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.1999年8月10日;38(32):10217-24.
doi:10.1021/bi990787+。

人血浆内皮抑素的新糖基化形式和胶原XV的循环内皮抑素相关片段

附属公司

人血浆内皮抑素的新糖基化形式和胶原XV的循环内皮抑素相关片段

H约翰等。 生物化学. .

摘要

从人血液滤液中分离出循环延长形式的血管生成抑制剂和潜在的抗癌药物内皮抑素。免疫反应性内皮抑素由针对多肽N末端表位的多克隆兔抗血清鉴定,并通过连续色谱步骤和免疫印迹纯化。分离分子的N端和C端序列分析显示,从V(117)HLRPAR开始,内皮抑素的形式不同。分别缺乏胶原蛋白XVIII非胶原结构域1(NC-1)的最后和最后三个残基。这些多肽在T(125)(残基9)处被O-糖基化,具有粘蛋白型聚糖结构,由半乳糖N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰神经氨酸残基组成。糖苷酶水解后,通过半定量HPLC-电喷雾电离质谱(ESMS)技术进行碳水化合物分析。循环内皮抑素以唾液糖蛋白(22 000和21 841 Da+/-0.02%)和去唾液糖蛋白结构(21 710和21 549 Da+/-0.2%)的形式存在,而这两种完全脱糖基形式只有在酶培养后才能获得。所述糖基化内皮抑素可能代表胶原蛋白XVIII NC-1结构域蛋白水解途径中的中间产物,从而产生生物活性内皮抑素。此外,在血液滤液中发现了人类胶原XV的免疫反应性内皮抑素相关C末端片段。这些多肽具有N末端序列P(66)HLLPPP。和Y(81)EKPALH。胶原XV NC-1结构域。ESMS和免疫印迹分析显示三种糖基化多肽的分子量为16-21kDa。由于胶原蛋白XV和胶原蛋白XVIII之间的高度同源性及其类似的蛋白水解过程,未来的实验应揭示胶原蛋白XII-和XVI相关片段的功能相似性。

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