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.2003年10月；52(10):1487-93.
doi:10.1136/gut.52.10.1487。

激活素A是大鼠胰腺星状细胞的自分泌激活物：卵泡抑素对胰腺纤维化的潜在治疗作用

N Ohnishi公司 1, T宫田, H Ohnishi公司, H安田, K Tamada公司, N Ueda公司, H Mashima先生, K Sugano公司
附属公司

激活素A是大鼠胰腺星状细胞的自分泌激活物：卵泡抑素对胰腺纤维化的潜在治疗作用

N Ohnishi公司等。 肠子. 2003年10月.

摘要

背景和目的：本研究旨在研究激活素A对大鼠胰腺星状细胞（PSCs）活化的影响。

方法：采用胶原酶消化和Nycodenz梯度离心法从大鼠胰腺制备PSC。通过western blotting测定平滑肌肌动蛋白表达来检测PSC的激活。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹和免疫细胞化学研究PSC中激活素A受体的存在。RT-PCR检测激活素A和转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达。用ELISA检测激活素A和TGF-β肽的浓度。用免疫细胞化学方法研究PSC中激活素A肽的存在。通过天狼星红染料结合测定胶原蛋白分泌。

结果：PSC中存在激活素A受体I和IIa。PSCs表达激活素A mRNA和分泌激活素A.激活素甲以剂量依赖性方式增强PSC活化和胶原分泌。TGF-β和激活素A相互促进PSCs的分泌和mRNA表达。卵泡抑素降低PSC TGF-βmRNA表达和TGF-α分泌，抑制PSC活化和胶原分泌。

结论：激活素A是PSC的自分泌激活剂。卵泡抑素可以通过阻断自分泌激活素A和降低TGF-β的表达和分泌来抑制PSC的活化和胶原分泌。

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数字

图1
图1
胰腺星状细胞（PSCs）激活素受体I和IIa的表达。（A） 使用PSC总RNA（1µg）作为模板，进行激活素受体I（通道1）和IIa（通道2）的逆转录聚合酶链反应。右车道是一个1 kb DNA阶梯的尺寸标记。测序证实了这些条带。（B） 使用激活素受体I（通道1）和IIa（通道2）的特异性抗体进行免疫印迹。分子标记显示在右侧。
图2
图2
荧光显微照片显示胰腺星状细胞中（A）激活素受体I型和（B）激活素受体IIa型的免疫反应性，以及相应的Nomarski图像（C，D）。钢筋40µm。
图3
图3
激活素A对胰腺星状细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达和胶原分泌的影响。（A） 顶面板：在与指定数量的激活素A孵育48小时后，对PSCs总匀浆中的α-SMA进行western blotting。激活素B增加了PSCs的α-STA表达。底部面板：用抗α-微管蛋白抗体重复印迹。作为内部对照，α-微管蛋白的表达未被激活素A改变。结果以对照组胶原蛋白浓度的百分比表示。数值为三个独立实验的平均值（SEM）（*p<0.05）。
图4
图4
胰腺星状细胞分泌的激活素A。在更换培养基后1–4天，测定培养基中激活素A的浓度。结果是三个独立实验的平均值（SEM）。
图5
图5
荧光显微镜显示胰腺星状细胞（PSC）中激活素A的免疫反应性。用抗激活素A兔多克隆抗体（B，D）和抗α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）小鼠单克隆抗体（A，C）对细胞进行双重染色。在经α-SMA精细网络结构鉴定的PSC中观察到激活素A免疫反应。棒材40µm。
图6
图6
激活素A和转化生长因子β（TGF-β）对胰腺星状细胞（PSCs）分泌和mRNA表达的相互影响。（A，B）用指定量的TGF-β（A）或激活素A（B）孵育48小时后，对PSC分泌到培养基中的激活素A-（A）和转化生长因子-β（B）浓度进行量化。结果是三个独立实验的平均值（SEM）（*p<0.05，**p<0.01）。激活素AβA亚基（C）和转化生长因子-β（D）的（C，D）mRNA表达通过逆转录聚合酶链反应在与指定量的转化生长因子β（C）或激活素A（D）孵育24小时后测定，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）mRNA的表达为对照。
图7
图7
卵泡抑素对胰腺星状细胞转化生长因子β（TGF-β）分泌和mRNA表达的影响。（A） 在与指定数量的卵泡抑素孵育48小时后，对PSC分泌到培养基中的TGF-β浓度进行量化。结果是三个独立实验的平均值（SEM）（*p<0.05，**p<0.01）。（B） 以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）mRNA表达为对照，与指定量的卵泡抑素孵育24小时后，通过逆转录聚合酶链反应测定PSC中TGF-βmRNA的表达。
图8
图8
卵泡抑素对胰腺星状细胞（PSC）活化和胶原分泌的影响。（A） 上图：在与指示量的卵泡抑素孵育48小时后，对PSCs总匀浆中的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）进行蛋白质印迹。卵泡抑素降低PSCsα-SMA的表达。底部面板：用抗α-微管蛋白抗体重复印迹。作为内部对照，α-微管蛋白的表达未被激活素A改变。结果以对照组胶原蛋白浓度的百分比表示。数值为三个独立实验的平均值（SEM）（*p<0.05）。
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