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.2005年12月1日;96(5):1086-94.
doi:10.1002/jcb.20631。

一氧化氮通过丝氨酸/苏氨酸磷酸化调节脯氨酸酶活性

附属公司

一氧化氮通过丝氨酸/苏氨酸磷酸化调节脯氨酸酶活性

阿卡迪乌斯·苏拉津斯基等。 J细胞生物化学. .

摘要

脯氨酸酶[E.C.3.4.13.9]是基质金属蛋白酶(MMP)家族的一员,是一种锰依赖性胞浆外肽酶,可裂解含有C末端脯氨酸或羟脯氨酸的亚胺基肽。它在胶原蛋白代谢、基质重塑和细胞生长中起着重要作用。一氧化氮(NO)是一种多功能的信号分子,调节许多过程,包括胶原合成和基质重塑,因此可能调节血管生成、肿瘤侵袭性和转移。因此,我们认为脯氨酸酶可能是NO调节的重要靶点。在我们的研究中,SIN I和DETA/NO被用作NO供体。两个供体都以时间依赖和剂量依赖的方式增加了脯氨酸酶的活性。在转染iNOS的细胞中,不仅NO供体的脯氨酸酶活性增加,内源性NO也增加。用选择性iNOS抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)治疗可消除iNOS的作用。然而,无论是外源性还是内源性NO,脯氨酸酶活性的增加都不会伴随着脯氨酸酶表达的增加。因此,我们怀疑脯氨酸酶磷酸化是调节酶激活的潜在机制。我们观察到NO供体处理的细胞和iNOS转染的细胞中脯氨酸酶蛋白的丝氨酸/苏氨酸磷酸化增加。为了确定NO介导脯氨酸酶诱导的途径,我们首先使用了一种cGMP激动剂8-Br-cGMP,发现8-Br-cGMP强烈而快速地刺激脯氨酸酶活性,并伴有磷酸化增加。cGMP抑制剂Rp-8-Br-pCPT-cGMP将NO供体刺激的脯氨酸酶活性降低至控制水平。为了测试MAPK通路是否参与这种NO-依赖性激活,我们使用ERK1/2抑制剂,发现它对NO供体增加的脯氨酸酶活性没有影响。这些结果表明,NO通过PKG-cGMP途径增加丝氨酸/苏氨酸磷酸化来刺激脯氨酸酶活性,但与MAPK无关,并表明炎症信号通路与基质降解终末步骤的调控之间存在相互作用。

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