与GW3965（左面板）或Rosi（右面板）+LPS控制siRNA.C相比，p<0.01。PPARγ和LXR配体对IL1β和TNFα启动子NCoR清除的差异抑制。用LPS（1μg/ml）加或不加PPARγ（罗格列酮，1μM）或LXR配体（GW3965，1μM）处理原代巨噬细胞1h。使用抗NCoR和/或对照IgG抗体进行ChIP分析。*与未治疗组相比p<0.01；**与LPS相比p<0.08。D.PPARγ转阻遏依赖于TAB2。用siRNA对照或TAB2特异性siRNA转染原代巨噬细胞48小时，然后在没有或存在LXR配体（GW3965，1μM）或PPARγ配体（罗格列酮，1μM）的情况下用LPS（1μg/ml）刺激6小时。iNOS表达通过QPCR进行评估。*与LPS相比p<0.01；**与Rosi+LPS控制siRNA相比，p<0.01。E.Tab2在iNOS启动子上以基础状态存在，但在IL1β启动子上不存在。使用Tab2抗体或对照IgG进行ChIP分析。*与对照IgG相比，p<0.01。结果表示为两个独立实验的平均值。误差条表示标准偏差。
图7
图7。NCoR和SUMOylation依赖性反抑制的信号特异性调节
A.PPARγ和LXR激动剂抑制的信号依赖性。当LPS或poly I:C诱导时，每个图中中央部分的基因受到抑制。左侧部分的基因仅在LPS诱导时受到抑制，而右侧部分的基因只有在poly I:C诱导时才受到抑制，但仅在LPS诱导时对LXR阻遏敏感。用TLR4特异性激动剂（LPS，1μg/ml）或TLR3特异性激动药（polyI:C，50 ng/ml）处理原代巨噬细胞6h，加或不加PPARγ（罗格列酮，1μM）或LXR配体（GW3965，1μM）。通过QPCR评估IL-1β的表达。*与LPS相比p<0.02。C.LXR和PPARγ配体对iNOS基因的差异反式阻遏。原代巨噬细胞用LPS（1μg/ml）、TLR2特异性激动剂（PAM3，300 ng/ml）或poly I:C（50 ng/ml）处理6h，无论是否加PPARγ（罗格列酮，1μM）或LXR配体（GW3965，1μM）。iNOS表达通过实时PCR进行评估。*p<0.02 vs LPS（左）、Pam 3（中）、poly I:C（右）。结果表示为两次独立实验的平均值。误差线表示标准偏差。D.描述PPARγ和LXR使用的平行反式阻遏途径的模型。参见文本进行讨论。
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    Bosteels V，Janssens S。 Bosteels V等人。 Nat Rev免疫学。2024年9月17日。doi:10.1038/s41577-024-01079-5。打印前在线。 Nat Rev免疫学。2024 PMID：39289483 审查。
  • LXRα转录组的重新编程维持巨噬细胞继发性炎症反应。
    弗拉基米尔·德拉罗萨J、塔布罗C、黄Z、奥里扎奥拉MC、马丁·罗德里格斯P、斯特芬森KR、萨帕塔JM、博斯克拉、托托尼奥斯P、阿勒芒S、特雷特E、卡斯特里洛A。 Vladimir de la Rosa J等人。 高级科学（Weinh）。2024年5月；11（20）：e2307201。doi:10.1002/advs.202307201。Epub 2024年3月28日。 高级科学（Weinh）。2024 PMID：38549193 免费PMC文章。
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  • 脾脏SUMO1控制实验性脓毒症的全身炎症。
    Youssef A、Mohammed BK、Prasad A、Del Aguila A、Bassi G、Yang W、Ulloa L。 Youssef A等人。 前免疫。2023年7月13日；14:1200939. doi:10.3389/fimmu.2023.1200939。eCollection 2023年。 前免疫。2023 PMID：37520526 免费PMC文章。
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    1. Baek SH、Ohgi KA、Rose DW、Koo EH、Glass CK、Rosenfeld MG。通过NF-kappaB和β-淀粉样蛋白前体蛋白交换N-CoR辅阻遏物和Tip60辅激活物复合物链接基因表达。单元格。2002;110:55–67.-公共医学
    1. Castrillo A、Joseph SB、Vaidya SA、Haberland M、Fogelman AM、Cheng G、Tontonoz P。LXR和类收费受体信号之间的串扰介导胆固醇代谢的细菌和病毒拮抗。分子细胞。2003;12:805–816.-公共医学
    1. Chang HM、Paulson M、Holko M、Rice CM、Williams BR、Marie I、Levy DE。诱导干扰素刺激基因表达和抗病毒反应需要蛋白质脱乙酰酶活性。美国国家科学院院刊2004；101:9578–9583.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Chiang JY，Kimmel R，Stroup D.肝孤儿受体（LXRalpha）基因对胆固醇7a-羟化酶基因（CYP7A1）转录的调节。2001;262:257–265.-公共医学
    1. Costet P，Luo Y，Wang N，Tall AR。肝脏X受体/维甲酸X受体对ABC1启动子的甾醇依赖性反式激活。生物化学杂志。2000;275:28240–28245.-公共医学

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