CXCR4拮抗剂普列沙弗增强利妥昔单抗对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株的作用

摘要

背景

淋巴瘤是一类血液肿瘤，可分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金恶性淋巴瘤。非霍奇金淋巴瘤是这两种淋巴瘤中最常见的，侵袭性弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）至少占成人非霍奇金淋巴瘤的25-30%[1].

DLBCL是一种病因不明的临床、形态学和分子异质性疾病[2]。目前用于DLBCL的治疗是将抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗与三种化疗药物，即环磷酰胺、阿霉素和长春新碱，以及皮质类固醇泼尼松（R-CHOP）相结合的多药疗法。在DLBCL患者的治疗方案中添加利妥昔单抗可显著改善治疗结果[三–6]。尽管如此，30-40%的DLBCL患者在接受R-CHOP治疗后出现顽固性疾病或复发[7]。复发患者通常采用大剂量化疗结合自体干细胞移植治疗。然而，由于年龄、合并症或难治性疾病，大多数患者不符合这种治疗策略。因此，这部分患者无法治愈，因此需要其他治疗方法。[8]

利妥昔单抗是一种基因工程嵌合单克隆抗体，由人Fc区和鼠可变区组成，识别大多数正常和恶性B细胞上大量存在的CD20细胞表面分子[9]。利妥昔单抗如何发挥其治疗作用仍不确定。一些机制已经被提出，包括补体依赖性细胞毒作用（CDC）、抗体依赖性细胞毒性作用（ADCC）和凋亡。有趣的是，C-X-C趋化因子受体4型（CXCR4）拮抗剂普列克沙（AMD3100）增强了利妥昔单抗在相关类型淋巴瘤（Burkitt淋巴瘤）中的作用[10,11]。这种CXCR4拮抗剂显示出低风险的安全性，已被美国食品和药物管理局（FDA）批准用于非霍奇金淋巴瘤患者的临床治疗，并与粒细胞集落刺激因子（G-CSF）联合用于动员造血干细胞[12]。普列沙芬是一种特异性小分子CXCR4抑制剂。更具体地说，普利沙福是一种双环可逆抑制剂，通过与CXCR4的细胞外结合口袋结合，阻断CXCR4受体配体C-X-C趋化因子配体12型（CXCL12或SDF-1α）的结合[13].

CXCR4是一种与B细胞淋巴细胞生成有关的细胞表面受体，CXCR4缺陷小鼠的B细胞淋巴细胞严重受损证明了这一点[14,15]。在正常和许多恶性造血细胞上表达；包括非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）[16,17]。最近，据报道，CXCR4过度表达与静脉注射DLBCL细胞的小鼠存活率降低有关[18]重要的是，94例接受含利妥昔单抗治疗的DLBCL患者预后不良[18]以及468/275名接受R-CHOP方案治疗的DLBCL患者的训练/验证队列[19].

CXCR4-CXCL12轴似乎与几种与肿瘤发病相关的生物学功能有关。激活肿瘤细胞表面的CXCR4可以诱导增殖和促生存信号通路，阻断CXCR4受体，从而抑制肿瘤增殖[11,20]。CXCR4阳性造血细胞的迁移由基质细胞产生的CXCL12梯度促进[16]。与此一致，阻断CXCR4可抑制肿瘤转移[21].

恶性造血细胞的化疗保护显示是通过与例如骨髓中周围基质细胞的相互作用诱导的。因此，这种相互作用被认为与治疗耐药性和最小残留疾病的持续性有关。[22]通过抑制CXCR4与其配体CXCL12的相互作用，一些研究报告称基质细胞的促瘤信号可以被逆转，从而导致更多的化疗敏感性肿瘤细胞，并增加自发凋亡率[23–26]。因此，阻断CXCR4-CXCL12轴可能是增强DLBCL中当前使用的治疗方案效果的一种有希望的方法。

据我们所知，在DLBCL中从未评估过CXCR4拮抗剂普莱克斯与单克隆抗CD20抗体利妥昔单抗联合使用的效果；也不在体外，也不是体内。在本研究中，我们评估了在体外通过比较单一药物和联合治疗对DLBCL细胞株的生长抑制水平，研究普立沙芬和利妥昔单抗联合治疗的效果。对DLBCL细胞株进行基于流式细胞术的分析，以研究药物对CXCR4表面表达和凋亡阶段的联合和单独作用。因此，本研究研究了利妥昔单抗和/或普莱克斯对CXCR4表达的影响，以及CXCR4的表达如何影响药物效应在体外.

方法

结果

CXCR4拮抗剂普利沙芬显著增强利妥昔单抗对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株的生长抑制作用

为了确定普立沙芬是否调节利妥昔单抗诱导的生长抑制作用，用利妥昔单抗（10μg/mL）和/或普立沙韦（500μM）处理RIVA和FARAGE细胞长达72小时，并在药物暴露0小时、24小时和72小时后，用台盼蓝排除法计算活细胞数。对于这两种细胞系，利妥昔单抗单药治疗导致24小时至72小时后活细胞数量显著减少(对 < 0.05），普立沙芬单药治疗72小时后显著减少(对 < 0.05）（图1). 值得注意的是，通过同时服用普莱沙芬和利妥昔单抗，显著减少(对 < 与未经处理的对照组和单剂处理组相比，RIVA在24小时-72小时后观察到活细胞数量（图1a个)FARAGE为72小时（图1亿). 为了评估药物相互作用的类型，应用了利妥昔单抗和普立昔福之间相互作用的线性混合效应模型，揭示了RIVA可以在24小时-72小时假设协同作用(对 < 0.001）和72小时（对于FARAGE）(对 < 0.01).

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图1

普立沙芬以药物序列依赖的方式显著增强利妥昔单抗的生长抑制作用。弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系RIVA(一)和农场(b)暴露于抗CD20抗体利妥昔单抗（10μg/mL）或CXCR4拮抗剂普利沙芬（500μM）的单剂治疗以及联合治疗，无论是伴随治疗还是24小时延迟治疗。给药后0 h、24 h和72 h用台盼蓝排除法测定活细胞数。水平线代表三个独立实验的平均值，每个几何符号代表一个计数复制。RTX之前和PLX优先不包括在24小时图中，因为它们相当于RTX公司和PLX公司组，在这个时间点。使用两级线性混合效应模型确定各组之间的统计显著性。当使用伴随治疗作为参考时(RTX+PLX): *对 < 0.05, ***对 < 0.001，无显著差异；使用未经处理的对照品时(未经处理)作为参考：^# 对 < 0.05,^## 对 < 0.01，^### 对 < 0.001，无显著差异；RTX，利妥昔单抗；PLX，百合；预先给予RTX，在PLX前24小时给予RTX；PLX之前，在RTX之前24小时给予PLX

为了研究药物组合顺序是否对结果有影响，除了单药治疗和伴随用药外，还按24小时间隔顺序添加药物。对于这两种细胞系，伴随治疗（图1). 通过依次添加利妥昔单抗和普莱沙福，与同时暴露72小时相比，这两种细胞系活细胞数量的减少明显更小(对 < 0.001). RIVA是一种对利妥昔单抗更敏感的细胞系，其结果尤其显著。与未经治疗的对照组相比，联合用药导致活细胞数量减少了4倍，而最初服用利妥昔单抗后再服用普立昔单抗24小时仅减少了1.8倍（图1a个). 因此，我们得出结论，利妥昔单抗和普立沙芬的联合用药顺序很重要，联合用药优于序贯用药。因此，随后的实验中包括了联合用药。

进行基于MTS的分析，以进一步研究在利妥昔单抗治疗DLBCL细胞时添加普莱沙韦的效果。在添加含MTS的试剂前48小时，分别对RIVA和FARAGE细胞进行5点2倍的连续稀释（利妥昔单抗：4.17-66.67μg/mL；普莱克斯：208.33-333.33μM），并在2小时后在492 nm处读取吸光度。与未经处理的对照组相比，对于这两种细胞系，利妥昔单抗单药治疗导致所有检测浓度的代谢活性细胞数量减少（图2). 相反，普列沙韦单药治疗在低浓度下仅显示出很少或没有效果，而与未治疗对照组相比，在最高浓度下，代谢活性细胞的数量减少非常明显（图2). 然而，高浓度普列沙韦的作用是否是由于一般细胞毒性，尚待测试。两种细胞系的药物诱导反应模式非常相似，最佳治疗选择取决于所用药物的浓度。对于应用于两种细胞系的大多数浓度（C3-C5），联合治疗超过了相应浓度利妥昔单抗诱导的效果（图2). 所有试验浓度的联合处理都超过了普立沙芬单剂处理的效果；除最高浓度外，未观察到明显差异（图2).

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图2

普立沙芬以药物浓度依赖的方式显著增强利妥昔单抗的生长抑制作用。弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系RIVA(一)和农场(b)将抗CD20抗体利妥昔单抗（4.17-66.67μg/mL）和/或CXCR4拮抗剂普列沙韦（208.33-333.33μM）的两倍系列稀释液暴露48小时。联合用药时，给予相应浓度的药物（即C1+C1、C2+C2等）。通过基于MTS的实验获得空白校正吸光度值。数据表示为至少三个技术副本的平均值，每个单独的副本表示为几何符号。PLX，百合；RTX、利妥昔单抗

总之，我们观察到，CXCR4拮抗剂普列克沙可以增强利妥昔单抗在DLBCL细胞系中的生长抑制作用，可能以协同方式，对表现出较高利妥昔单抗敏感性的细胞具有更显著的作用。此外，我们证明了联合治疗的效果依赖于剂量和药物序列，联合用药优于序贯用药。

普立沙芬与利妥昔单抗联合使用显著增加凋亡/死亡弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞的比例

为了探讨药物对RIVA和FARAGE细胞的作用机制，应用利妥昔单抗（10μg/mL）和/或普利沙芬（500μM），48 h后用流式细胞仪进行凋亡分析，用7-AAD结合Annexin V区分活细胞（7-AAD⁻/膜联蛋白V⁻)，早期凋亡细胞（7-AAD⁻/膜联蛋白V⁺)和晚期凋亡/死亡细胞（7-AAD⁺/膜联蛋白V⁺)彼此之间。

根据增殖实验结果，普立昔福与利妥昔单抗联合用药显著增加了早期凋亡的比例(对 < 0.001）以及晚期凋亡/死亡细胞(对 < 0.05），相对于单剂治疗（图三)表明凋亡是药物反应机制的一部分。至于增殖实验，联合治疗对低利妥昔单抗敏感性FARAGE细胞的凋亡状态的影响并不明显（图3立方厘米).

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图3

在利妥昔单抗治疗中添加普莱沙芬显著增加了凋亡细胞的比例。将抗CD20抗体利妥昔单抗（10μg/mL）和/或CXCR4拮抗剂普列沙弗（500μM）注射到弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系RIVA(一)和农场(b). 48小时后，使用7-AAD和PE结合的Annexin V组合对细胞进行基于流式细胞术的分析。显示了每个细胞系的一个代表性实验，数字表示每个象限中细胞的百分比。(c（c）)早期凋亡和晚期凋亡/死亡细胞的分数总结为两个独立实验±SEM的平均值，每个实验包含技术性的三倍。使用两级线性混合效应模型确定各组之间的统计显著性*对 < 0.05; **对 < 0.01; ***对 < 0.001; RTX，利妥昔单抗；PLX，百合；Q1，死细胞（AnnexinV⁻/7-AAD公司⁺); Q2，晚期凋亡/死亡细胞（AnnexinV⁺/7-AAD公司⁺); Q3，早期凋亡细胞（AnnexinV⁺/7-AAD公司⁻); Q4，活细胞（附录五⁻/7-AAD公司⁻)

综上所述，与单药治疗相比，当普利沙芬与利妥昔单抗同时给药时，早期和晚期凋亡的DLBCL细胞比例显著增加。

普立沙芬诱导弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系CXCR4荧光强度显著降低

最近有报道称，在一小组非霍奇金淋巴瘤患者中，骨髓CXCR4表达的治疗后减少与良好的治疗反应和显著更好的预后相关[32]，我们想研究普利沙芬（500μM）和/或利妥昔单抗（10μg/mL）对CXCR4细胞表面表达水平的影响。这是通过基于流式细胞术的RIVA和FARAGE细胞分析在药物添加后48小时进行的。与未经治疗的对照组相比，两种细胞系在普莱沙韦单药治疗后的CXCR4荧光强度中位数均显著降低(对 < 0.001）（图4)，对利妥昔单抗更敏感的RIVA细胞的下降尤其明显（图4a类). 利妥昔单抗联合治疗对普利沙福诱导的减少没有显著影响(对 > 0.05）（图4).

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图4

普莱克斯暴露后，CXCR4荧光强度中位数显著降低。弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系RIVA(一)和农场(b)暴露于抗CD20抗体利妥昔单抗（10μg/mL）和/或CXCR4拮抗剂普利沙因（500μM）48 h，然后通过流式细胞术测定CXCR4荧光强度。水平线代表三个独立实验的平均值，每个几何符号代表一个技术复制品。使用两级线性混合效应模型确定各组之间的统计显著性***对 < 0.001; 无显著差异；MFI，荧光强度中值；RTX，利妥昔单抗；PLX，普莱克斯

总之，普利沙芬诱导CXCR4荧光强度中位数降低，当利妥昔单抗用于DLBCL细胞治疗时，这一点没有显著改变。

讨论

CXCR4是DLBCL的一个有趣靶点，因为最近在一组R-CHOP治疗的DLBCL患者中，该受体的过度表达与不良预后相关[19]。值得注意的是，CXCR4拮抗剂可以用作潜在的药物增敏剂，因为治疗诱导的CXCL12通路激活可能通过几个过程参与获得性耐药机制，包括诱导癌细胞存活、侵袭和干细胞表型[33].

在这个在体外在对DLBCL细胞株的研究中，我们研究了在抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗（一种已纳入DLBCL标准治疗方案中的免疫治疗化合物）中添加CXCR4拮抗剂普莱克斯的效果。普立沙芬对利妥昔单抗诱导的肿瘤细胞增殖数量减少的影响取决于药物浓度；但对于大多数被测浓度，普利沙芬显著增强了利妥昔单抗的作用（图2). 在检查利妥昔单抗和普立沙芬之间的相互作用时，证实可以假设协同作用。这可能很有效体内也。胡等。[11]结果表明，普立昔布对播散性Burkitt淋巴瘤模型中的利妥昔单抗的疗效（以中位生存时间衡量）因普立昔福而增强；尽管O'Callaghan等。[10]没有发现普莱沙芬对Burkitt淋巴瘤细胞的存活率有影响在体外他们发现，无论是作为单一药物治疗，还是与利妥昔单抗联合使用，普立昔福与利妥西单抗联合应用时体内与利妥昔单抗单药治疗相比，播散性Burkitt淋巴瘤小鼠的存活率显著提高，表明联合使用这两种药物具有显著的临床效果。O'Callaghan使用的低剂量普立沙芬（10μM）等。很可能解释了在体外效应；在低剂量下，我们也没有观察到普立曲的任何作用（图2).

然而，CXCR4拮抗剂对利妥昔单抗疗效的增强作用并不局限于普莱沙芬。Beider最近的一项研究等。[34]在Burkitt淋巴瘤细胞系研究中，在利妥昔单抗治疗的基础上添加CXCR4拮抗剂BKT140，显著减少了活淋巴瘤细胞的数量，也显著减少了播散性Burkitt-淋巴瘤异种移植小鼠的骨髓中的活淋巴瘤细胞数量。靶向CXCR4的另一种方法是通过pepducins，这是一种穿透细胞的脂肽CXCR4拮抗剂。奥卡拉汉等。[10]观察到，当与CXCR4拮抗肽结合时，利妥昔单抗诱导的Burkitt淋巴瘤细胞系和原代CLL细胞凋亡作用显著增加；与单独使用利妥昔单抗治疗相比，该治疗策略还能够提高播散性Burkitt淋巴瘤异种移植小鼠的存活率。

除了增强利妥昔单抗的作用外，抑制CXCR4还可以增强R-CHOP方案的其他成分的作用。李等。[35]探讨CXCR4拮抗剂T22对体内环磷酰胺治疗黑色素瘤细胞肺转移的疗效，显示出协同药物相互作用。在急性淋巴细胞白血病中，普利沙芬被证明能增强长春新碱的疗效在体外[36]和体内[37]有趣的是，在长春新碱治疗中加入普利沙芬后，ALL移植小鼠的生存期延长[37]。普立沙芬还可以使肿瘤细胞对阿霉素敏感。在一个在体外Azab进行的研究等。[23]当肿瘤细胞与骨髓基质细胞的相互作用被普利沙芬阻断时，多发性骨髓瘤细胞对阿霉素更敏感。这些观察结果表明，当CXCR4拮抗剂与完整的R-CHOP方案联合使用时，可能会发挥更有利的作用，从而使CXCR4抑制成为DLBCL中已经实施的R-CHOP治疗的一个有希望的补充。

一期临床试验({“类型”：“临床试验”，“属性”：{“文本”：“NCT00694590”，“term_id”：“ncT00694580”}}NCT00694590号)在24例先前治疗但复发的CLL或小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）患者中进行了研究，目的是研究普立沙芬是否使肿瘤细胞对利妥昔单抗诱导的杀伤敏感。重点是监测在利妥昔单抗的标准治疗中添加普利沙芬的安全性和疗效，主要目标是确定联合治疗中的最大耐受普利沙芬剂量。根据安德里索斯的摘要等。[38]显示了CLL患者的初步结果，并测试了0.32 mg/kg的最大普立沙星浓度，联合治疗耐受性良好，部分患者出现了部分缓解。希望这将导致普立沙芬与R-CHOP联合进行进一步的临床检查。

我们研究中主要使用的普立沙芬浓度相当高（500μM）；然而，在这个浓度下，可以假设与利妥昔单抗有协同作用，而单剂普立昔治疗似乎对淋巴瘤细胞没有毒性（图1). 对于接受0.32 mg/kg皮下注射普利沙芬治疗的健康人类志愿者，估计其最大血浆浓度为1000μg/L（约2μM）[39]。相比之下，造血干细胞动员和随后的自体移植推荐0.24 mg/kg的剂量（皮下注射）。因此，我们的结果表明，为了产生协同效应，可能有必要提高临床环境中使用的普利沙芬的浓度，使其浓度高于使用普利沙因治疗的个体血液中的浓度。然而，许多因素在更复杂的临床环境中发挥作用，并可能影响药物相互作用，从而影响协同作用所需的浓度。

在本研究中，我们观察到普利沙福和利妥昔单抗的联合给药非常重要（图1); 如果要测试普利沙芬是否纳入DLBCL治疗方案，则观察结果尤其相关。为了支持这一观察，Kozin等。[40]证明联合治疗优于序贯给药，表明在乳腺癌和肺癌小鼠异种移植模型局部照射后立即用普立沙芬治疗可显著抑制肿瘤再生长，而照射后5天服用普利沙可使普利沙因无效。

在探索药物作用的机制时，我们观察到，与利妥昔单抗和普莱沙芬联合治疗后，凋亡细胞的比例增加（图三). 这意味着凋亡诱导是使DLBCL细胞接受普莱沙芬联合利妥昔单抗治疗时观察到的增强效应的一个促成因素。根据Beider等。[34]观察到CXCR4拮抗剂BKT140逆转利妥昔单抗诱导的Burkitt淋巴瘤细胞的细胞阻滞，表明联合治疗后晚期凋亡/死亡细胞的数量显著增加，凋亡caspase3通路的激活增加。

普列沙芬的治疗效果可能是双重的；除了其直接致敏特性外，普莱沙福还可能通过抑制肿瘤细胞归巢至骨髓和动员肿瘤细胞至外周血，使表达CXCR4的肿瘤细胞更容易被利妥昔单抗诱导的根除[41,42]。与此相一致，贝德尔等。[34]观察到表达CXCR4的肿瘤细胞的存活和增殖受到基质的支持，并且这种骨髓基质细胞诱导的对伯基特淋巴瘤细胞的保护可以被CXCR4拮抗剂BKT140逆转，增加利妥昔单抗诱导的肿瘤细胞死亡。因此，Buchner等。[43]证明CXCR4拮抗剂可消除基质细胞诱导的CLL细胞保护作用，从而提高利妥昔单抗诱导的CDC的疗效。

最近，据报道，非霍奇金淋巴瘤患者在治疗后骨髓CXCR4表达降低，反应良好，预后显著好转[32]。因此，我们研究了药物对CXCR4表面表达水平的诱导作用，并发现普利沙芬可诱导CXCR4荧光强度的降低，如流式细胞术所测（图4). 这可能表明普利沙因诱导CXCR4内化或因普利沙因结合而掩盖受体；但在这两种情况下，都表明普莱沙韦降低了CXCR4受体的可及性。因此，我们观察到，联合治疗对RIVA细胞系更有效，这不仅是因为该细胞系对利妥昔单抗的敏感性更高，而且还因为更多的普立沙芬分子与RIVA细胞结合，和/或普立沙菲诱导RIVA细胞表面CXCR4的更大下调。基姆等。[44]和莫雷诺等。[18]通过流式细胞术评估，建议普立沙芬治疗分别引起骨髓瘤和DLBCL细胞表面定位CXCR4的内化；而Fricker等。[45]使用基于流式细胞术的抗CXCR4抗体结合评估作为普利沙芬与CXCR4结合的间接测量。也使用流式细胞术，Schols等。[46]更彻底地研究了T细胞淋巴母细胞淋巴瘤细胞中普莱沙芬、抗CXCR4抗体和CXCR4受体之间的相互作用。他们报告称，普列沙芬与CXCR4受体的结合抑制了抗CXCR4抗体的结合，并宣布没有发生CXCR4内化，他们后来通过荧光显微镜观察稳定转染的U87.CD4细胞表达GFP-coupled CXCR4证实了这一点[47]。因此，在我们的研究中观察到的普利沙福诱导的CXCR4荧光强度降低很可能是对受体结合普利沙芬的测量，而不是由于受体内化。请注意，Beider等。[34]观察到Burkitt淋巴瘤细胞与骨髓基质细胞的相互作用增加了CXCR4的肿瘤细胞表面表达。因此，普利沙芬对可用肿瘤细胞CXCR4受体数量的影响可能是直接通过受体阻断和间接通过破坏肿瘤-基质细胞相互作用，阻止基质诱导的CXCR4表达增加。

诊断为ABC-DLBCL的患者预后不佳[48]。ABC-DLBCL的一个常见特征是由于中央转录因子NF-kB上游编码通路成员的基因中的增益/损失功能突变导致NF-kB信号通路的结构性激活[49]。值得注意的是，NF-kB可以诱导CXCR4的转录，而CXCR4通路的活性可以导致NF-kB的核积累[50,51]。因此，陈先生等。发现CXCR4高表达水平与ABC亚型之间的关联[19]，而Shin等。报告DLBCL样本中NF-kB高表达与CXCR4表达相关[52]。通过破坏CXCR4和NF-kB之间的正反馈回路，CXCR4拮抗剂普利沙福可能会抵消NF-kB信号通路的失调。作为支持，黄等。观察到骨肉瘤细胞用普莱沙芬预处理可以减弱CXCL12诱导的NF-kB启动子活性增加[53]，口腔鳞状细胞癌也有类似结果[54].

与ABC-DLBCL诊断的患者一样，双发淋巴瘤患者的预后较差[55]。最常见的是，双发淋巴瘤是GCB亚型，其特征是同时发生染色体易位MYC公司和BCL2级导致对这些致癌基因的放松管制，从而导致对细胞周期过程和凋亡的放松管制[56,57]。诊断为GCB-DLBCL患者的癌细胞经常对PI3K/Akt信号依赖，而Myc的降解可以被Akt诱导的GSK-3β失活所抑制，而Bcl-2的隔离可以被Abt诱导的促凋亡蛋白Bad磷酸化所破坏[49,58,59]。由于PI3K/Akt信号通路是CXCR4信号通路的核心[51]，普利沙福可能会减弱易位诱导的MYC公司和BCL2级陈同意等。观察到DLBCL肿瘤标本CXCR4阳性与高表达MYC公司以及BCL2级[19]; 而Hatano等[60]显示c-Myc表达降低和Mao等。[61]普莱克斯给药后，前列腺癌细胞和脑组织中Bcl-2表达降低。因此，普力沙芬还具有作为双发淋巴瘤患者辅助治疗的潜力。

结论

基于这项研究的有希望的发现，这意味着CXCR4拮抗剂普列沙佛协同增强利妥昔单抗对DLBCL细胞的抗增殖/促凋亡作用，进一步探索利妥昔单抗与CXCR4对抗联合的作用似乎很有意思。如果我们的研究结果在临床上是可重复的，那么在R-CHOP方案中添加普立沙芬可能会减少耐药性的发展，并最终提高患者的生存率；通过联合协同作用的药物，治疗效果可能会增加或保持，同时通过服用低剂量的药物降低药物引起的毒性[29].

缩写

7-AAD，7-氨基-放线菌素；急性淋巴细胞白血病；CDC，补体依赖性细胞毒性；慢性淋巴细胞白血病；CXCL12，C-X-C趋化因子受体4型；CXCR4，C-X-C趋化因子配体12型；弥漫性大B细胞淋巴瘤；HS，汇集人类AB血清

致谢

参与者信息

Linn Reinholdt，电子邮件：kd.nr@tdlohnier.nnil.

玛丽亚·巴赫·劳尔森，电子邮件：kd.ua.nilc@nesrual.hcab.airam公司.

亚历山大·施密茨，电子邮件：kd.nr@ztimhcs.xela.

朱莉·斯特夫·博德克，电子邮件：kd.nr@rekdeob.j.

拉斯·霍特·雅各布森，电子邮件：kd.nr@j.essal公司.

马丁·博格斯特德，电子邮件：kd.nr@detsgeob.nitram公司.

汉斯·埃里克·约翰森，电子邮件：kd.nr@jeah.

凯伦·戴布克，电话：+45 97 66 38 68，传真：+45 9766 63 23，电子邮件：kd.nr@reakbyd.k, 网址：http://www.blodet.dk.

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