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.2006年4月;5(4):749-57.
doi:10.1074/mcp。T500024-MCP200。 Epub 2005年12月11日。

磷酸结合标记,一种可视化磷酸化蛋白质的新工具

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磷酸结合标记,一种可视化磷酸化蛋白质的新工具

金下英治等。 分子细胞蛋白质组学. 2006年4月.
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摘要

我们介绍了两种使用醇盐桥接双核金属(即Zn(2+)或Mn(2+))复合物作为新的磷酸盐结合标签(Phos-tag)分子来可视化磷酸化蛋白质的方法。锌(2+)和锰(2+)-磷标记分子优先捕获与Ser、Thr和Tyr残基结合的磷酸单酯二价离子。一种方法是基于ECL系统,使用生物素垂饰锌(2+)-磷标记和辣根过氧化物酶偶联链霉亲和素。我们通过磷酸选择性ECL信号演示了蛋白质磷酸化状态的电印迹分析。另一种方法是基于磷酸化蛋白在带有聚丙烯酰胺结合Mn(2+)-Phos-tag的SDS-PAGE中的迁移率变化。与相应的去磷酸化蛋白质相比,凝胶中的磷酸化蛋白质可视为较慢的迁移带。我们通过磷酸亲和电泳(Mn(2+)-Phos-tag SDS-PAGE)证明了激酶和磷酸酶分析。

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