埃博拉病毒被包裹，属于该家族的负链RNA病毒丝状病毒科。这些病毒的基因组约为19 kb，已知编码八种蛋白质，即核蛋白（NP），VP35、VP40、糖蛋白（GP）、可溶性GP、VP30、VP24和L（聚合酶）蛋白质(1). 埃博拉病毒感染经常导致扎伊尔严重出血热和埃博拉病毒流行亚型导致的死亡率超过80%(1，2).肺结核的病理特征和免疫反应特征致命和非致命的人类埃博拉病毒感染已经开始具有特征的(三–5). 此外，埃博拉病毒的机制病毒引起出血和休克的研究正在开始。最近的报告表明免疫介导的病理学(三)以及由特定病毒蛋白介导的病理学。膜结合GP被提议用于介导细胞毒性内皮细胞(4)，而可溶性GP被提议抑制早期中性粒细胞活化(5). 然而，后一种机制是有争议的(6). 全面了解埃博拉病毒的发病机制感染，重要的是通过以下途径进一步研究其机制病毒与宿主相互作用的方式，包括病毒破坏了宿主的抗病毒反应。
宿主抗病毒反应的一个重要组成部分是I型IFN系统。针对病毒感染合成I型干扰素；双链RNA（dsRNA）或病毒感染激活潜伏转录因子，包括IRF-3和NF-κB，导致I型干扰素、干扰素α和干扰素β的转录上调，基因。分泌的I型干扰素通过一个共同的受体发出信号，激活JAK/STAT信号通路。这种信号刺激干扰素敏感基因的转录，包括编码抗病毒蛋白，并导致诱导抗病毒状态。I型干扰素诱导的抗病毒蛋白包括dsRNA-依赖性蛋白激酶R（PKR），2′，5′-寡腺苷酸合成酶（OAS）和Mx蛋白(7–10).
许多病毒已经进化出破坏宿主IFN反应的机制。例如，单纯疱疹病毒（HSV-1）蛋白ICP34.5抵消PKR介导的翻译起始磷酸化因子eIF-2α，阻止IFN诱导的阻滞的建立蛋白质合成(11). 在负链RNA病毒中已经确定了不同的抗IFN机制(12，13). 首先甲型流感病毒NS1蛋白在病毒感染细胞(12). 随后，SV5的V蛋白被显示针对STAT1进行蛋白酶体介导的降解，防止来自I型和II型干扰素受体的信号(13，14). 也，仙台病毒C蛋白被发现可以阻断I型和II型干扰素发出信号并阻止建立抗病毒状态(15–17). 最近，麻疹病毒感染被证明可以阻止诱导产生I型干扰素(18). 此外，牛的呼吸系统已证明合胞病毒NS1和NS2蛋白具有功能共同对抗I型干扰素反应(51).
由负链RNA病毒是甲型流感病毒NS1蛋白。A类突变型流感病毒，流感delNS1病毒，缺乏NS1 ORF因此，不产生NS1蛋白，在底物上生长不良哪些I型干扰素诱导的抗病毒途径是完整的(12). 这样底物包括10日龄的Madin Darby犬肾（MDCK）细胞鸡胚和老鼠。很明显流感病毒delNS1因其不能对抗干扰素介导的抗病毒反应。病毒生长类似于野生型病毒[流感A/PR/8/34（H1N1）（PR8）病毒]在6天龄鸡胚、Vero等底物上单元格和STAT1−/−鼠标，不安装有效的I型干扰素应答(12，19). 流感的失败delNS1病毒在产生IFN的底物上生长与其诱导干扰素的能力。因此，这种变异病毒感染细胞诱导大量I型干扰素，这种情况与有效抗病毒状态（参考。19; M.Salvatore、H.Zheng、T.Muster、，P.P.和A.G.-S.，未公布的结果）。这种IFN合成不会当相同的底物感染NS1时发生蛋白产生野生型PR8病毒(12). NS1的能力防止干扰素产生和促进流感生长的蛋白质产生干扰素的底物上的病毒可能与其结合单链和/或dsRNA(20–22). NS1已展示给抑制PKR和OAS的激活(21). 此外，NS1蛋白能够阻止IRF-3的病毒激活(23)和NF-κB(52),促进I型干扰素合成的中心成分。
埃博拉病毒感染的内皮细胞损害了干扰素反应，表明埃博拉病毒也可能编码干扰素拮抗剂。之后用dsRNA、IFN-α或IFN-γ处理，很少诱导与对照组相比，感染细胞中发现了IFN刺激的基因未感染细胞(24，25). 然而，这并不反映一般情况信号转导抑制；IL-1β诱导的信号传导没有在埃博拉病毒感染细胞中被抑制(24，25).
在本报告中，我们描述了一种能够识别抑制I型干扰素诱导的抗病毒反应的蛋白质。这个该检测进一步用于筛查埃博拉病毒编码的干扰素拮抗剂。该试验使用编码质粒的瞬时转染I型干扰素拮抗剂促进MDCK细胞的生长对干扰素敏感的流感delNS1病毒。因此，流感的表达病毒NS1蛋白或HSV-1 ICP34.5有效补充德尔NS1型流感病毒的生长。使用此分析，我们筛选了单个埃博拉病毒蛋白质对MDCK细胞上的流感delNS1病毒。一种埃博拉病毒蛋白，VP35发现该蛋白可补充流感病毒delNS1的生长。VP35型随后发现阻断dsRNA-和病毒介导的IFN-应答启动子和IFN-β启动子。因此VP35蛋白可能是I型干扰素的抑制剂埃博拉病毒感染细胞的反应，可能是一个重要的埃博拉病毒毒力的决定因素。
材料和方法
细胞和病毒。
MDCK和293细胞保存在DMEM/10%FBS中细胞保存在DMEM/0.3%BSA（ICN）中。流感delNS1病毒在33°C下在7天龄的鸡胚中繁殖(19).仙台病毒Cantell株在10天龄时在37°C下繁殖鸡胚。
质粒。
描述了NS1表达质粒pCAGGS-PR8 NS1 SAM(23).NS1表达质粒pCMV-PR8 NS1 SAM通过亚克隆产生将NS1 ORF从pCAGGS-PR8 NS1 SAM转换为pcDNA3（Invitrogen）。HSV-1γ134.5基因被切除Nco公司我和巴姆HI来自质粒pBR4789（B。芝加哥大学Roizman），其中包含HSV-1巴姆HI S1片段，亚克隆到pCAGGS(26).
埃博拉病毒株Mayinga（扎伊尔亚型）用于克隆（核苷酸编号指埃博拉病毒扎伊尔基因组，GenBank加入编号{“type”：“entrez-notide”，“attrs”：{“text”：”AF086833“，”term_id“：”10141003“，”term_text“：”AF0086833“}}AF086833型). ORF和NP、VP35和VP30基因的非翻译区通过逆转录聚合酶链式反应，特异性引物包含适当的限制场所。产品已插入表达载体pcDNA3。使用插入NP巴姆你好。VP35（核苷酸3126–4175）通过使用巴姆夏威夷群岛和不是I.VP30基因（核苷酸8506-9399）是使用插入生态RI和Xho公司I.GP和从质粒pGEM-mGP7和pGEM-mGP8型(27)带有巴姆HI和Hin公司d三。这个Hin公司dIII位点变钝，插入片段在巴姆HI–高生态RV限制位点pcDNA3.1（+）（Invitrogen）。基因文库中的RNA-cDNA杂交埃博拉病毒亚型扎伊尔，马茵加株(28)习惯了扩增VP40和VP24基因。包含ORF的PCR片段VP40（核苷酸4410–5779）和VP24（核苷酸10290–11312）基因被插入生态RV限制位置pcDNA3.1（+）。克隆经DNA测序证实。
流感delNS1病毒补体检测。
MDCK细胞的高效瞬时转染是通过使用Lipofectamine 2000（LF2000）（GIBCO/BRL）。四微克使用Optimem I将指示表达质粒调节至50μl中等（GIBCO/BRL）。每次转染，调整10μl LF2000用Optimem I培养基培养至0.25 ml，并在5 ml聚苯乙烯中培养snap-cap管在室温下放置5分钟。每个50μl DNA样本加入0.25-ml LF2000/Optimem I混合物中，轻轻搅拌在室温下孵育20分钟。汇合的80厘米2用胰蛋白酶。用DMEM/10%FBS将细胞培养至12 ml（无抗生素），在桌面上以1000 rpm造粒5分钟离心，并在吸入上清液后，重新悬浮在DMEM/10%FBS（无抗生素），浓度为4×106细胞/ml。细胞的一部分（0.25 ml）将悬浮液加入35mm的组织培养皿中。在20分钟的培养期，1毫升DMEM/10%FBS（无抗生素）添加到每个DNA/LF2000混合物和DNA/LF2000/培养基混合物中添加到含有MDCK细胞的培养皿中。混合后细胞保持在37°C过夜。16至20小时转染后，细胞被感染10三流感的斑块形成单位delNS1病毒[感染多重性（moi）=0.001]体积为0.1 ml。去除接种物后，细胞保存在1.5 ml DMEM/0.3%牛白蛋白/3μg/ml胰蛋白酶中（胰蛋白酶，1:250；Difco）。
报告人基因检测。
用磷酸钙法转染293细胞(29).每次转染1×106细胞含有0.3μg干扰素刺激反应元件（ISRE）驱动的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告质粒pHISG-54-CAT(30)或小鼠IFN-β启动子驱动的CAT报告子pIFN-CAT(52), 0.3猴病毒40启动子荧光素酶报告质粒的μgpGL2-Control（Promega）和4μg所示表达质粒。
转染后24小时对细胞进行模拟处理，用40μg polyI:polyC（Amersham Pharmacia）转染LF2000符合制造商建议，或感染带有流感病毒delNS1或仙台病毒，每种病毒的moi为1.0病毒。所有方法处理的细胞都保存在DMEM/0.3%牛白蛋白。治疗24小时后，细胞采集并在Reporter Lysis Buffer（Promega）中溶解。CAT分析按说明执行(31). 荧光素酶分析使用Promega荧光素酶分析系统，根据制造商的指示。
Western Blot分析。
293个细胞被转染4μg所示质粒如上所述，使用LF2000。转染后48小时，细胞在SDS/PAGE样品缓冲液中进行裂解，并进行Western blots按照标准程序执行。甲型流感病毒用抗PR8 NS1兔多克隆抗体检测NS1蛋白抗血清5091按1:1000稀释。埃博拉病毒NP和VP35用山羊多克隆抗埃博拉病毒检测蛋白质抗血清（从Vector Laboratories购买），稀释度为1:20000。次要抗体为抗兔或抗羊抗体与辣根过氧化物酶结合。使用执行检测NEN Renaissance Western blot化学发光试剂。
Northern Blot分析。
用5μg的空载体或利用LF2000构建VP35表达质粒。二十四小时转染后，细胞感染了流感病毒delNS1或仙台病毒感染率为1。24小时后，总RNA使用TRI试剂提取（辛辛那提分子研究中心）。使用10微克总RNA进行Northern blot分析使用Quickhyb杂交溶液（Stratagene）。干扰素-β或β-肌动蛋白mRNA通过特异性杂交检测[32P] ATP标记探针。
结果
已知干扰素拮抗剂的表达对流感生长的补充作用delNS1病毒。
流感病毒delNS1在产生干扰素的细胞上生长不良，如MDCK细胞。然而，野生型PR8病毒与流感同基因delNS1病毒除了产生NS1蛋白外，会增长到较高水平MDCK细胞的滴度(12). 因此，确定是否高效转染NS1表达的MDCK细胞质粒将补充流感delNS1病毒的生长（图。). 当MDCK细胞被转染流感病毒NS1质粒，24小时后感染流感病毒delNS1在低分子量时，变异病毒生长到约1×106pfu/ml。然而，转染空质粒的细胞感染产生102pfu/ml或更低（图。).
流感病毒delNS1的生长得到短暂的补充A型流感NS1蛋白或HSV ICP34.5表达的转染质粒。MDCK细胞转染4μg空表达质粒，pCAGGS-PR8 NS1 SAM(23)，或pCAGGS-γ134.5. 20小时后，这些细胞感染了流感病毒delNS1（moi=0.001）。四十八转染后h，通过菌斑试验测定病毒滴度。结果是两个独立实验的平均值。
然后确定另一种已知的I型干扰素诱导的抗病毒反应HSV-1 ICP34.5将补充流感病毒delNS1的生长。的表达式HSV-1编码的PKR拮抗剂ICP34.5(11)明显补充了增长流感病毒delNS1（图。). 这一结果表明流感delNS1病毒生长的互补性反映了抗干扰素功能。它还表明这种互补分析可以使用鉴定抑制干扰素诱导的抗病毒药物的其他蛋白质响应。
埃博拉病毒VP35蛋白对delNS1型流感病毒生长的补充作用蛋白质。
然后使用流感delNS1病毒互补分析筛选埃博拉病毒编码的IFN拮抗剂。一个空向量NS1表达质粒或编码单个埃博拉病毒的质粒蛋白转染MDCK细胞。20小时转染后，细胞被流感病毒delNS1感染。感染48小时后，收集上清液并通过斑块试验测定病毒滴度（表). 唯一一种埃博拉病毒蛋白增强的流感delNS1病毒生长是VP35蛋白（表).时间-过程分析清楚地表明流感的增强通过VP35生长delNS1病毒（图。).
表1
| 表达蛋白 | pfu/毫升 |
|---|
| 清空矢量 | 10 |
| 国家标准1 | 1.2 × 106 |
| NP公司 | 10 |
| VP35型 | 1.9 × 104 |
| VP40型 | <10 |
| 普通合伙人 | <10 |
| sGP公司 | 20 |
| VP30（视频处理30） | <10 |
| 视频处理24 | <10 |
埃博拉病毒补充了流感病毒delNS1的生长VP35蛋白。用4μg空的MDCK细胞转染表达质粒（pcDNA3）、NS1表达质粒或埃博拉病毒VP35表达质粒。20小时后，这些细胞感染了流感病毒delNS1（moi=0.001）。病毒滴度在指定的时间通过斑块测定进行测定。
埃博拉病毒VP35蛋白的表达阻断了ISRE推广人。
确定VP35是否抑制dsRNA和病毒介导的激活IFN敏感基因表达，转染细胞带有ISRE驱动的CAT报告质粒和组成性表达，猴病毒40启动子驱动荧光素酶报告质粒。此外，用空载体NS1转染细胞表达质粒，VP35表达质粒，或作为附加对照，埃博拉病毒NP表达质粒。一天后，细胞模拟处理、转染dsRNA或感染流感病毒delNS1或仙台病毒Cantell株（已知可诱导大量干扰素的减弱菌株）。之后另外24小时，制备细胞裂解物并检测CAT活性和荧光素酶活性（图。A类). 细胞转染携带dsRNA或感染delNS1流感病毒或仙台该病毒对干扰素敏感启动子有强烈的诱导作用。什么时候？存在NS1或VP35，表达自IFN应答启动子几乎完全被阻断。ISRE诱导水平，归一化为荧光素酶活性水平，如图所示。A类.对照荧光素酶报告质粒的表达未被NS1或VP35的表达抑制（数据未显示）。埃博拉病毒NP的表达，不补充流感病毒delNS1，不抑制ISRE启动子的激活（未显示数据）。NS1、VP35和NP蛋白的表达为通过Western blotting（图。B). 这些结果表明NS1和VP35都可以阻断I型IFN的产生和/或对dsRNA治疗或病毒感染作出反应的信号。
埃博拉病毒VP35蛋白的表达抑制dsRNA-或病毒介导的ISRE诱导。(A类)折叠感应在空载体存在下的ISRE启动子-CAT报告基因，NS1表达质粒或VP35表达质粒。293个细胞用4μg指定表达质粒加0.3转染μg报告质粒pHISG-54-CAT和pGL2-Control。转染后20小时，对细胞进行模拟处理或用指示的干扰素诱导剂处理。CAT活动归一化为相应的荧光素酶活性以确定褶皱归纳。(B)Western blot显示NS1、VP35和埃博拉病毒病毒NP表达。用4μg指示质粒。48小时后，制备了细胞裂解物使用所示抗血清进行Western blot。
埃博拉病毒VP35蛋白的表达阻断了INF-β启动子。
在野生型甲型流感病毒感染的细胞中，NS1蛋白阻断诱导I型干扰素。这一块很大程度上是由于NS1阻止IRF-3激活的能力(23)和NF-κB(52),两种转录因子在刺激合成干扰素-β。反过来，IFN-β的合成也起着重要的作用在I型干扰素级联启动中的作用(32). 拉病毒因此，测试了VP35阻止激活干扰素-β启动子。
空载体、NS1表达质粒或VP35表达质粒用小鼠IFN-β启动子驱动的CAT报告子和猴病毒40启动子驱动荧光素酶报告子。当单元格随后用dsRNA转染，强烈诱导在空载体转染细胞中观察到IFN-β启动子，但当NS1或VP35表达时，这种诱导被阻断（图。A类).
埃博拉病毒VP35蛋白抑制IFN-β的诱导发起人。(A类)小鼠诱导的抑制作用干扰素-β启动子。用4μg指示表达质粒加上每个报告者0.3μg质粒pIFN-β-CAT和pGL2-对照。20小时转染后，细胞被模拟转染或转染40μg的polyI:polyC。(B)Northern印迹显示VP35介导的内源性IFN-β诱导抑制。用空载体或VP35表达转染293细胞质粒。20小时后，细胞被模拟感染（−）或感染了流感病毒delNS1（delNS1）或仙台病毒（SeV）（莫伊=1）。在10小时或转染后20小时。模拟转染细胞RNA制备于与感染后20小时的样本相同。北部斑点检测干扰素-β或β-肌动蛋白mRNA。请注意，总数较少当细胞，包括模拟感染细胞在感染后20小时溶血。
还确定了VP35是否可以阻止内源性人干扰素β启动子。细胞被转染使用空载体或VP35表达质粒，24小时后，模拟感染或感染了delNS1流感病毒或仙台病毒。感染后10或20小时，分离出总细胞RNA，并进行Northern blot检测IFN-βmRNA（图。B). VP35的表达明显阻断了内源性IFN-β启动子。感染前病毒，IFN-βmRNA未检测到。感染后，当IFN-βmRNA水平归一化为β-actin mRNA水平在流感病毒delNS1感染的细胞中，VP35的存在感染后10小时IFN-β诱导减少8倍转染后20小时为8.4倍。在仙台病毒感染细胞中，VP35的存在使IFN-β诱导在10小时时减少了6.1倍转染后20小时为5.9倍。
埃博拉病毒VP35与埃博拉病毒NP。
VP35蛋白是埃博拉病毒核糖核酸的重要组成部分合成复合物和可能与病毒NP相关(33，34).因此，可以确定埃博拉病毒VP35是否保留了其与埃博拉病毒共存时干扰素的拮抗特性NP病毒。进行ISRE报告分析，其中细胞接受空矢量、VP35单独、NP单独或VP35和NP.转染后24小时，细胞被转染dsRNA或感染仙台病毒。如前所述，转染空质粒或NP表达质粒未阻断激活ISRE启动子，但VP35的表达确实阻断了其激活（图。). 此外，VP35和NP的共同表达能够阻断ISRE对与VP35单独表达的程度相同（图。). 这些数据表明VP35，即使与埃博拉病毒NP共存，也可以作为干扰素拮抗剂。
埃博拉病毒VP35蛋白抑制I型干扰素诱导与埃博拉病毒NP共表达。干扰素诱导物的折叠诱导空载体、VP35、NP或VP35存在时由ISRE驱动的报告者再加上NP.293细胞，共转染4μg表达质粒，包括2μg编码an的质粒单个蛋白质和2μg第二个质粒（任一空载体或第二个表达质粒）加上每个报告者0.3μg质粒pHISG-54-CAT和pGL2-对照。20小时转染后，对细胞进行模拟处理或用指示干扰素诱导剂。诱导后24小时，CAT和进行荧光素酶分析。CAT活动标准化为相应的荧光素酶活性决定褶皱的诱导。
讨论
在这份报告中，埃博拉病毒VP35蛋白被鉴定为干扰素拮抗剂基于其补充生长因子的能力流行性感冒delNS1病毒。VP35与甲型流感病毒NS1蛋白，HSV-1 ICP34.5（图。)、和痘苗病毒E3L蛋白（未发表的观察结果）。每一个蛋白质已被证明会干扰干扰素诱导的抗病毒反应。甲型流感病毒NS1蛋白阻止了I型干扰素的生产(12)和激活干扰素诱导的抗病毒蛋白PKR(21，35，36)和OAS（未发布观察）。至少会抑制I型干扰素的产生部分原因是因为NS1阻断了潜在转录的激活因子IRF-3和NF-κB(23，52)参与dsRNA-以及病毒介导的IFN-β启动子激活。这些抑制功能可能由NS1结合dsRNA介导(21，23，52).痘苗病毒E3L蛋白也阻断了PKR的激活(37–40)和OAS(41). 此外，E3L表达促进干扰素存在下的痘苗病毒(40，42). HSV-1 ICP34.5通过靶向拮抗I型干扰素抗病毒反应磷酸化eIF-2α，活化PKR的产物。明确地，ICP34.5结合细胞蛋白磷酸酶1α并将其重定位于eIF-2α(11). 由此产生的eIF-2α去磷酸化抵消PKR功能(11). 因此，不能使ICP34.5在小鼠中减弱并表现出有限的组织向性(43，44). 然而，与流感病毒delNS1一样这些突变体在缺乏I型干扰素关键基因的小鼠中得到恢复信号转导或在缺乏PKR的小鼠中(45，46). 因为HSV-1 ICP34.5拯救流感病毒delNS1的生长，VP35介导的PKR阻断功能可能足以增强德尔NS1型流感病毒增长。然而，任何数量的机制都可能完成这项任务，包括对PKR功能的直接影响，I型块干扰素诱导的信号，如干扰素应答基因（包括PKR）不是转录激活的，也不是干扰素合成的障碍。我们也证明VP35与A型流感病毒NS1蛋白一样，防止dsRNA和病毒介导的含ISRE的激活促进剂（图。)和IFN-β启动子（图。). 在阻塞中病毒诱导IFN、VP35的产生将阻止其建立未感染细胞和感染埃博拉病毒的细胞都处于抗病毒状态从而促进病毒复制。
此前，VP35已被证明在埃博拉疫情中起着重要作用病毒RNA合成(33). VP35似乎是副粘病毒和鼠李病毒P蛋白（磷酸蛋白）(33),尽管丝状病毒VP35蛋白只有微弱的磷酸化(47). 另外两条非分段负链的干扰素拮抗剂SV5 V蛋白和仙台病毒C蛋白也是编码在P基因中。然而，这些副粘病毒蛋白不是相当于P蛋白。仙台病毒C蛋白由在交替启动密码子处启动并被读取的重叠ORF从备用阅读框架(48). SV5 V蛋白有一个共同点P蛋白的氨基末端；然而，由于插入非模板编码G残基的病毒聚合酶，即V蛋白具有与P蛋白不同的羧基末端。没有证据表明从埃博拉病毒VP35基因。附近没有有效长度的ORF编码C蛋白的VP35基因的5′端。此外，虽然埃博拉病毒聚合酶的mRNA编辑发生在GP基因(27，49)，没有证据表明存在RNA编辑VP35基因内的信号，也没有证据表明编辑过的VP35基因产物。根据我们的研究结果，P其他非片段化负链病毒的蛋白质也应该检查干扰素拮抗能力。
干扰素拮抗剂的产生可能有助于埃博拉病毒。在人类中，似乎合适的细胞因子反应与无症状或非致命的发展有关埃博拉病毒感染(50). 因此，影响I型病毒因子干扰素的产生可能影响病毒病理学。从干扰素拮抗剂存在的其他病毒的研究完全毒力所必需的。例如，野生型流感A/PR/8/34病毒在野生型小鼠中致病（劳埃德50=102–10三pfu），但流感病毒delNS1被严重减弱（劳埃德50> 106PFU）。然而，当干扰素诱导的抗病毒反应不存在时，如STAT1（状态1）−/−小鼠，流感delNS1病毒是毒性几乎与野生型病毒一样(12). 此外，流感带有截短NS1蛋白的病毒显示出减少野生型小鼠的复制(19). 同样，HSV-1突变体产生ICP34.5在野生型小鼠中减弱，但在干扰素中不减弱受体−/−老鼠或巴基斯坦卢比−/−老鼠(45，46). 实验性地评估VP35干扰素拮抗作用对埃博拉病毒的意义病毒的毒力，最终将有必要产生病毒保持基因组复制能力的突变体缺乏VP35编码的IFN抑制功能。开发埃博拉病毒反向遗传系统已制作(33)，将促进此类分析。它也将是有兴趣评估VP35蛋白的相对干扰素抑制效力埃博拉病毒株显示出不同水平的人类致病性。
这份手稿中描述的流感delNS1互补分析为筛选蛋白质提供了一种简单的方法干扰素拮抗功能。使用此系统，应该可以识别其他病毒的蛋白质，如埃博拉病毒VP35蛋白质，作为干扰素拮抗剂。小说的识别，病毒编码的干扰素拮抗剂将进一步加深我们对如何病原体逃避先天免疫反应。此外病毒编码的干扰素拮抗剂可能是生成干扰素的理想方式针对各种不同病毒的稳定、减毒活疫苗病原体。这种方法已经在针对流感进行调查病毒(19). 病毒编码的干扰素拮抗剂也可能成为针对重要人类病原体的新型抗病毒药物。抑制病毒干扰素拮抗剂的活性应导致感染细胞中的抗病毒途径及其伴随的抑制病毒复制。
