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.2010年12月;4(6):482-95.
doi:10.1016/j.moloc.2010.09.004。 Epub 2010年9月26日。

癌症中的磷酸蛋白质组学

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癌症中的磷蛋白组学

H C哈沙等。 摩尔肿瘤. 2010年12月.

摘要

可逆蛋白磷酸化是调节许多细胞过程的基础。激酶信号通路的异常激活通常与几种癌症有关。磷蛋白/磷酸肽富集策略和定量质谱的最新发展已经为全球磷酸化的高通量表征提供了强大的管道。如今,在一次实验中就可以分析数千种蛋白质的特定位点磷酸化事件。这种方法的潜力已经被认识到,可以表征控制肿瘤发生的信号通路。此外,化学蛋白质组学策略已被用于揭示激酶抑制剂的靶点,否则很难对其进行表征。这篇综述总结了用于磷蛋白组分析的各种方法,特别是蛋白激酶,重点介绍了关键的癌症磷蛋白组研究。

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图1
图1
定量磷酸蛋白质组学在癌症中的应用。定量磷蛋白组学可以发现癌症中异常激活的信号通路和治疗靶点。它还可以揭示突变激酶的下游效应器,从而为理解导致肿瘤发生的分子机制提供了机会。确定癌症中激酶抑制剂的细胞靶点和激酶抑制剂的非靶点效应是此类策略的其他一些有趣应用。
图2
图2
磷酸蛋白质组学的分离和富集策略。磷蛋白组是任何细胞蛋白质组的一小部分。细胞蛋白质组的复杂性阻碍了磷酸蛋白的分析。因此,在通过质谱进行磷酸蛋白质组分析之前,必须使用分馏/富集策略降低蛋白质组的复杂性。酪氨酸磷酸肽通常使用基于免疫亲和性的方法(包括抗磷酸酪氨酸抗体)进行富集,而丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸肽类都可以使用固定金属亲和色谱(IMAC)或二氧化钛进行富集。虽然使用SILAC进行代谢标记是分析癌细胞系的首选方法,但体外化学标记方法(如iTRAQ)是分析组织样本中磷酸蛋白质组的首选方法。在基于SILAC的策略中,磷酸化程度的相对差异在MS水平上进行量化,而在基于iTRAQ的策略中则使用MS/MS片段期间释放的报告离子进行定量。
图3
图3
使用质谱对蛋白激酶和磷酸蛋白质组进行全球分析的关键里程碑。在过去的十年中,磷蛋白组的全球分析方法发展迅速。在最初尝试进行全球磷酸化蛋白质组学研究的不到十年时间里,该领域已经从能够在单个实验中研究几个蛋白质发展到能够在单个试验中分析成千上万个磷酸化位点和几乎整个细胞的激肽组补体的动力学。只有代表性研究被强调,因为即使是开创性研究的数量也太大,无法在此描述。
图4
图4
识别激酶抑制剂的细胞靶点。固定化激酶抑制剂可用于识别其细胞靶点。这种抑制剂的靶选择性可以通过培养SILAC方法标记的细胞的裂解产物来确定,该细胞仅使用基质或小分子抑制剂与基质结合。两种状态下非特异性结合物的相对丰度不变,而在与基质结合的小分子抑制剂的背景下选择性地观察到相对激酶靶点。结合此策略的磷酸肽富集将进一步揭示任何富集激酶的内源性磷酸化状态。

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