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.2000年8月15日；19(16):4342-50.
doi:10.1093/emboj/19.16.4342。

辅压蛋白SMRT和N-CoR都存在于含有HDAC3的大蛋白复合物中

J李 1, J Wang（王）, J Wang（王）, Z纳瓦兹, J M刘, 秦俊杰, J Wong（J王）
附属机构

共抑制蛋白SMRT和N-CoR都存在于含有HDAC3的大蛋白复合物中

J李等人。 欧洲工商管理硕士J. .

摘要

我们提供证据表明，辅酶抑制剂SMRT和N-CoR均存在于HeLa核提取物中估计大小为1.5-2 MDa的大型蛋白复合物中。利用传统色谱和免疫亲和色谱相结合的方法，我们成功分离出SMRT复合物，并将组蛋白脱乙酰化酶3（HDAC3）和转导蛋白（β）样I（TBL1）（一种WD-40重复序列蛋白）鉴定为纯化SMRT复合体的亚基。我们表明，含HDAC3的SMRT和N-CoR复合物可以在体外与未连接的甲状腺激素受体（TR）结合。我们进一步证明，在爪蟾卵母细胞中，SMRT和N-CoR也与大蛋白复合物中的HDAC3相关，注射抗HDAC3或SMRT/N-CoR抗体可部分缓解未相关TR/RXR的抑制。因此，这些发现确立了SMRT和N-CoR复合物是真正的含HDAC复合物，并为N-CoR和SMRT在转录抑制中发挥作用的分子途径提供了新的线索。

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数字

无
图1。SMRT和N-CoR蛋白存在于估计大小为1.5–2 MDa的大型蛋白复合物中。HeLa核提取物用Superose 6凝胶过滤柱进行分级。使用所示抗体通过western blotting分析所示组分。αN-CoR（C）抗体检测到SMRT和N-CoR蛋白。底部的箭头显示了已知分子量的校准蛋白质的洗脱位置。
无
图2。SMRT蛋白复合物的纯化。(A类)SMRT复合体净化方案图。PC，磷酸纤维素p11树脂；DEAE，DEAE–Sepharose Fast Flow树脂。(B类)用PC柱对SMRT和N-CoR蛋白质进行差异分离。注意，αSMRT和αN-CoR（N）抗体分别对SMRT和N-CoR具有特异性，而αN-CoR（C）抗体可识别SMRT和N-CoR(C类)考马斯蓝染色SDS-聚丙烯酰胺凝胶显示纯化的SMRT复合物。所示亚基的身份通过质谱测定并通过西方分析确认，如(D类). Hsc70蛋白是一种污染物，因为它也与对照IgG珠结合；10%的输入（0.2 M DEAE分数）用于（D）中的车道1。
无
图3。确认TBL1和HDAC3与SMRT复合物的关联。(A类)HDAC3和TBL1在凝胶过滤色谱中与SMRT共分。如图1所示，使用Superose 6凝胶过滤柱对HeLa核提取物进行分级，并使用所示抗体通过western blotting对所示部分进行分析。(B类)HeLa核提取物中的SMRT蛋白分别由HDAC3和TBL1特异性抗体共同免疫沉淀；1号和3号车道使用了5%的HeLa核提取物。
无
图4。TBL1和HDAC3也与N-CoR蛋白复合物相关。(A类)通过αN-CoR（N）和αN-CoC（C）抗体亲和柱亲和纯化N-CoR复合物，并通过western blotting分析相关蛋白；1号和3号车道使用了5%的HeLa核提取物。(B类)HeLa核提取物中的N-CoR蛋白也分别由HDAC3和TBL1特异性抗体共同免疫沉淀；1号和3号车道使用了5%的HeLa核提取物。
无
图5。大多数N-CoR和SMRT复合物可能含有HDAC3。(A类)HeLa核提取物与越来越多的HDAC3抗体孵育，试图从HeLa细胞核提取物中耗尽HDAC3。使用检测N-CoR和SMRT的αN-CoR（C）抗体，通过western blotting分析上清液或IP组分中SMRT和N-CoR蛋白的水平。上清液中HDAC3的水平也显示出来，而IP组分中的HDAC3无法通过西方分析确定，因为抗体重链信号与HDAC3信号重叠。(B类)免疫纯化的N-CoR复合物具有组蛋白脱乙酰酶活性。使用αN-CoR（N）和αN-CoC（C）亲和柱从HeLa核提取物中拉下N-CoR络合物或SMRT和N-CoR复合物的混合物。使用兔抗鼠IgG（第2道）作为IP的阴性对照，而αHDAC3抗体作为阳性对照。纯化的小牛胸腺核心组蛋白被标记为[三H] 乙酰辅酶A在体外通过使用纯化的重组p300 HAT结构域，然后用于测定HDAC分析。在泳道6中，TSA在脱乙酰度测定中被添加到0.5µM的最终浓度。
无
图6。HDAC3可能直接与N-CoR蛋白相互作用。(A类)图示N-CoR蛋白的已知功能结构域和五种不同的N-CoR构建体的示意图。(B类)体外翻译的N-CoR与在体外翻译HDCA3。(C类)N-CoR氨基酸1496和1965之间的区域与MBP–HDAC3相互作用在体外下拉分析。翻译并测试所示N-CoR片段与MBP–HDAC3的结合；5%输入。(D类)酵母双杂交分析HDAC3和N-CoR蛋白不同区域之间的相互作用。用Gal4-HDAC3表达构建物转化酵母，每个N-CoR片段与Gal4AD融合，并测量细胞裂解产物的β-半乳糖苷酶报告子活性。
无
图7。含有HDAC3的SMRT和N-CoR复合物与未连接的TR相互作用。HeLa核提取物与固定化GST控制蛋白或GST-TR融合蛋白孵育。然后用SDS–PAGE对上清和结合组分进行分离，并用所示抗体进行western blotting分析。车道1中的HeLa NE（核提取物）和车道2和车道4中的FT（上清液）相当于用于下拉的20%HeLa核提取物。
无
图8。含HDAC3的SMRT和N-CoR复合物在进化过程中是保守的，并且参与了未连接的TR/RXR所施加的抑制。(A类)凝胶过滤分析爪蟾卵母细胞提取物表明爪蟾HDAC3也存在于估计大小为1.5–2 MDa的大型蛋白质复合物中。(B类)协会爪蟾HDAC3带爪蟾共同免疫沉淀实验显示SMRT和N-CoR的同源物。爪蟾卵母细胞提取物用对照兔抗鼠IgG抗体（IgG）、αSMRT、αN-CoR（N）和αHDAC3抗体免疫沉淀，并用western blotting分析IP组分。(C类)通过微量注射抗HDAC3和SMRT/N-CoR抗体，部分缓解未标记TR/RXR的抑制作用爪蟾通过引物延伸分析（Expt）测定了该报告人的卵母细胞和特异性转录物。通过表达TR和RXR，建立了非连锁TR/RXR的抑制作用爪蟾通过显微注射相应的mRNA来获得卵母细胞。这里使用的所有抗体都是亲和纯化的，并以60 ng/µl（18.4 nl/卵母细胞）的浓度注射。对照组（Ctrl）是使用H4引物从内源性组蛋白H4 mRNA中提取的引物延伸产物，用作负载对照。
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    1. Alland L.，Muhle，R.，Hou，H.，Jr，Potes，J.，Chin，L.，Schreiber-Agus，N.和DePinho，R.A.（1997）N-CoR和组蛋白脱乙酰酶在Sin3-介导的转录抑制中的作用。《自然》，387，49-55。-公共医学
    1. Baniahmad A.、Steiner，C.、Kohne，A.C.和Renkawitz，R.（1990）鸡溶菌酶消音器的模块化结构：异常甲状腺激素受体结合位点的参与。单元格，61505–514。-公共医学
    1. Baniahmad A.、Leng，X.、Burris，T.P.、Tsai，S.Y.、Tsaii，M.J.和O'Malley，B.W.（1995）甲状腺激素受体的tau 4激活域是释放转录沉默所必需的假定辅阻遏物所必需的。分子细胞。生物学，15，76–86。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bassi M.T.等人（1999年），X连锁迟发性感音神经性耳聋，由涉及OA1和含有WD-40重复序列的新基因的缺失引起。Am.J.Hum.遗传学。，64, 1604–1616.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Casanova J.等人（1994）甲状腺激素和维甲酸受体与抑制性细胞因子的配体依赖性分离的功能证据。分子细胞。生物学，145756–5765。-项目管理咨询公司-公共医学

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